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RealPAGE 3-8% Tris-醋酸預制膠

● 產品組成：

● 產品簡介：

Tris-醋酸(suan)-SDS-PAGE凝膠電(dian)泳(yong)適合于(yu)分(fen)離(li)高分(fen)子量(liang)蛋(dan)白，可以有(you)(you)效(xiao)分(fen)離(li)50-500 kD范圍內蛋(dan)白；電(dian)泳(yong)體系(xi)呈中(zhong)性(xing)，抑制半胱氨酸(suan)的(de)二(er)次氧(yang)化(hua)，防(fang)止二(er)硫鍵(jian)在凝膠中(zhong)交聯；在變性(xing)還原電(dian)泳(yong)中(zhong)，電(dian)泳(yong)緩沖體系(xi)中(zhong)加入抗氧(yang)化(hua)劑，整(zheng)個電(dian)泳(yong)過程都(dou)在還原條件下進行，有(you)(you)效(xiao)防(fang)止二(er)硫鍵(jian)的(de)形成(cheng)。

RealPAGE 3-8% Tris-醋(cu)酸預制膠為(wei)(wei)梯度凝膠，濃度為(wei)(wei)3-8%，厚度為(wei)(wei)1.1 mm，12齒，每個泳道(dao)可(ke)以(yi)上(shang)樣(yang)最(zui)大30 μl樣(yang)品。另(ling)外，本公(gong)司(si)也提供Tris-醋(cu)酸-SDS-PAGE電(dian)泳試劑(ji)盒(he)（貨號：RTD6155）包含預制膠、蛋白上(shang)樣(yang)、蛋白電(dian)泳、染(ran)色及轉膜(mo)所需的全部(bu)試劑(ji)。

● 貯存及運輸：

   按照標簽(qian)溫(wen)度貯存；試劑盒(he)常溫(wen)運輸。

● 使用說明：

1. 實驗準備：

1.1 20×樣(yang)品(pin)還(huan)原劑為(wei)干粉，4℃貯存(cun)。用前加入1ml超純水(shui)震蕩徹底(di)溶解后使(shi)用，已經溶解的20×樣(yang)品(pin)還(huan)原劑-20℃貯存(cun)。

1.2 400×抗氧(yang)化劑(ji)(ji)為干粉，常溫貯存(cun)。用前加入15 ml超純(chun)水震(zhen)蕩徹底溶解(jie)后使(shi)用，已(yi)經溶解(jie)的400×抗氧(yang)化劑(ji)(ji)-20℃貯存(cun)。

2. 電泳：

注：伯樂Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列電泳槽請確保密封條的安裝方向（如圖）。

六一其他系列，君意東方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等電泳槽可以直接使用預制膠。

不兼容Thermol系列電泳槽。

2.2 準備1×電泳緩沖液：

2.2.1 外槽緩沖(chong)(chong)(chong)液(ye)(ye)：取適(shi)量(liang)體積1×電泳緩沖(chong)(chong)(chong)液(ye)(ye)用于外槽緩沖(chong)(chong)(chong)液(ye)(ye)。

2.2.2 內(nei)槽緩沖液(ye)：對于還原(yuan)樣(yang)品(pin)電泳(yong)，200 ml 1×電泳(yong)緩沖液(ye)中加(jia)0.5 ml 400×抗(kang)氧化劑，混(hun)合均勻后(hou)用于內(nei)槽緩沖液(ye)。對于非還原(yuan)樣(yang)品(pin)電泳(yong)，直接在內(nei)槽中加(jia)入1×電泳(yong)緩沖液(ye)，不(bu)要添加(jia)400×抗(kang)氧化劑。

2.3準備上樣樣品：

注：表格以配制10 μl樣品為例，其他體積按照比例調整。

2.4電泳過程；

在電(dian)泳槽(cao)的內槽(cao)內加(jia)入1×電(dian)泳緩(huan)沖液(讓電(dian)泳緩(huan)沖液漫過加(jia)樣(yang)孔)，輕(qing)(qing)輕(qing)(qing)的撥出梳子，用1ml吸頭(tou)沖洗加(jia)樣(yang)孔3次；隨后在電(dian)泳槽(cao)外槽(cao)加(jia)入適量(liang)的1×電(dian)泳緩(huan)沖液。上樣(yang)，電(dian)泳。

3. 染色：

3.1 將電泳(yong)后的PAGE膠取下放入塑料容器中，加入適量(liang)FastBlue蛋白(bai)染色液(ye)（以剛(gang)剛(gang)覆蓋過膠面為適），搖床常溫搖動，條帶5-10分鐘(zhong)即可見（蛋白(bai)含量(liang)高于(yu)1 μg條帶）。

3.2 搖(yao)床常(chang)溫繼(ji)續搖(yao)動(dong)15-30分(fen)鐘(zhong)至條帶(dai)清晰可見。

3.3 加入適(shi)量蒸餾(liu)水脫色，期間更換(huan)1-2次蒸餾(liu)水，搖床常溫搖動10-15分鐘至背景干凈。

3.4 觀(guan)察保(bao)存結果。

4. 轉膜：

4.1 轉印膜選擇：

Tris-醋酸凝膠(jiao)轉膜(mo)(mo)(mo)可以使用(yong)NC膜(mo)(mo)(mo)和PVDF膜(mo)(mo)(mo)，需(xu)要(yao)選擇0.45 μm孔徑。PVDF膜(mo)(mo)(mo)使用(yong)前注意需(xu)要(yao)用(yong)甲醇潤濕活化(hua)。

4.2 10×Tris-醋酸轉膜緩沖液（溶液型）配制：

將10×Tris-醋(cu)酸轉膜(mo)緩(huan)沖(chong)(chong)液(ye)（濕轉，粉末型(xing)）粉末溶解于500 ml超(chao)純水中(zhong)，即配成(cheng)500 ml 10×Tris-醋(cu)酸轉膜(mo)緩(huan)沖(chong)(chong)液(ye)（溶液(ye)型(xing)），不要調(diao)節pH，pH~7.2。

4.3 準備1×轉膜緩沖液：

注：甲(jia)醇(chun)和SDS在(zai)轉膜(mo)(mo)中有拮抗作(zuo)用(yong)。甲(jia)醇(chun)使(shi)蛋(dan)白更(geng)加(jia)結合(he)在(zai)膜(mo)(mo)上，而SDS讓(rang)蛋(dan)白更(geng)加(jia)離開膜(mo)(mo)。因此對大蛋(dan)白轉膜(mo)(mo)來說(shuo)，多加(jia)SDS，少(shao)加(jia)甲(jia)醇(chun)；而對小蛋(dan)白轉膜(mo)(mo)，多加(jia)甲(jia)醇(chun)，少(shao)加(jia)SDS。

4.4 轉膜條件：

以下轉膜條(tiao)件僅(jin)供參考，客(ke)戶(hu)針對自(zi)己的目的蛋白(bai)，最(zui)好經(jing)過1-2次預實驗(yan)后，確定(ding)最(zui)佳的轉膜條(tiao)件。

實驗示例：