彩虹預(yu)染超低分子量蛋白質Marker II（3-40 kD）
Rainbow Prestained Ultra Low Molecular Weight
Protein Marker II（3-40 kD）
●產(chan)品編號及規格(ge)：
RTD6145-01 10 T（50 μl）
RTD6145-02 50 T（250 μl）
● 儲存條件：
-20℃保存(cun)，有(you)效期12個月
● 產品簡介(jie)：
彩(cai)虹預染超低分子量蛋白質(zhi)Marker II可以(yi)直(zhi)接(jie)觀察蛋(dan)白電泳及(ji)清晰判(pan)斷(duan)Western Blotting的(de)轉膜效果。本產品由9種多肽和蛋白質組(zu)成，分子(zi)量大小(xiao)為(wei) 3 kD，4.2 kD，6.5 kD，10 kD（綠(lv)色），15 kD，20 kD，25 kD，30 kD，40 kD（紅色(se)） (注(zhu)：蛋白(bai)大小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非(fei)預染蛋白(bai)Marker標定過。)。
● 使用(yong)說明：
第一次收到該產品，常(chang)溫融(rong)化后，徹底混勻，離心(xin)快甩將溶(rong)液(ye)完全收集(ji)到管底(di)。
一. 制(zhi)膠(jiao)：
I 配制分離(li)膠
1．按照表一將不同體積的雙蒸水、40% PAA（19:1）、凝膠緩沖液和(he)乙二醇加入到小燒杯中混合。
2．加入10%APS和TEMED，立即混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。
3．在凝膠(jiao)(jiao)模具中迅速灌(guan)入(ru)適量(liang)分(fen)離(li)膠(jiao)(jiao)溶液，然后在分(fen)離(li)膠(jiao)(jiao)溶液上輕(qing)輕(qing)覆(fu)蓋一層1
cm的無水乙醇，使凝(ning)膠(jiao)表(biao)面保持(chi)平(ping)整。
4．靜(jing)置15-30分鐘，待分離(li)膠和乙醇層之間出現一個清晰的界面表示凝膠已聚合。
表一 （一塊(kuai)1 mm mini膠用量）
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分離(li)膠
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濃縮膠(jiao)
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18％T, 5%C /5 ml
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5％T, 3.3%C/2 ml
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40% PAA（19:1）
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2.25 ml
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/
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40% PAA (29:1)
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0.25 ml
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4×凝膠緩沖(chong)液
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1.25 ml
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0.5 ml
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乙二醇（電泳級(ji)）
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1.5 ml
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ddH2O
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/
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1.25ml
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10％APS
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50 μl
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20 μl
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TEMED
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5 μl
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2 μl
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II 配制濃(nong)縮膠(jiao)
去除(chu)覆蓋(gai)在分離膠上的乙醇層，用濾紙將殘留乙醇吸去。
1．按(an)照表一將不同體(ti)積的雙(shuang)蒸水、40%PAA（29:1）和凝膠緩(huan)沖(chong)液加入到小燒杯中混合。
2．加(jia)入(ru)10%過硫酸銨和TEMED，立即(ji)混勻5-10秒(miao)，以使溶液充分混勻。
3．將(jiang)梳子(zi)插入凝膠內(nei)，避免(mian)產生(sheng)氣泡。
4．靜置(zhi)30-60分鐘(zhong)裝待凝膠聚合
二(er). 電泳：
1. 取Marker樣(yang)品，充分混(hun)勻后(hou)備用。不要加熱處(chu)理。
2. 電泳前，將10×陽極緩(huan)沖液（Cat No：AB080）和10×陰極緩(huan)沖液（Cat No：CB010）用蒸餾水稀釋成1×緩(huan)沖液備用。將電泳槽(cao)的外槽(cao)加入1×陽極緩(huan)沖液，內槽(cao)加入1×陰極緩(huan)沖液，輕柔拔(ba)出梳子，將Marker或蛋白樣品(pin)（已經過2×Tricine上(shang)樣緩(huan)沖液[Cat No：TP050]處(chu)理）加入點樣孔，參考(kao)下表進行(xing)電泳，至每條帶(dai)都清晰(xi)可見時停止電泳。整個(ge)電泳過程大(da)約需要2-3個(ge)小時。
表二 多(duo)肽電泳條(tiao)件
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恒電(dian)壓
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150V
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起始電流
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60-75mA/板膠
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結束電流(liu)
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15-25mA/板膠
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電泳時間
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2.5-3小時
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三(san). 染色
根(gen)據(ju)常(chang)規實驗步驟(zou)，用配(pei)方(fang)6和(he)7（表三）進行(xing)染色和(he)觀察。如果使用配(pei)方(fang)6進行(xing)染色時效果不好或考(kao)慮其毒性，請(qing)選擇本公(gong)司的考(kao)馬斯亮藍蛋白(bai)膠快速染色液（Cat No：RTD6201），該(gai)產品除具(ju)有染色(se)快，無毒(du)，靈敏性高等特點外，還(huan)能對小(xiao)肽在染色(se)中(zhong)(zhong)起到(dao)固定作用，不至于小(xiao)肽在染色(se)和脫色(se)中(zhong)(zhong)從(cong)凝(ning)膠中(zhong)(zhong)脫離，是常規染色(se)液的理想替(ti)代品。
注：預染(ran)蛋(dan)(dan)白(bai)Marker由于嵌合(he)了染(ran)料，在(zai)不(bu)同(tong)的(de)凝(ning)膠系(xi)(xi)統中(zhong)遷移率會有不(bu)同(tong)，因此只能用來(lai)(lai)粗(cu)略(lve)估計目(mu)的(de)蛋(dan)(dan)白(bai)的(de)大小(xiao)。如要(yao)精確(que)確(que)定蛋(dan)(dan)白(bai)的(de)大小(xiao)，請在(zai)同(tong)一(yi)凝(ning)膠系(xi)(xi)統中(zhong)用非預染(ran)蛋(dan)(dan)白(bai)Marker來(lai)(lai)標(biao)定預染(ran)蛋(dan)(dan)白(bai)Marker的(de)分(fen)子量。
表三(san) 小分子蛋白質SDS-PAGE電泳試劑配制(zhi)
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1. 40%PAA（29:1）（配(pei)制濃(nong)縮膠(jiao)）
貨(huo)號： AC2914
丙稀酰胺 38.67g
甲叉雙丙(bing)稀酰胺 1.33g
用ddH2O溶解后定容至100
ml，過濾后(hou)使(shi)用。
貯(zhu)存(cun)：4℃
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2. 40% PAA（19:1） （配制(zhi)分離膠）
貨號：AC1914
丙稀酰胺 38 g
甲(jia)叉(cha)雙(shuang)丙(bing)稀酰胺(an) 2 g
用ddH2O溶解后(hou)定容至100
ml，過(guo)濾后使(shi)用。
貯存(cun)：4℃
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3. 4×凝膠緩沖液(ye)（配制(zhi)凝膠用）
貨號：GB010
[3 M Tris; 0.4% SDS; pH8.45]
Tris堿 36.3 g；ddH2O 80ml
0.4
g SDS或4 ml 10％ SDS
用HCl調(diao)pH值(zhi)至8.45；用ddH2O定容(rong)至100
ml
貯存：4℃
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4. 10×陽極緩(huan)(huan)沖液（下槽緩(huan)(huan)沖液）
貨號：AB080
[2
M Tris pH8.9]
Tris堿 121.1g；ddH2O 400ml；用HCl調pH值(zhi)至8.9；用ddH2O定容至500ml
貯存：4℃
注：使(shi)用(yong)前稀釋成1×陽極緩沖液使用。
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5. 10×陰極緩沖液（上槽緩沖液）
貨號：CB010
[1
M Tris; 1 M Tricine ;1% SDS; pH 8.3]
Tris堿 121.14g；Tricine 179.2g；SDS 10 g
用ddH2O溶(rong)解，定容(rong)至1000
ml(不用(yong)調pH)。
貯存(cun)：4℃
注：使用前稀釋(shi)成(cheng)1×陰極緩沖液(ye)使用(yong)
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6. 染色液
貨號：RTD6203
冰醋酸 100 ml
考馬斯亮(liang)藍G-250 0.25 g
水(shui) 900 ml
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7. 脫色液(ye)
貨號(hao)：RTD6204
冰醋酸 100 ml
水 900 ml
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8. 2×Tricine蛋白樣品上樣緩沖液（10ml）
貨(huo)號：TP050
1ml1MTris-HCl pH6.8；2.4
ml 甘油(you)；0.8 g SDS；0.31
g DTT（或者(zhe)400 μl β-巰基乙(yi)醇(chun)）；2
mg 考馬斯亮藍G-250；用滅菌水定容至10ml
混勻分裝-20℃貯存備用
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多肽(tai)電泳(yong)配套試劑
使用RTD6145 彩虹預染超低分子量Marker
II（3-40 kD）產品發表部分文章列表：
1. [2022 IF=13.6] Inactivation mechanism of cold plasma combined with 222 nm ultraviolet for
spike protein and its application in disinfecting of SARS-CoV-2
Author: Xiaowei
Sheng, Jin Wang, Luling Zhao, Wenjing Yan, Jing Qian, Zhaobin Wang, Jianhao
Zhang, Vijaya Raghavan
Marker: RTD6145
彩(cai)虹預(yu)染(ran)超低(di)分子量Marker
II（3-40kD）
Journal: Journal of Hazardous Materials 465 (2024) 133458
Institution: Nanjing
Agricultural University
Paper link：