Tris-醋酸(suan)-SDS-PAGE電泳(yong)試(shi)劑盒（變性電泳(yong)）
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貨號
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名(ming)稱
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規(gui)格
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RTD6155
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Tris-醋酸-SDS-PAGE電泳試劑盒(he)（變性電泳）
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10次
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● 產品組成：
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貨號
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名稱
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規格
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保存
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RTD6154-0308
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3-8%
RealPAGE Tris醋酸預制膠(U型(xing)板(ban),通用型,12孔）
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10板/盒(he)
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4℃
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RTD6155-01
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20×樣品還原劑
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1
ml
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4℃
(配制后-20℃貯存)
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TA1510
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400×抗(kang)氧化劑
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15
ml
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4℃
(配制(zhi)后-20℃貯存(cun))
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TA050
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10×Tris-醋酸-SDS電(dian)泳緩沖(chong)液(變性電泳,溶(rong)液型）
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500
ml
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RT
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PL112-01
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5×MonoClolor蛋白上樣緩沖液 (變性(xing)，非還原)
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1 ml
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-20℃
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RTD6202
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FastBlue蛋白(bai)快速染色液
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500 ml
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RT
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TA5030P
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10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(ye)（濕轉，粉末型）
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500
ml
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RT
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說明書
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一份
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-
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● 產品簡介：
Tris-醋酸-SDS-PAGE凝膠電(dian)泳適(shi)合于分離高(gao)分子量蛋白，可以(yi)有效(xiao)分離50-500 kD范圍(wei)內蛋白；電(dian)泳體(ti)系呈中(zhong)性，抑制半胱氨酸的二次氧化，防止二硫鍵(jian)在(zai)凝膠中(zhong)交聯；在(zai)變性還(huan)原(yuan)電(dian)泳中(zhong)，電(dian)泳緩沖體(ti)系中(zhong)加入抗(kang)氧化劑，整個電(dian)泳過程都在(zai)還(huan)原(yuan)條件下進行，有效(xiao)防止二硫鍵(jian)的形(xing)成(cheng)。
本(ben)公司提供的Tris-醋酸-SDS-PAGE電(dian)泳(yong)試(shi)劑(ji)盒包含預制(zhi)膠(jiao)(jiao)、蛋(dan)白(bai)上(shang)樣(yang)、蛋(dan)白(bai)電(dian)泳(yong)、染色及(ji)轉膜所(suo)需的全部試(shi)劑(ji)。試(shi)劑(ji)盒配套的預制(zhi)膠(jiao)(jiao)為(wei)(wei)梯度凝膠(jiao)(jiao)，濃度為(wei)(wei)3-8%，厚(hou)度為(wei)(wei)1.1 mm，12齒，每個泳(yong)道(dao)可以上(shang)樣(yang)最大30 μl樣(yang)品(pin)。
本試劑盒用于(yu)蛋白變性電泳，本試劑盒可以使用10次。
● 貯存及運輸：
按照標簽溫(wen)度貯存；試劑盒常溫(wen)運輸(shu)。
● 使用說明：
1. 實驗準備：
1.1 20×樣品(pin)還原劑為干粉，4℃貯(zhu)存(cun)。用(yong)前(qian)加入1ml超純水震蕩徹底溶解(jie)后使用(yong)，已經溶解(jie)的20×樣品(pin)還原劑-20℃貯(zhu)存(cun)。
1.2 400×抗(kang)氧(yang)化劑(ji)為干(gan)粉，常溫貯存(cun)。用(yong)前加(jia)入(ru)15 ml超純水震蕩徹底(di)溶(rong)解(jie)后使用(yong)，已經溶(rong)解(jie)的400×抗(kang)氧(yang)化劑(ji)-20℃貯存(cun)。
2. 電泳：
注：伯樂Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列電泳槽請確保密封條的安裝方向（如圖）。
六一其他系列，君意東方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等電泳槽可以直接使用預制膠。
不兼容Thermol系列電泳槽。
2.2 準備1×電泳緩沖液：
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總體(ti)積
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1000
ml
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10×Tris-醋(cu)酸-SDS電泳緩沖液
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100 ml
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超純水
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900 ml
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2.2.1 外槽緩沖(chong)液：取適(shi)量(liang)體(ti)積1×電泳緩沖(chong)液用(yong)于外槽緩沖(chong)液。
2.2.2 內(nei)(nei)槽緩(huan)沖(chong)液(ye)(ye)：對于還原(yuan)樣(yang)(yang)品電(dian)泳，200 ml 1×電(dian)泳緩(huan)沖(chong)液(ye)(ye)中(zhong)加0.5 ml 400×抗氧化(hua)劑，混(hun)合均勻后用于內(nei)(nei)槽緩(huan)沖(chong)液(ye)(ye)。對于非還原(yuan)樣(yang)(yang)品電(dian)泳，直接在(zai)內(nei)(nei)槽中(zhong)加入1×電(dian)泳緩(huan)沖(chong)液(ye)(ye)，不要添加400×抗氧化(hua)劑。
2.3準備上樣樣品：
注：表格以配制10 μl樣品為例，其他體積按照比例調整。
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總體積(ji)10 μl
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組份
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非還原樣品
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還(huan)原樣品
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蛋白(bai)樣品(pin)
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x μl
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x μl
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5×MonoClolor蛋白上樣緩沖液 (變性，非還原)
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2 μl
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2 μl
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20×樣品(pin)還原劑(ji)
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-
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0.5 μl
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超純水
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補至10 μl
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95℃ 10分(fen)鐘(zhong)
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2.4電泳過程；
在(zai)電泳(yong)槽(cao)的內槽(cao)內加入1×電泳(yong)緩(huan)(huan)沖液(讓電泳(yong)緩(huan)(huan)沖液漫過(guo)加樣孔)，輕(qing)輕(qing)的撥(bo)出梳子(zi)，用1ml吸(xi)頭沖洗加樣孔3次；隨后在(zai)電泳(yong)槽(cao)外槽(cao)加入適量的1×電泳(yong)緩(huan)(huan)沖液。上(shang)樣，電泳(yong)。
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恒電壓
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起始電流(liu)
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結(jie)束電流(liu)
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電泳時間
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150V
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40-55 mA/板膠
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25-40 mA/板膠(jiao)
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60+min
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注：冰(bing)浴電泳(yong)（可選）
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3. 染色：
3.1 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器(qi)中(zhong)，加(jia)入適量FastBlue蛋白染色(se)液（以剛剛覆蓋過膠面為適），搖(yao)床常溫搖(yao)動，條帶5-10分鐘即可見（蛋白含(han)量高于1
μg條帶）。
3.2 搖床常溫繼續搖動(dong)15-30分鐘至條帶(dai)清晰可見(jian)。
3.3 加(jia)入適量蒸餾水脫色，期間更換1-2次蒸餾水，搖(yao)床常溫搖(yao)動10-15分鐘(zhong)至(zhi)背景干凈。
3.4 觀察(cha)保存結果。
4. 轉膜：
4.1 轉印膜選擇：
Tris-醋酸凝膠轉膜可以(yi)使用(yong)(yong)NC膜和PVDF膜，需(xu)要選擇0.45 μm孔徑(jing)。PVDF膜使用(yong)(yong)前注意需(xu)要用(yong)(yong)甲醇潤(run)濕活化。
4.2 10×Tris-醋酸轉膜緩沖液（溶液型）配制：
將10×Tris-醋(cu)酸轉膜緩(huan)沖(chong)液(ye)（濕轉，粉(fen)末(mo)型(xing)）粉(fen)末(mo)溶解于500 ml超純水(shui)中，即(ji)配成500 ml 10×Tris-醋(cu)酸轉膜緩(huan)沖(chong)液(ye)（溶液(ye)型(xing)），不要調節pH，pH~7.2。
4.3 準備1×轉膜緩沖液：
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1×即用型轉膜緩沖液 配制量 1升
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10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(溶(rong)液型)
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100
ml
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變性蛋(dan)白(bai)
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非變性蛋白(bai)
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＜20 kD蛋白
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無(wu)水甲醇
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20%
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5-10%
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SDS
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0.01%
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0.01%
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20-80 kD蛋白
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無水甲醇(chun)
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10%
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0-5%
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SDS
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0.05%
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0.05%
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＞80 kD蛋白
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無水甲醇
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10%（NC膜）
0-5%（PVDF膜）
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0%
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SDS
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0.1%
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0.1%
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超純水
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定容(rong)至(zhi)1升，不要(yao)調節(jie)pH，pH~7.2
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注：甲醇和SDS在轉膜中有(you)拮抗作用。甲醇使蛋白(bai)更(geng)加(jia)結合在膜上，而SDS讓(rang)蛋白(bai)更(geng)加(jia)離開(kai)膜。因此對大蛋白(bai)轉膜來說，多加(jia)SDS，少(shao)加(jia)甲醇；而對小蛋白(bai)轉膜，多加(jia)甲醇，少(shao)加(jia)SDS。
4.4 轉膜條件：
以下(xia)轉(zhuan)膜(mo)條件僅供參考，客戶針對自己的(de)目的(de)蛋白，最(zui)好經過1-2次預實(shi)驗后(hou)，確定最(zui)佳的(de)轉(zhuan)膜(mo)條件。
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膜孔徑
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蛋(dan)白大(da)小
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穩流
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建議時間
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降(jiang)溫措施(shi)
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0.22 μm
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低于20 kD
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200 mA
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~30分鐘
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不需要
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0.45 μm
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20-50 kD
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300 mA
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~45分鐘
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需要
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0.45 μm
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50-200 kD
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350 mA
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~50分鐘
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需(xu)要
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0.45 μm
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高于200
kD
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350 mA
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~2.5-4.5小時
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需(xu)要
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實驗(yan)示例：
