10×CAPS轉膜緩沖(chong)液
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產品編(bian)號
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產品名(ming)稱
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規格
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CP5015
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10×CAPS轉膜緩(huan)沖液
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500 ml
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● 簡(jian)介：
10×CAPS轉膜緩沖液(ye)（10×CAPS Transfer Buffer）適用于蛋(dan)白(bai)(bai)電泳后凝膠上蛋(dan)白(bai)(bai)的轉膜，主要成分(fen)為CAPS[3-（環(huan)己(ji)氨基）-1-丙(bing)磺酸]。本轉膜液配制便(bian)捷，稀釋后無需調(diao)節pH值，pH約為(wei)11.0。由于緩(huan)沖液具有較高的pH，特別適合于堿(jian)性蛋白非變性電(dian)泳后的轉膜(mo)實(shi)驗。另外，由(you)于緩沖液(ye)中不含有甘氨酸，轉膜(mo)后的蛋白可以進行N端(duan)測序(xu)。
該緩沖液最終(zhong)可配成至少(shao)5升(sheng)即(ji)用型1×緩沖液（根(gen)據需求補加甲醇）。
● 保存和運輸(shu)：
4℃保存，常溫運輸，一(yi)年有效(xiao)；配成(cheng)1×含甲醇溶(rong)液(ye)后4℃貯(zhu)存，1個月有效(xiao)。
● 配制(zhi)方(fang)法：
將10×轉膜緩沖(chong)液稀釋10倍，根(gen)據實驗需求加(jia)或不加(jia)甲(jia)醇，即配成1×即用(yong)型轉膜緩(huan)沖液(ye)。
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1×即用型轉膜緩沖液
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500 ml
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1 L
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2 L
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10×轉膜緩沖液
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50 ml
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100 ml
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200 ml
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超純水
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350 ml
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700 ml
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1400 ml
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無水(shui)甲醇
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50 ml
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100 ml
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200 ml
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不(bu)用調節pH
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注：非變性(xing)蛋白電(dian)泳轉膜不加或(huo)少(shao)加甲醇；變性(xing)蛋白電(dian)泳轉膜可以加終濃度(du)低于10%甲醇。
● 使用方(fang)法(fa)：
1. 轉(zhuan)膜方法(fa)：使用CAPS轉(zhuan)膜緩沖液，電(dian)泳后(hou)的轉(zhuan)膜建議(yi)用濕轉(zhuan)法(fa)。
2. 膜的(de)選(xuan)擇：轉膜可以使用PVDF膜和NC膜。根據蛋白大小選(xuan)擇膜的(de)孔徑(jing)。一般說來，大于20 kD蛋白選(xuan)擇0.45 μm孔徑(jing)，低于20 kD選(xuan)擇0.22 μm孔徑(jing)。PVDF膜使(shi)用前要用無水(shui)甲醇潤濕活(huo)化。
3. 三(san)(san)明(ming)治結(jie)構：轉膜三(san)(san)明(ming)治結(jie)構與傳統轉膜相同，即根據“黑膠白膜”制作(zuo)三明治(zhi)，即膜置(zhi)于(yu)轉膜夾(jia)芯正極一側，凝(ning)(ning)膠置(zhi)于(yu)轉膜夾(jia)芯負極一側，這樣(yang)凝(ning)(ning)膠上(shang)帶負電荷的蛋白才能轉移到膜上(shang)。
蛋白轉膜三明治制作(zuo)：
負極(ji)（電轉夾黑色(se)面）-海綿(mian)墊-1層1 mm厚度(du)濾紙-凝膠-膜-1層(ceng)1 mm厚度濾紙-海綿墊-正極（電轉夾白(bai)色面）
4. 轉(zhuan)膜條(tiao)件：
以下轉(zhuan)膜條(tiao)件(jian)僅供參考，客戶針對自(zi)己的目的蛋白大小，最(zui)好經過1-2次預實驗后，確定最(zui)佳的轉(zhuan)膜條(tiao)件(jian)。
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蛋白大小
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穩流
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建議(yi)時間(jian)
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降溫措施
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低于(yu)70kD
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150 mA
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1 小時
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不需要
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70-300 kD
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200 mA
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1.5-2 小時
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需要
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高于300 kD
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200 mA
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2.5-3.5 小(xiao)時
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需要(yao)
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5. 進行后續WB操作：封閉-一抗(kang)(kang)-二抗(kang)(kang)-檢測。