● 產品包裝：

● 產品簡介：

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統的細胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的Western、IP等。RIPA的本意是Radio  Immunoprecipitation  Assay。RIPA裂(lie)(lie)(lie)解(jie)液的(de)配(pei)方有很(hen)多種(zhong)，根據(ju)其裂(lie)(lie)(lie)解(jie)液的(de)強度大(da)致可以(yi)分為強、中、弱三類(lei)。RIPA裂(lie)(lie)(lie)解(jie)液(強)的(de)主要(yao)成分為50 mM Tris (pH 7.4)，150 mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以(yi)及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，EGTA等多種(zhong)抑(yi)制劑。可以(yi)有效抑(yi)制蛋(dan)白降解(jie)。由于(yu)含有較高濃(nong)度的(de)Triton X-100等干擾(rao)物質，不(bu)能用(yong)傳統Bradford法測(ce)定由本裂(lie)(lie)(lie)解(jie)液裂(lie)(lie)(lie)解(jie)得到樣品的(de)蛋(dan)白濃(nong)度，可以(yi)使(shi)用(yong)BCA蛋(dan)白濃(nong)度測(ce)定試劑盒(he)（貨號(hao)：RTP7102）或Bradford蛋(dan)白濃(nong)度測(ce)定試劑盒(he)（去垢劑兼容(rong)型）（貨號(hao)：RTP7104）測(ce)定蛋(dan)白濃(nong)度。

● 保存條件：

-20℃保存，一(yi)年有(you)效。

● 注意事項：

1.為取(qu)得(de)最佳的使用效果，盡量避免過多的反復凍融。可(ke)以適當分裝后使用。需自備PMSF。裂解樣品的所有(you)步驟都(dou)需在(zai)冰上或4℃進行。

2. RIPA裂解(jie)液(ye)的(de)裂解(jie)產(chan)物(wu)(wu)中經常會出現一(yi)小團透明(ming)膠(jiao)狀(zhuang)物(wu)(wu)，屬正常現象。該(gai)透明(ming)膠(jiao)狀(zhuang)物(wu)(wu)為含(han)有基因(yin)(yin)組(zu)DNA等(deng)(deng)的(de)復合(he)物(wu)(wu)。在不檢(jian)測(ce)與基因(yin)(yin)組(zu)DNA結合(he)特別(bie)緊密的(de)蛋(dan)白(bai)的(de)情況下，可(ke)以直接離(li)(li)心取(qu)上清(qing)用于(yu)后(hou)續(xu)實驗；如果需要(yao)檢(jian)測(ce)和基因(yin)(yin)組(zu)結合(he)特別(bie)緊密的(de)蛋(dan)白(bai)，則可(ke)以通過(guo)超聲處(chu)理(li)打碎打散(san)該(gai)透明(ming)膠(jiao)狀(zhuang)物(wu)(wu)，隨后(hou)離(li)(li)心取(qu)上清(qing)用于(yu)后(hou)續(xu)實驗。如果檢(jian)測(ce)一(yi)些常見(jian)的(de)轉錄(lu)因(yin)(yin)子，例如NF-kappaB、p53等(deng)(deng)時，通常不必進行(xing)超聲處(chu)理(li)，就可(ke)以檢(jian)測(ce)到(dao)這(zhe)些轉錄(lu)因(yin)(yin)子。

● 使用說明：

1.  準備RIPA裂解液：

融解RIPA裂解液(ye)，混勻；取適當(dang)量(liang)的(de)(de)裂解液(ye)，在使用前數(shu)分鐘內(nei)加入1/100體積的(de)(de)100 mM PMSF，使PMSF的(de)(de)最終濃度為1 mM。

2. 細胞蛋白提取：

2.1 貼壁細胞：去除培養(yang)液(ye)，加入適(shi)量(liang)1×PBS，輕柔漂洗(xi)一遍，不(bu)要(yao)擾(rao)動貼壁細(xi)胞(bao)。按照6孔(kong)板每孔(kong)加入100-200 μl裂(lie)(lie)解(jie)液(ye)的比例加入裂(lie)(lie)解(jie)液(ye)，移液(ye)器吹打數下，使(shi)裂(lie)(lie)解(jie)液(ye)和(he)細(xi)胞(bao)充分(fen)接(jie)觸，冰上裂(lie)(lie)解(jie)細(xi)胞(bao)5分(fen)鐘，用細(xi)胞(bao)刮(gua)刀刮(gua)下細(xi)胞(bao)收集于(yu)1.5 ml離心(xin)管中，冰上繼續裂(lie)(lie)解(jie)15分(fen)鐘，間(jian)歇(xie)混勻。

2.2 懸浮細胞：450 g 4℃ 離心(xin)5 min收集細(xi)(xi)胞(bao)(bao)；用適量1×PBS重(zhong)(zhong)懸細(xi)(xi)胞(bao)(bao)，450 g 4℃ 離心(xin)5 min收集細(xi)(xi)胞(bao)(bao)；重(zhong)(zhong)復漂洗細(xi)(xi)胞(bao)(bao)一次；按照細(xi)(xi)胞(bao)(bao)沉(chen)淀體積（PCM）20 μl加入200 μl RIPA的比例加入RIPA，混(hun)勻細(xi)(xi)胞(bao)(bao)沉(chen)淀，冰浴處理15分鐘，間歇混(hun)勻。

注：2×10⁶ Jurkat細胞，其細胞沉淀體積（PCM，Packed Cell Volume）大約為20 μl。

2.3 裂解細胞：

裂(lie)解(jie)混合物(wu)超(chao)聲波處理(li)(li)(li)（超(chao)聲條(tiao)件(jian)根據(ju)儀(yi)器調整，建議條(tiao)件(jian)為）；如沒有超(chao)聲破碎儀(yi)，可以使用注射器用27G針頭(tou)處理(li)(li)(li)裂(lie)解(jie)物(wu)10-15次（貨號：PE2719 ，蛋白(bai)提取針頭(tou)套裝），以徹底裂(lie)解(jie)細胞。冰浴處理(li)(li)(li)15分鐘。

注：裂(lie)解中細胞會(hui)釋放出(chu)變性(xing)的(de)核酸，呈團(tuan)狀(zhuang)粘(zhan)稠透明樣，如不進行超聲或針頭裂(lie)解處理，會(hui)導致裂(lie)解物(wu)非常粘(zhan)稠，大(da)(da)大(da)(da)降低蛋白提取(qu)的(de)得率和(he)純(chun)度。

2.4 離心收集上清：

充分裂解后(hou)，4℃ 16000 g離心10分鐘(zhong)，取上清，即(ji)可進行后(hou)續的PAGE、Western和免(mian)疫沉淀(dian)等(deng)操(cao)作。

3. 組織樣品蛋白提取：

3.1 手術(shu)切除的組織塊迅速置于預冷的生理鹽水中(zhong)，漂洗數(shu)次(ci)，洗凈組織血跡，用濾紙吸

干(gan)組(zu)織表面液體，將組(zu)織切成細(xi)小的碎片(pian)。

3.2 按照(zhao)每(mei)20 mg組織加入200 μl裂(lie)解(jie)(jie)液(ye)的比例加入裂(lie)解(jie)(jie)液(ye)。(如(ru)果裂(lie)解(jie)(jie)不充分(fen)可(ke)以適當添加更多的裂(lie)解(jie)(jie)液(ye)，如(ru)果需要高濃度(du)的蛋白樣品，可(ke)以適當減少裂(lie)解(jie)(jie)液(ye)的用量。) 

3.3 用玻璃勻漿(jiang)器(qi)冰(bing)浴(yu)勻漿(jiang)5-10次，收(shou)集勻漿(jiang)后的裂(lie)解混(hun)合物，超(chao)聲(sheng)波處理（超(chao)聲(sheng)條(tiao)件(jian)根據儀器(qi)調整(zheng)，建議條(tiao)件(jian)為）；如沒有超(chao)聲(sheng)破碎儀，可以使用注射器(qi)用27G針頭處理裂(lie)解物10-15次（貨號：PE2719 ，蛋白提取針頭套裝(zhuang)），以徹底裂(lie)解細(xi)胞。裂(lie)解物冰(bing)浴(yu)處理15分鐘。

注(zhu)：裂(lie)(lie)解中細胞會(hui)釋(shi)放出變性的核酸，呈(cheng)團狀粘(zhan)(zhan)稠(chou)透明樣，如不進行超聲或針頭裂(lie)(lie)解處理，會(hui)導致裂(lie)(lie)解物非常粘(zhan)(zhan)稠(chou)，大(da)大(da)降低蛋(dan)白提取(qu)的得率和純(chun)度。

3.4 充分裂解(jie)后，4℃ 16000 g離心10分鐘，取上清，即可進(jin)行后續的PAGE、Western和免疫沉(chen)淀等(deng)操作(zuo)。

實驗示例：

Jurkat RIPA總蛋白提取，GAPDH檢測

總蛋白提取：4×10⁶ Jurkat細胞，450 g 離心收集，去(qu)上(shang)清，PBS漂洗兩次，沉(chen)淀中加入200 μl RIPA（加2 μl 100 mM PMSF），冰(bing)上(shang)裂解5分鐘，4℃ 16000 g 15 分鐘，上(shang)清即(ji)為總(zong)蛋(dan)白（TP）。

電泳(yong)：RTD6132-15%3.3C  200 V 33-12 mA 55 min

轉膜(mo)：NC膜(mo)，1×RealBlot快(kuai)速轉膜(mo)液(ye)濕(shi)轉，穩流400 mA，電壓變化64-57 V，轉膜(mo)時間35 min

封閉：無(wu)蛋白(bai)快速封閉液，RT 20 min

一抗孵育：GAPDH 羊抗(kang)兔(tu)多(duo)抗(kang)，一抗(kang)稀釋液稀釋1：2000

二抗(kang)孵(fu)育(yu)：羊抗(kang)兔IgG-HRP，二抗(kang)稀釋液稀釋1：5000

檢測(ce)：ECL發光檢測(ce)

實驗示例：

“ 細胞裂(lie)解(jie) ”用什(shen)么(me)？

引(yin)自：木子(zi)莊主 分子莊園(yuan)

離(li)子型去污劑：非(fei)(fei)離子型去污劑和(he)(he)離子型不(bu)同(tong)，它們(men)的(de)(de)頭端基團是沒有極性的(de)(de)親(qin)水基團，是比較溫和(he)(he)的(de)(de)表面活性劑。它們(men)可(ke)以(yi)(yi)破(po)壞蛋白(bai)(bai)質-脂質以(yi)(yi)及(ji)脂質-脂質之間的(de)(de)連(lian)接，但是不(bu)能破(po)壞蛋白(bai)(bai)質-蛋白(bai)(bai)質的(de)(de)連(lian)接，而且(qie)大多非(fei)(fei)離子去污劑不(bu)能使(shi)(shi)蛋白(bai)(bai)質變性。因此(ci)，這種去污劑可(ke)以(yi)(yi)使(shi)(shi)蛋白(bai)(bai)質溶解和(he)(he)分離，但卻保留了(le)蛋白(bai)(bai)質的(de)(de)天然構象(xiang)、功能以(yi)(yi)及(ji)它們(men)的(de)(de)相互作用。如Triton X-100、乙(yi)基(ji)苯(ben)基(ji)聚(ju)乙(yi)二醇（NP-40）、Tween-80等。

Tris為弱堿(jian)，在25°C下，它的(de)pKa為8.1；根據(ju)緩(huan)(huan)沖理論，Tris緩(huan)(huan)沖液的(de)有效(xiao)緩(huan)(huan)沖范圍在pH7.0到9.2之(zhi)間。0.1mol/l的(de)水(shui)溶液pH為10.4，一般(ban)加入鹽酸以調(diao)節pH值，即可(ke)獲(huo)得所(suo)需pH值的(de)緩(huan)(huan)沖液。

主要(yao)應(ying)用(yong)有：①1M Tris-HCl pH6.8、1.5M Tris-HCl pH8.8和(he)5×Tris-甘氨酸電泳緩(huan)(huan)沖(chong)液(ye)(ye)是(shi)SDS-PAGE最常用的(de)試劑。②在Tris鹽酸緩(huan)(huan)沖(chong)液(ye)(ye)中加入EDTA制成(cheng)“TE緩(huan)(huan)沖(chong)液(ye)(ye)”，TE緩(huan)(huan)沖(chong)液(ye)(ye)被用于(yu)DNA的(de)穩定和(he)儲存。將調節pH值的(de)鹽酸換為乙酸即可以得(de)到“TAE（Tris/Acetate/EDTA）緩(huan)(huan)沖(chong)液(ye)(ye)”，換成(cheng)硼酸則(ze)獲得(de)“TBE（Tris/Borate/EDTA）緩(huan)(huan)沖(chong)液(ye)(ye)”。TAE和(he)TBE緩(huan)(huan)沖(chong)液(ye)(ye)常用于(yu)核(he)酸電泳實(shi)驗中。

不同(tong)(tong)裂解(jie)成分的裂解(jie)強度不同(tong)(tong)，可以根(gen)據不同(tong)(tong)的實(shi)驗需求選用不同(tong)(tong)的裂解(jie)液。

4、IP裂解液：組分為25 mM Tris-HCl, pH 7.4、150 mM NaCl、1% NP-40、1% mM EDTA、5% 甘油。IP裂解(jie)液(ye)是一種改良后的RIPA裂解(jie)液(ye)，具(ju)中等強度效力，可高效溶解(jie)細胞蛋白(bai)，但不(bu)會像RIPA一樣釋放(fang)染色(se)體組DNA或(huo)破壞(huai)蛋白(bai)復(fu)合物。適合下游免疫沉淀或(huo)親(qin)和吸附應用。

5、Tris-Triton裂解液：組分(fen)為10mM Tris，pH7.4、100mM NaCl、1mM EDTA、1mM EGTA（鈣(gai)離子螯合劑(ji)）、1% Triton X-100、10% 甘油、0.1% SDS、0.5% 脫氧膽酸鈉。Tris-Triton裂解液是(shi)非離子(zi)型表面(mian)活性(xing)劑(ji)，效力(li)介于NP-40和SDS之間，下游(you)應用有WB、ELISA、IP。

6、紅細胞裂解液：

紅細胞裂解液(ye)是(shi)一(yi)種(zhong)比較溫(wen)和的紅細胞(bao)去(qu)除方法，它既不(bu)損(sun)傷(shang)有(you)核細胞(bao)又能充分的去除紅細胞(bao)；主(zhu)要用于經酶消化(hua)分(fen)(fen)散的組(zu)織細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)的分(fen)(fen)離純化(hua)，淋巴細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)的分(fen)(fen)離純化(hua)以及組(zu)織細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)蛋白與核酸提取等實(shi)驗中紅細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)的去除(chu)。經紅細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)裂解液裂解得到的組(zu)織細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)中不含紅細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，可進一(yi)步用于原代培養、細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)融合、流式細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)分(fen)(fen)析、核酸與蛋白的分(fen)(fen)離和(he)提取等。

氯(lv)化銨是紅(hong)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)裂解液的(de)主(zhu)要(yao)效應物質，氨根離子(zi)(zi)不能通過(guo)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)膜，而其他離子(zi)(zi)可以通過(guo)，造成細(xi)(xi)(xi)胞(bao)內(nei)外(wai)的(de)離子(zi)(zi)濃度差異，形(xing)成了滲透壓差，外(wai)部(bu)的(de)水分會擴散至細(xi)(xi)(xi)胞(bao)內(nei)，使紅(hong)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)膨脹，達(da)到裂解的(de)效果。由于紅(hong)細(xi)胞(bao)(bao)結構相對簡單，因此(ci)膨脹的耐受能力(li)較(jiao)差，絕大部分就(jiu)會被(bei)漲破。碳酸鹽的主要作用(yong)為(wei)PH緩(huan)沖。EDTA與鎂離子和鈣離子形成(cheng)的螯合(he)物(wu)主要起(qi)到破壞細(xi)胞(bao)(bao)膜穩態的作用(yong)，此(ci)作用(yong)對白細(xi)胞(bao)(bao)影響(xiang)很小(xiao)，所以這種裂解液可以在裂解紅(hong)細(xi)胞(bao)(bao)的同時較(jiao)小(xiao)的影響(xiang)白細(xi)胞(bao)(bao)。

RIPA 貨號：RL1020

使用該產品發表部分文章列表：

1. [2022 IF=2.1] METTL3-mediated methylation of CYP2C19 mRNA may aggravate clopidogrel resistance in ischemic stroke patients.

Author: Quandan Tan, Le Yang, Shanshan Yuan, Danni Zheng, Yapeng Lin, Kejie Chen, Ying He, Shuntian Chen, Junli Hao, Jin Dai, Song He, Fengkai Mao, Xinyi Leng, Haisong Jiang, Jie Yang.

Journal: Open Medicine 2024; 19: 20240899.

Institution： University of Electronic Science and Technology of China

Paper link：