Aureobasidin
A Solution
金擔子素A溶液 1mg/ml
● 產品包(bao)裝：
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產品編號
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產(chan)品名稱
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產品(pin)包(bao)裝
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說明(ming)書(shu)
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AU0113S
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金擔子素A溶液(1mg/ml)
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1ml
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1份
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● Storage：-20℃
Stock solutions may be stored at-20°Cfor up to 12 months
● Specifications:
Appearance: Colorless, Clear methanol liquid
Sterilization：Filtration
Concentration：1mg/ml in methanol
● Introduction：
一、關于AbA：
金擔子素A（Aureobasidin
A，AbA）是(shi)從絲狀真(zhen)菌Aureobasidium
pullulans No. R106中(zhong)分離出來的(de)(de)環酯(zhi)肽類抗生(sheng)素，具有(you)很強(qiang)的(de)(de)抗真菌(jun)(jun)能力。AbA作用機制是抑制酵母中(zhong)AUR1基(ji)因(yin)(yin)編(bian)碼的(de)(de)肌醇磷酰胺(an)（inositol phosphorylceramide，IPC）合成酶的(de)(de)活性，干擾鞘脂合成，從而殺死(si)菌(jun)(jun)株。AbA在較低的(de)(de)濃度(du)下（0.1-0.5 μg/ml）即可對(dui)酵母產(chan)生(sheng)毒性。編(bian)碼IPC合成酶的(de)(de)基(ji)因(yin)(yin)研究較多(duo)的(de)(de)來自釀酒酵母菌(jun)(jun)的(de)(de)AUR1基(ji)因(yin)(yin)，以及構巢曲(qu)霉的(de)(de)AURA基(ji)因(yin)(yin)，兩者具有(you)同(tong)源性。通(tong)過對(dui)編(bian)碼AUR1-C基(ji)因(yin)(yin)進(jin)行突變即可使得菌(jun)(jun)株對(dui)AbA產(chan)生(sheng)抗性，作為蛋白(bai)質互作研究的(de)(de)報告基(ji)因(yin)(yin)。
因(yin)為AbA可(ke)以(yi)直接殺死敏感的(de)酵母(mu)菌株(zhu)，而不(bu)是延遲(chi)菌株(zhu)生(sheng)長(chang)(chang)，所以(yi)AbA篩(shai)選有(you)利于陽(yang)性(xing)(xing)克(ke)隆的(de)生(sheng)長(chang)(chang)和(he)識(shi)別。與營(ying)養報告基因(yin)（如(ru)HIS3）進(jin)行低嚴緊(jin)度初篩(shai)相比，AbA篩(shai)選大大消除了背景(jing)克(ke)隆。實際操作中，用(yong)(yong)AbA進(jin)行初篩(shai)時會獲得(de)更多克(ke)隆，之后再用(yong)(yong)4個報告子(zi)(zi)(AUR1-C,HIS3, ADE2 和(he)MEL1)進(jin)行高(gao)嚴緊(jin)度的(de)二次篩(shai)選以(yi)驗證(zheng)陽(yang)性(xing)(xing)克(ke)隆。AbA非常(chang)適合用(yong)(yong)作陽(yang)性(xing)(xing)克(ke)隆子(zi)(zi)篩(shai)選用(yong)(yong)的(de)藥物選擇(ze)性(xing)(xing)標(biao)記；也是酵母(mu)單/雙雜交研究中理想的(de)報告子(zi)(zi)，可(ke)以(yi)簡化酵母(mu)雙雜交文庫(ku)篩(shai)選。
二、使用方(fang)法：
1.本品為AbA的甲醇溶液(ye)，濃度為1 mg/ml，直(zhi)接用作儲存液(ye)。
2.滅菌后YPD Agar培(pei)養基冷卻至50-55 ℃，加(jia)入適(shi)量的AbA儲(chu)液，倒(dao)板備用(yong)。（AbA工作濃度(du)取決于宿(su)主細胞的敏感(gan)度(du)，見下表）
3.制備酵母感受態(tai)細(xi)胞并完成轉(zhuan)化。
4.把100 μl完成轉化(hua)酵母細(xi)胞懸液涂到含有適量AbA的YPD Agar培養基(ji)平板上(shang)，30℃培養2-4天(tian)。
5.挑取克隆鑒定(ding)，或統計轉(zhuan)化效率。
三、不同菌株建議(yi)AbA的(de)工(gong)作濃度：
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菌株
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MIC（μg/ml）
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S.cerevisiae
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ATCC9763（diploid）
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0.2-0.4
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Baker’s yeast（diploid）
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0.2-0.4
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Beer yeast（triploid or tetraploid）
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0.1
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SH3328（haploid）
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0.1
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Shochu yeast（diploid）
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0.1
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Sake yeast（diploid）
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0.1-0.2
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C.albicans
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TIMM-0136（diploid）
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0.04
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C.tropicalis
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TIMM-0324（diploid）
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0.08
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Schizo.pombe
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JY-745（monoploid）
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0.1
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四、對AbA敏感的真菌：
出牙酵母（Saccharomyces
cerevisiae）、粟酒(jiu)裂(lie)殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）、光滑念珠菌（Candida glabrata）、構巢曲霉（Aspergillus
nidulans）和黑曲(qu)霉(mei)（A. niger.）。