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彩虹預染超低分子量蛋白質Marker III（1.5-45 kD）

Rainbow Prestained Ultra Low Molecular Weight Protein Marker III（1.5-45 kD）

●產品編號及規格：

RTD6147   10 T（50 μl）

● 儲存、運輸及效期：

  -20℃保存，濕冰運輸，有效期1年。

● 產品簡介：

    彩虹預染超低分子量蛋白質Marker III可以直接觀察蛋白電泳及清晰判斷Western Blotting的轉膜效果。本產品由7種多肽和蛋白質組成，分子量大小為 1.5 kD，4 kD（紅色），8 kD， 15 kD（綠色），20 kD， 30 kD，45 kD (注：蛋白大小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非預染蛋白Marker標定過。)

● 使用說明(ming)：

第一次收到該產品，常溫融化后，徹底混勻，離心快甩將溶液完全收集到管底。

一. 制膠：

說明：可以根據以下步驟自己制備凝膠。也可以選擇Tris-Tricine-PAGE凝膠制備及電泳試劑盒（貨號：RTD6122）進行實驗。

1.1 配制分離膠

1.1.1 按照表1將(jiang)組份(fen)加入到小燒(shao)杯中混(hun)合。

1.1.2加入10%APS和TEMED，立即混勻5-10秒，以使(shi)溶液充(chong)分混勻。

1.1.3 在玻璃板(ban)中(zhong)迅速(su)灌入適量(liang)(liang)分離膠(jiao)(jiao)溶液，使液面和(he)短玻璃板(ban)上沿之間的距離比梳(shu)齒(chi)長0.5 cm即可(ke)（注(zhu)：此溶液為過量(liang)(liang)，請勿全部注(zhu)入）。然后在分離膠(jiao)(jiao)溶液上輕輕覆(fu)蓋一層1-2 cm的無(wu)水乙醇(chun)，使凝膠(jiao)(jiao)表面保持平(ping)整。

1.1.4 靜置15-30分鐘(zhong)，待分離膠(jiao)和乙醇層(ceng)之間出(chu)現一個(ge)清(qing)晰的界面(mian)表示凝膠(jiao)已聚(ju)合。

注：凝膠的(de)聚(ju)合時間與(yu)環(huan)境溫度有關(guan)。夏天溫度較高時，聚(ju)合較快；冬天氣溫低(di)時，聚(ju)合時間會延長(chang)。可以根據(ju)表1的(de)標準(zhun)條(tiao)(tiao)件(jian)調節(jie)促凝劑的(de)加入量。分離膠25℃條(tiao)(tiao)件(jian)下，約20分鐘可以聚(ju)合。

表1  （一塊1 mm mini膠用量）

1.2 配制濃縮膠

1.2.1 去(qu)除(chu)覆(fu)蓋在(zai)分離膠上的乙醇(chun)層，用濾紙將殘留(liu)乙醇(chun)吸去(qu)。

1.2.2 按照表1將各(ge)組份加入(ru)到小(xiao)燒(shao)杯(bei)中混合(he)。

1.2.3 加入10%過硫酸(suan)銨和TEMED，立即(ji)混(hun)(hun)勻(yun)5-10秒，以使溶(rong)液充分混(hun)(hun)勻(yun)。

1.2.4 將梳子插入(ru)凝膠內，避(bi)免(mian)產生氣泡。

1.2.5 靜置(zhi)30-60分鐘裝(zhuang)待凝膠聚合(he)

注：凝膠(jiao)的(de)聚(ju)(ju)合(he)時(shi)間(jian)(jian)與(yu)環(huan)境(jing)溫度有關。夏天溫度較高(gao)時(shi)，聚(ju)(ju)合(he)較快(kuai)；冬(dong)天氣溫低時(shi)，聚(ju)(ju)合(he)時(shi)間(jian)(jian)會延長。可(ke)以根據表1的(de)標(biao)準條件調(diao)節促凝劑的(de)加入(ru)量。濃(nong)縮(suo)膠(jiao)25℃條件下，約40分鐘可(ke)以聚(ju)(ju)合(he)。

二. 電泳：

2.1 取Marker樣(yang)品，充分混勻后備用。不(bu)要加(jia)熱處理。

2.2 電(dian)泳前，將(jiang)10×陽(yang)極(ji)緩(huan)(huan)(huan)沖(chong)(chong)液(ye)(ye)(ye)（Cat No：AB080）和10×陰極(ji)緩(huan)(huan)(huan)沖(chong)(chong)液(ye)(ye)(ye)（Cat No：CB010）用(yong)蒸餾水稀釋成(cheng)1×緩(huan)(huan)(huan)沖(chong)(chong)液(ye)(ye)(ye)備用(yong)。將(jiang)電(dian)泳槽的外(wai)槽加(jia)入1×陽(yang)極(ji)緩(huan)(huan)(huan)沖(chong)(chong)液(ye)(ye)(ye)，內(nei)槽加(jia)入1×陰極(ji)緩(huan)(huan)(huan)沖(chong)(chong)液(ye)(ye)(ye)，輕柔拔出梳子，將(jiang)Marker或蛋白樣(yang)品（已經過2×Tricine上樣(yang)緩(huan)(huan)(huan)沖(chong)(chong)液(ye)(ye)(ye)[Cat No：TP050]處理）加(jia)入點樣(yang)孔，參考下表(biao)進行電(dian)泳，至(zhi)每(mei)條帶都清晰可見時(shi)停止電(dian)泳。整(zheng)個(ge)電(dian)泳過程大約需要2-3個(ge)小時(shi)。

表2 多肽電泳條件

三. 染色

根據常規實驗步驟，用配方6和7（表3）進行染色和觀察。如果使用配方6進行染色時效果不好或考慮其毒性，請選擇本公司的FastBlue蛋白染色液（Cat No：RTD6202），該產品(pin)除具有(you)染(ran)色(se)快，無毒(du)，靈敏性高等(deng)特點(dian)外(wai)，還能對小(xiao)肽在(zai)染(ran)色(se)中起到(dao)固(gu)定作(zuo)用，不至于小(xiao)肽在(zai)染(ran)色(se)和脫(tuo)色(se)中從(cong)凝膠(jiao)中脫(tuo)離，是常規染(ran)色(se)液的理想替代品(pin)。

表3 小分子蛋白質SDS-PAGE電泳試劑配制