16.5% RealPAGE Tricine預制膠（通用型 U型玻璃板）
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貨(huo)號
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名稱
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規格
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RTD6115-0016
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16.5% RealPAGE Tricine預制膠 通(tong)用(yong)型 U型玻璃板
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10板/盒
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● 產品簡介：
RealPAGE Tricine預(yu)制膠(jiao)可以用來(lai)檢測2.5-40 kD的多肽(tai)大(da)小。預(yu)制膠(jiao)玻璃板尺寸10×8.2 cm，凝膠(jiao)尺寸8.2×7.2 cm，凝膠(jiao)厚(hou)度1.1
mm，梳子12齒，最(zui)大(da)上樣體積30 μl，兼容(rong)伯樂(le)電泳槽。
● 貯存、運輸和效期：
4-8度貯(zhu)存（切勿冷凍）；常溫運(yun)輸；有效期1個月(yue)。
● 使用說明：
一. 電泳緩沖液配制：
10×Tris-Tricine-SDS緩沖(chong)液(ye)配制：
將10×Tris-Tricine-SDS緩沖液（10×TTS）粉末（Cat No：CB010P）置于一干凈的一升燒杯(bei)中，加入500ml超純水(shui)，徹底(di)攪拌混勻，不要調(diao)節pH，即配成500 ml 10×TTS緩沖液。
1×TTS緩沖液配制
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1×TTS配制量 500 ml
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1×TTS配制量 1000 ml
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10×TTS
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50
ml
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100
ml
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超純(chun)水
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450
ml
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900
ml
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注：伯樂Mini
III電泳(yong)槽一次電泳(yong)使用500 ml 1×TTS緩(huan)沖液。
二. 樣品處理：
待上樣的檢測樣品與2×Tricine多肽上樣緩沖液[Cat：TP050]等體積混合，95℃處理5分鐘后上樣。蛋白Marker一般已經含有上樣緩沖液，根據說明書上樣（預染Marker不能加熱處理，非預染Marker上樣前一般要95℃處理5分鐘）。
三. 電泳：
3.1 拆開預(yu)制膠(jiao)包裝，將(jiang)預(yu)制膠(jiao)安裝在合(he)適的電泳槽中。
注：伯樂Mini III或Mini-PROTEAN
Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列電泳槽請確保密封條的安裝方向（左圖）。六一其他系列，君意東方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等電泳槽可以直接使用預制膠。不(bu)兼容Thermol系列電(dian)泳槽。
3.2 將(jiang)電泳槽的內槽加滿1×TTS緩沖液，輕柔拔出梳子，用1ml移(yi)液器將(jiang)梳孔吹洗(xi)干凈(jing)，將(jiang)Marker或蛋(dan)白樣品（已(yi)經過處理）加入點樣孔，穩壓電泳（表1），至(zhi)藍色指示(shi)前沿(yan)至(zhi)分(fen)離膠下(xia)沿(yan)位置時即可停止電泳。整(zheng)個(ge)電泳過程大約(yue)需要100 min。
表1 多肽電泳條件
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恒電壓
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120V
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起(qi)始電流
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80-85
mA/板膠
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結束電流
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25-35
mA/板(ban)膠
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電泳時(shi)間
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~100min
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四.染色：（使用FastBlue蛋白染色液 Cat:RTD6202）
4. 1 將電泳后(hou)的PAGE膠(jiao)取(qu)下放(fang)入塑料容(rong)器中(zhong)，加入適量(liang)染色液（以剛剛覆蓋過膠(jiao)面為適），蛋(dan)白條帶含量(liang)高于1μg的，染色1-2分鐘即可見。
4.2
搖床上(shang)常溫搖動(dong)10-15分鐘，至(zhi)條帶清晰可見(jian)滿足實驗要求后停止染色。
4.3 蒸餾水(shui)(shui)漂(piao)洗凝膠，在蒸餾水(shui)(shui)中脫(tuo)色(se)搖動10-15分鐘，至凝膠基本無藍(lan)色(se)背景，拍照(zhao)記錄結(jie)果。
五. 轉膜：
多(duo)肽轉膜選擇孔(kong)徑0.22 μm PVDF膜（用(yong)前用(yong)甲醇(chun)處理潤濕）或0.22 μm NC膜。
5.1 半(ban)干轉：
使(shi)用伯樂Trans-Blot Turbo半(ban)(ban)干(gan)轉機器(qi)請選擇配(pei)套的5×RealBlot快速半(ban)(ban)干(gan)轉轉膜(mo)緩沖液（貨號(hao)：RT5030）。轉膜(mo)推薦條件：一板(ban)小(xiao)型凝膠（8×10 cm）恒流，1.3 A，7-10
min。
5.2 濕(shi)轉(zhuan)：
濕轉(zhuan)轉(zhuan)膜(mo)緩沖液：25 mM
Tris,192 mM Glycine, 20% Methanol,pH~8.3；
轉膜條件：恒流200-300
mA 40-60 min
實驗示例(li)：
