離心式快速脫鹽柱(5 kD)
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貨號
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名稱
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規格
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DS0540
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離心式(shi)快速脫鹽柱(5 kD)
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20套/包
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● 產品介紹
離心(xin)式快(kuai)速(su)脫(tuo)(tuo)鹽柱根據排阻層析原理可以(yi)出色地完成蛋白脫(tuo)(tuo)鹽或緩(huan)沖液(ye)置(zhi)換(huan)，適(shi)用于高(gao)于5 kD蛋白樣品的(de)脫(tuo)(tuo)鹽、緩(huan)沖液(ye)置(zhi)換(huan)或小分子去除。該產品回(hui)收(shou)率高(gao)，幾乎等(deng)體積回(hui)收(shou)蛋白樣品，在(zai)脫(tuo)(tuo)鹽的(de)同時保持高(gao)回(hui)收(shou)率，樣品不會被稀(xi)釋。簡單使用離心(xin)操作，無需(xu)裝柱，代(dai)替比較耗(hao)時的(de)傳統透(tou)析處理，以(yi)達到快(kuai)速(su)蛋白樣品脫(tuo)(tuo)鹽純(chun)化以(yi)及替換(huan)蛋白質緩(huan)沖液(ye)的(de)目的(de)。
脫鹽柱參數如下(xia)：
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排阻極(ji)限 Mr
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填料溶脹后體(ti)(ti)積
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處理樣品體積(ji)
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回收率
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工(gong)作(zuo)pH
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5000
Da
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~0.6
ml
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100-200
μl
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70-90%
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2-13
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● 貯存、運輸和效期：
常溫貯存（不能冷凍）；常溫運輸；有效期兩年。
● 注意事項：
1.
操作方便，免去了繁(fan)瑣(suo)的透析過程，15-20分鐘內即可完成樣品(pin)處理。
2.
本脫鹽柱建議一次性使(shi)用，不(bu)建議重復使(shi)用。
● 操作步驟
1. 取脫鹽柱(zhu)，放入2
ml收集管(guan)中。
2.
加入400
μl滅菌水(shui)或樣品所需的緩(huan)沖(chong)液(ye)，常溫靜置5
min，1000×g（約3000
rpm）離心(xin)2
min。
注：離心力不要高于1000
g，過(guo)高的離心力會損傷填(tian)料(liao)，降低脫(tuo)鹽效(xiao)率。
3.
重復步(bu)驟2操(cao)作2次。
4. 樣(yang)品準備：
樣(yang)品在上樣(yang)前建議離心(xin)取(qu)上清或用0.22
μm或0.45
μm濾膜過濾，減少雜(za)質(zhi)影(ying)響。
5. 脫鹽處理：
脫(tuo)鹽柱(zhu)轉移(yi)到新的1.5 ml離心(xin)管中，脫(tuo)鹽柱(zhu)中加入100-200 μl需要處理(li)的蛋白樣品，靜置30秒(miao)，1000×g（約3000
rpm）離心(xin)2
min，收集回收樣品，保存(cun)備用。
注：為了確保(bao)從(cong)小體(ti)積樣(yang)品中獲得(de)最大的蛋白回收效率(lv)，低于100 μl樣(yang)品上樣(yang)后要在樣(yang)品完全吸收后向填料中加入適(shi)當體(ti)積的超(chao)純水或(huo)緩沖液壓層，使得(de)總上樣(yang)體(ti)積為100 μl。
● 注意事項
1. 回(hui)收(shou)(shou)效(xiao)果：樣品脫鹽(yan)后(hou)(hou)的回(hui)收(shou)(shou)率與樣品的濃度，以及上(shang)樣體積(ji)相關(guan)。樣品濃度越(yue)高，其回(hui)收(shou)(shou)率越(yue)高；同時在(zai)(zai)推薦(jian)的樣品上(shang)樣量(liang)范圍內，上(shang)樣量(liang)越(yue)大(da)，其回(hui)收(shou)(shou)率也會隨之升高。通(tong)常(chang)脫鹽(yan)后(hou)(hou)蛋白的回(hui)收(shou)(shou)率在(zai)(zai)70-90%。
2. 樣(yang)品處理(li)(li)體(ti)積要在(zai)柱子(zi)處理(li)(li)范(fan)圍(wei)內，該(gai)脫鹽柱最多處理(li)(li)體(ti)積是200
μl樣(yang)品，過多會導致(zhi)收集
管(guan)中(zhong)液體浸沒到脫(tuo)鹽柱。
3.
填料在高濃度醇(chun)溶(rong)液或飽和鹽(yan)溶(rong)液中(zhong)會有失水收縮現象，請勿將上(shang)述溶(rong)液進行過柱；
4. 加樣時盡量均勻加至管中(zhong)心位置；
5.
當樣(yang)品濃度過低時（<0.01
mg/ml)，需先(xian)將樣(yang)品濃縮到所需體積或(huo)所需濃度。
● 常見問題
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常見問題
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可能原因
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解決方法
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蛋白(bai)回收率偏低
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1、蛋白濃度過低（<0.01
mg/ml)
2、所置換的緩沖(chong)液成分或pH非最適緩(huan)沖液(ye)，產生了非特異(yi)性吸附
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1、現對(dui)蛋白(bai)液進行適當濃縮后脫鹽
2、更換適合的緩(huan)沖液，并充(chong)分平衡(heng)預裝柱(zhu)2-3次
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蛋白回收后出現渾濁或沉(chen)淀
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1、緩沖(chong)(chong)液非最適緩沖(chong)(chong)液
2、緩沖液中的某(mou)些(xie)離子被(bei)除去了(le)，導致蛋白質(zhi)等電點聚沉(chen)
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更換(huan)適合(he)的緩沖(chong)液，并充分(fen)平衡(heng)預裝柱2-3次(ci)
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脫鹽不(bu)干凈
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鹽離子濃度(du)過(guo)高（>0.5 M）
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根(gen)據(ju)鹽(yan)離子濃度適當增加脫鹽(yan)次數或(huo)稀(xi)釋后(hou)脫鹽(yan)
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實驗示(shi)例：
離心式快速脫鹽柱脫鹽處理樣品
樣品1（lane1-5）：細菌裂解物（正常鹽濃度）
lane1，2，3：細菌裂解物上樣5μl，4μl，3μl；
lane4，5：100μl細菌裂解物經過脫鹽柱處理后，上樣5μl
lane 4：S公司脫鹽柱；lane 5：Real-Times脫鹽柱
結論：脫鹽柱對裂解物所有蛋白都有較好的回收率（80%）
樣品2（lane 6-8）：BSA溶液
lane 6: BSA水溶液（0.4μg/μl）上樣量5μl（2μg）
lane 7：BSA 0.5M NaCl溶液（0.4μg/μl）上樣量5μl（2μg）
lane 8：BSA 0.5M NaCl溶液脫鹽柱處理上樣量5μl
結論：脫鹽柱脫鹽處理效果明顯（含鹽BSA電泳泳道明顯變寬）
脫鹽后的BSA回收率可達90%
脫鹽程序：脫鹽柱中加入400μl超純水，常溫靜置5min，1000 g
離心3min，重復2次；脫鹽柱放入新的1.5ml離心管中，加入0.1ml
細菌裂解物或0.2ml BSA溶液，靜置30S，1000g離心3min。
電泳：4-18% RealPAGE預制膠，1×TGS，200V 37-13mA 53min，
FastBlue蛋白染色液染色30分鐘。