10×BN轉膜緩沖(chong)液
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產品編(bian)號
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產品名稱
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規格
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BC600P
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10×BN轉膜緩沖液（粉末(mo)）
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1升
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● 簡(jian)介：
10×BN轉(zhuan)膜緩沖液（10×Blue Native Transfer Buffer）適用于BN蛋白電泳后凝膠上非(fei)變性蛋白的轉(zhuan)膜(mo)。本(ben)轉(zhuan)膜(mo)液配制便(bian)捷，稀釋(shi)后無需調(diao)節pH值，pH約為7.5-7.7。該緩沖液最終可配(pei)成10升即用型1×緩(huan)沖液（根據需求補加甲醇）。
● 保存(cun)和運輸：
粉末裝常溫保存，常溫運輸(shu)，兩年有效；配(pei)成10×轉(zhuan)膜緩沖液后4℃貯存(cun)，一年有效；加入甲醇的即用(yong)型轉膜緩沖液(ye)4℃貯存，一個月有效。
● 配(pei)制方法：
將10×轉(zhuan)膜(mo)緩沖(chong)液粉(fen)末全部(bu)溶(rong)解于1升超(chao)純(chun)水(shui)中，徹底溶解，即配(pei)成10×轉膜緩(huan)沖液。
根據(ju)下表配制(zhi)成1×即用型轉(zhuan)膜緩沖液
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1×即用型轉膜緩沖液
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500 ml
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1 L
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2 L
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10×轉膜(mo)緩沖液
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50 ml
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100 ml
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200 ml
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無(wu)水甲醇
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甲醇終濃(nong)度0-20%
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超(chao)純水
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定容至 500 ml
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定容至 1升
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定容(rong)至 2升(sheng)
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不(bu)要調節pH
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注：轉膜緩沖液中(zhong)加(jia)入甲醇對蛋(dan)白(bai)有固定作用(yong)，轉膜分(fen)子(zi)量較(jiao)大的蛋(dan)白(bai)少(shao)加(jia)或不加(jia)甲醇，轉膜分(fen)子(zi)量較(jiao)小的蛋(dan)白(bai)要加(jia)至多20%的(de)甲醇(chun)。非變性蛋白的(de)轉膜可(ke)以不加甲醇(chun)。
● 使用方法：
1. BN電泳介紹：
Blue Native PAGE（BN-PAGE）是一種從生物(wu)樣品(pin)（質膜(mo)，胞漿等）中(zhong)分離(li)分子(zi)(zi)量10 kD-10 M kD 范圍的(de)(de)(de)蛋(dan)白(bai)質復(fu)合(he)物(wu)的(de)(de)(de)電(dian)泳(yong)技術。其(qi)原理是用溫(wen)和去(qu)污劑(ji)(ji)(如 DDM，digitonin)將蛋(dan)白(bai)復(fu)合(he)體從細胞膜(mo)中(zhong)以(yi)近似天然的(de)(de)(de)狀態分離(li)出來，Blue Native PAGE （BN-PAGE）是用考馬(ma)(ma)斯亮藍 G-250 代替 SDS與蛋(dan)白(bai)結合(he)而使其(qi)帶負(fu)電(dian)荷，根據(ju)蛋(dan)白(bai)分子(zi)(zi)量不同在 PAGE膠中(zhong)得到(dao)分離(li)。BN-PAGE由(you)于考馬(ma)(ma)斯亮藍G-250存在，使蛋(dan)白(bai)都覆蓋上負(fu)電(dian)荷，可以(yi)分離(li)堿性(xing)蛋(dan)白(bai)（pI＞7）。BN電(dian)泳(yong)可以(yi)選擇Blue/Clear 非(fei)變性(xing)凝(ning)膠電(dian)泳(yong)試劑(ji)(ji)盒(U型(xing)板(ban)3-12%預制膠，通(tong)用型(xing))（貨號：RTD6139-0312或RTD6139-0416）
2. 電泳后凝膠(jiao)預處理(li)（可選(xuan)步驟）：
凝膠浸泡于適(shi)量1×即用型BN轉膜緩沖(chong)液（加終濃(nong)度0.1% SDS）中，搖床慢搖10分鐘。
注(zhu)：凝膠(jiao)浸(jin)泡在含SDS緩沖液中，能讓蛋白(bai)帶上更多(duo)的(de)負電荷，有利于(yu)蛋白(bai)的(de)轉(zhuan)膜。
3. 轉膜：
3.1轉膜方(fang)法：BN電泳后的轉膜建議用濕轉法。
3.2膜的選擇：BN電泳轉膜必(bi)須(xu)使(shi)用PVDF膜，不能用NC膜（NC膜會與考馬斯亮藍G-250不可逆(ni)結合(he)，很難清(qing)除干凈）。根據蛋白大小選(xuan)擇膜的孔徑(jing)(jing)。一般說來，大于(yu)20 kD蛋白選(xuan)擇0.45 μm孔徑(jing)(jing)，低(di)于(yu)20 kD選(xuan)擇0.22 μm孔徑(jing)(jing)。PVDF膜使用(yong)前(qian)要用(yong)無水甲醇潤濕活化。
3.3 三(san)明治(zhi)結構(gou)：轉膜(mo)三(san)明治(zhi)結構(gou)與傳(chuan)統(tong)轉膜(mo)相同，即根據“黑(hei)膠白膜”制(zhi)作(zuo)三明(ming)治，即膜(mo)置于轉膜(mo)夾(jia)芯(xin)正極(ji)一側，凝膠(jiao)置于轉膜(mo)夾(jia)芯(xin)負極(ji)一側，這樣凝膠(jiao)上帶負電(dian)荷的蛋(dan)白才能轉移到膜(mo)上。
蛋(dan)白轉膜三明治(zhi)制作：
負(fu)極(ji)（電轉夾黑色面）-海(hai)綿墊-1層1 mm厚度(du)濾(lv)紙-凝膠-膜(mo)-1層1 mm厚(hou)度濾(lv)紙-海綿墊(dian)-正
極（電轉夾白色面）
3.4 轉膜條件：
由于在非變性條(tiao)件(jian)下，不同(tong)蛋(dan)白的(de)空間結(jie)構，聚合狀態，電荷數量都有(you)不同(tong)，以下轉(zhuan)膜(mo)條(tiao)件(jian)僅供參考(kao)，客戶針對自(zi)己的(de)目的(de)蛋(dan)白，最好經過1-2次預實驗(yan)后，確定最佳的(de)轉(zhuan)膜(mo)條(tiao)件(jian)。
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蛋白大小
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穩流
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建議時間
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降溫措施
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低于(yu)70kD
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150 mA
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1 小時(shi)
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不(bu)需(xu)要
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70-300 kD
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200 mA
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1.5-2 小時
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需(xu)要
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高于300 kD
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200 mA
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2.5-3.5 小時(shi)
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需要
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4. 洗膜：
PVDF膜(mo)用無水甲醇清洗(xi)10分鐘，徹底去除(chu)藍色G250。
5. 進行后(hou)續(xu)WB操作：封閉-一抗-二抗-檢(jian)測。