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非變性(xing)PAGE凝(ning)膠制備及(ji)電泳試劑盒（貨(huo)號:RTD6130）

Native PAGE Gel Preparation and Electrophoresis Kit

● 產品(pin)組成：

● 產品簡介：

本公司提供(gong)的非(fei)變性PAGE凝(ning)膠(jiao)制(zhi)(zhi)備(bei)及電(dian)泳試劑盒包含(han)凝(ning)膠(jiao)制(zhi)(zhi)備(bei)及電(dian)泳所(suo)需(xu)的全部試劑，用戶(hu)只(zhi)需(xu)自備(bei)制(zhi)(zhi)膠(jiao)器具和蒸(zheng)餾(liu)水。本試劑盒可用于配制(zhi)(zhi)非(fei)變性(native)PAGE凝(ning)膠(jiao)。本試劑盒可配制(zhi)(zhi)30-50塊常規大(da)小的非(fei)變性PAGE膠(jiao)。

特(te)別說(shuo)明：由于本(ben)系(xi)(xi)統采用非連續Laemmli凝(ning)(ning)膠(jiao)系(xi)(xi)統，分(fen)離膠(jiao)pH為8.8，因(yin)此要求待分(fen)離的蛋白等(deng)電點(dian)pI≤7.0，這樣蛋白在凝(ning)(ning)膠(jiao)系(xi)(xi)統內帶(dai)負電荷，在凝(ning)(ning)膠(jiao)電泳(yong)中才能正常向正極泳(yong)動。如果待分(fen)離的蛋白等(deng)電點(dian)pI＞7.0，請選擇堿(jian)性電泳(yong)凝(ning)(ning)膠(jiao)系(xi)(xi)統分(fen)離（貨號RTD6131）。

● 使用說明：

一 配制分離膠（各試劑(ji)使(shi)用量請參考表二）

根據目(mu)的(de)蛋白的(de)分(fen)子量大(da)小選擇合適的(de)凝膠(jiao)(jiao)濃度（表一），再按照下(xia)面的(de)分(fen)離膠(jiao)(jiao)配方(fang)表（表二）配制非變性PAGE的(de)分(fen)離膠(jiao)(jiao)(即下(xia)層膠(jiao)(jiao))。

表一(yi) 不同濃度(du)的(de)PAGE分離膠(jiao)的(de)最佳分離范圍：

10% APS配制-5 ml：

將(jiang)0.5 gAPS干粉溶于(yu)5 ml滅(mie)菌(jun)水中，徹底溶解(jie)后分裝(zhuang)，1 ml/支，-20℃備存(cun)，每(mei)次(ci)取(qu)一(yi)管(guan)使用(yong)。10% APS應(ying)盡量(liang)減少(shao)室溫(wen)存(cun)放時間(jian)(jian)，以防失(shi)效。10%APS在4℃有(you)效期為一(yi)周(zhou)，-20℃有(you)效期6個(ge)月(yue)。若發現凝膠聚(ju)合時間(jian)(jian)延長，應(ying)考(kao)慮更換(huan)使用(yong)-20度保存(cun)的10% APS。

制備分(fen)離膠步驟：

1．根(gen)據下表，將不同(tong)體積的成分(fen)在(zai)小燒杯(bei)或試管中混(hun)合；先后加(jia)入TEMED和10%APS，輕輕攪拌(ban)使其混(hun)勻，避(bi)免產生氣(qi)泡(pao)

2．在(zai)凝(ning)膠(jiao)模具中灌(guan)入適量分離膠(jiao)溶液（對于mini-gel，凝(ning)膠(jiao)液加至約(yue)距(ju)前玻璃板頂(ding)端1.5 cm或距(ju)梳齒(chi)約(yue)0.5 cm即可(ke)），然后在(zai)分離膠(jiao)溶液上(shang)輕輕覆蓋一層1-5 cm的水層，使凝(ning)膠(jiao)表面保持平整。

3．靜置(zhi)15-20分鐘，待(dai)分離膠和水層之間出現(xian)一個清晰的界面(mian)后，說明凝膠已聚合。

注：凝膠(jiao)的聚合(he)(he)時(shi)(shi)間與(yu)環境(jing)(jing)溫度(du)有關(guan)。夏天溫度(du)較高時(shi)(shi)，聚合(he)(he)較快；冬(dong)天氣溫低時(shi)(shi)，聚合(he)(he)時(shi)(shi)間會延長。可以(yi)根據(ju)環境(jing)(jing)溫度(du)的不(bu)同調節APS的加入量。

1．去除覆(fu)蓋(gai)在分離膠上的水層。

2．按照表一將不(bu)同成分在一個(ge)小燒杯或試(shi)管中(zhong)混(hun)合；先后(hou)加入(ru)TEMED和10%過硫酸(suan)銨，輕(qing)輕(qing)攪拌使其混(hun)勻，避免產生氣(qi)泡。

3．將濃縮膠(jiao)溶(rong)液加(jia)至分離膠(jiao)的上面，直至凝(ning)膠(jiao)溶(rong)液到達前玻(bo)璃板的頂端。

4．將梳子插入凝膠內(nei)，避免產(chan)生氣泡。

5．靜置(zhi)30-60分鐘(zhong)，等待濃縮膠聚合。

注：凝膠的聚合(he)時(shi)間與環境溫度有(you)關。夏(xia)天溫度較高時(shi)，聚合(he)較快；冬天氣溫低(di)時(shi)，聚合(he)時(shi)間會(hui)延長。可以根據環境溫度的不同調節APS的加入量。

三 電泳：

凝(ning)膠凝(ning)固好后，根據以下配方準備(bei)電泳緩沖液(ye)。

5×Tris-甘氨酸電泳緩(huan)沖液（不含(han)SDS）的配制-1 L：將(jiang)一包(bao)5×Tris-甘氨(an)酸(suan)電(dian)泳緩(huan)(huan)沖(chong)液(ye)(ye)干粉全部倒入1L燒(shao)杯中，加入約(yue)900 ml水(shui)徹(che)底溶解，用水(shui)定容至1 L，即配(pei)成5×Tris-甘氨(an)酸(suan)電(dian)泳緩(huan)(huan)沖(chong)液(ye)(ye)（此溶液(ye)(ye)不用調節pH值）。用前再稀釋5倍即配(pei)成1×Tris-甘氨(an)酸(suan)電(dian)泳緩(huan)(huan)沖(chong)液(ye)(ye)。

在電泳(yong)槽的內槽內加入1×Tris-甘氨(an)酸電泳(yong)緩沖(chong)液(ye)(讓(rang)電泳(yong)緩沖(chong)液(ye)漫(man)過加樣(yang)孔(kong))，輕輕的撥出梳子，隨后(hou)在電泳(yong)槽外槽加入適(shi)量的1×Tris-甘氨(an)酸電泳(yong)緩沖(chong)液(ye)。上樣(yang)，電泳(yong)，一(yi)般是濃縮(suo)膠80V，分離(li)膠120V恒壓，等指(zhi)示前沿溴酚蘭(lan)電泳(yong)到分離(li)膠下(xia)緣后(hou)，結束電泳(yong)，染色或者進(jin)行下(xia)一(yi)步實驗。

實驗示例

RTD6130 非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒發表文章

1. [2021 IF=6.95] A teleost interleukin-16 is implicated in peripheral blood leukocytes recruitment and anti-bacterial immunity.

Product: RTD6130 非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒

Author:Xue-peng Li, Guan-yu Chen, Jian Zhang, Deng-lai Li, Ji-xing Feng.

Journal: International Journal of Biological Macromolecules. 2021,Vol.187, 821-829.

Institution： School of Ocean, Yantai University, Yantai, China

Paper link：

2. [IF=17.69 2021] Turn air-captured CO2 with methanol into amino acid and pyruvate in an ATP/NAD(P)H- free chemoenzymatic system.

Product: RTD6130 非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒; PL111 5×非變性非還原蛋白上樣緩沖液; RTD6142 高分子量非變性電泳蛋白質Marker II（45-669 kD）

Author: Jianming Liu, Han Zhang, Yingying Xu, HaoMeng, An-Ping Zeng.

Journal: Nature Communications. 2023，14:2772.

Institution： Westlake University

Paper link： //www.nature.com/articles/s41467-023-38490-w