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10×堿性蛋(dan)白Native PAGE轉膜緩沖液

簡(jian)介(jie)：

10×堿性蛋白Native PAGE轉膜緩(huan)沖液適用于堿性(xing)蛋白電(dian)泳后凝(ning)膠上非變性(xing)堿性(xing)蛋白的轉膜。本轉膜液配制便捷，稀釋后無需調節pH值。緩(huan)沖(chong)液中(zhong)不含任何變性劑，保證了轉膜中(zhong)維持蛋白的(de)活(huo)性狀態。該緩(huan)沖(chong)液稀釋10倍可配成5升即用型1×緩沖液。

保(bao)存條件：

常溫(wen)保存(cun)，兩年有效(xiao)。

配制方法(fa)：

將10×轉膜緩沖液用超純水(shui)稀釋10倍即配成1×即用(yong)型轉膜緩(huan)沖液。

使用方法：

1. 堿性蛋白非變性電(dian)泳：

各種蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)分子由于所含的堿性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)氨基酸(suan)(suan)和酸(suan)(suan)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)氨基酸(suan)(suan)的數目不同，因而(er)有各自的等電(dian)(dian)(dian)點(dian)。凡(fan)堿性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)氨基酸(suan)(suan)含量較多的蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)稱為(wei)堿性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)，等電(dian)(dian)(dian)點(dian)偏堿性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)，如組(zu)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)、精蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)等。反(fan)之，凡(fan)酸(suan)(suan)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)氨基酸(suan)(suan)含量較多的蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)，等電(dian)(dian)(dian)點(dian)就偏酸(suan)(suan)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)。分離堿性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)時(shi)候(hou)，要(yao)利用(yong)低 pH 凝膠系統(tong)，分離酸(suan)(suan)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)時(shi)候(hou)，要(yao)利用(yong)高 pH 凝膠系統(tong)。酸(suan)(suan)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)通常(chang)在(zai)非變性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)凝膠電(dian)(dian)(dian)泳(yong)(yong)中(zhong)采用(yong)的 pH 是 8.8的緩沖系統(tong)，蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)會帶負電(dian)(dian)(dian)荷(he)，蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)會相陽極移動；而(er)堿性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)通常(chang)電(dian)(dian)(dian)泳(yong)(yong)是在(zai)微酸(suan)(suan)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)環境下進行，蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)帶正電(dian)(dian)(dian)荷(he)，這時(shi)候(hou)需要(yao)將陰極和陽極倒置才可以電(dian)(dian)(dian)泳(yong)(yong)。堿性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)電(dian)(dian)(dian)泳(yong)(yong)可參考使用(yong)堿性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)非變性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)PAGE凝膠制備及電(dian)(dian)(dian)泳(yong)(yong)試劑盒(he)（貨(huo)號:RTD6131）。

2. 轉膜：

① 轉膜(mo)方法(fa)(fa)：堿性蛋白在非變性狀態的轉膜(mo)建議用濕轉法(fa)(fa)。

 ② 三明治結構：由(you)于堿性蛋白pI＞7 在酸(suan)性轉(zhuan)膜緩沖液中帶正電荷，轉(zhuan)膜三明治結構與傳統轉(zhuan)膜不同(tong)（傳統的酸(suan)性蛋白轉(zhuan)膜是根據(ju)“黑膠白膜”制作(zuo)三明治）。堿(jian)性蛋白(bai)轉膜根(gen)據“黑膜白(bai)膠(jiao)”制作(zuo)三明治，即膜(mo)置于(yu)轉膜(mo)夾(jia)芯(xin)負極(ji)，凝(ning)膠(jiao)置于(yu)轉膜(mo)夾(jia)芯(xin)正極(ji)，這樣凝(ning)膠(jiao)上帶正電荷的堿性(xing)蛋白才能轉移到膜(mo)上。

堿性蛋白轉膜三明治(zhi)制作(zuo)：

負極(ji)（電轉(zhuan)夾黑色面(mian)）-海(hai)綿(mian)墊-3至5層濾紙-膜-凝膠-3至5層濾紙-海綿墊-正極（電轉(zhuan)夾白色面）

 ③ 膜(mo)(mo)(mo)的選(xuan)擇：膜(mo)(mo)(mo)可以用PVDF膜(mo)(mo)(mo)或(huo)NC膜(mo)(mo)(mo)，根據蛋(dan)白大小選(xuan)擇膜(mo)(mo)(mo)的孔(kong)徑(jing)。一般說(shuo)來(lai)，大于(yu)20kD蛋(dan)白選(xuan)擇0.45μm孔(kong)徑(jing)，低于(yu)20kD選(xuan)擇0.22μm孔(kong)徑(jing)。PVDF膜(mo)(mo)(mo)使用前要用無水甲醇潤濕(shi)(shi)活化，NC膜(mo)(mo)(mo)只需用轉膜(mo)(mo)(mo)緩(huan)沖(chong)液潤濕(shi)(shi)就可以。

④ 轉膜條件：

由于在非(fei)變性條件下，不同(tong)堿性蛋(dan)白(bai)(bai)的(de)空(kong)間結構，聚合狀態，電荷數量都有不同(tong)，以下轉膜(mo)條件僅供參考，客戶針對自己的(de)目的(de)蛋(dan)白(bai)(bai)，最好經過1-2次預實(shi)驗(yan)后，確定最佳的(de)轉膜(mo)條件。