尿素-SDS-PAGE凝膠快速制備及電泳試劑盒
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貨號
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名稱
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規(gui)格
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RTD6163
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尿素-SDS-PAGE凝(ning)膠快速制(zhi)備試劑盒
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50次
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● 產品組成：
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貨號
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名稱
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規格
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貯(zhu)存(cun)
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AC2914-02
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40%PAA(29:1)
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100 ml
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4℃
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TS050-01
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4×Tris/SDS分離膠緩沖液(ye) pH8.8
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100 ml
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4℃
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TS030-01
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4×Tris/SDS濃縮膠緩沖液 pH6.8
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50 ml
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4℃
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RU5080
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尿素（電泳級）
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220 克(ke)
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RT
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AP020P
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APS（干粉）
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0.5 g
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RT
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TA0761-01
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TEMED
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0.5ml
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4℃，避光(guang)
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PL080-01
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5×MonoColor蛋白(bai)上樣緩(huan)沖液(變性(xing),還(huan)原)
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1 ml
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-20℃
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TG120P
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5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液(變性電泳,粉末型(xing))
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1 L
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RT
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說明(ming)書
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一份
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● 貯存、效期及運輸：
按照標簽(qian)溫(wen)度(du)貯(zhu)存；有(you)效期一年；常溫(wen)運輸。
● 產品簡介：
本公司提供的(de)尿(niao)素(su)-SDS-PAGE凝膠(jiao)快速制備(bei)試(shi)(shi)劑盒包含凝膠(jiao)制備(bei)以及蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)電(dian)泳所需(xu)的(de)全部試(shi)(shi)劑。在(zai)SDS-PAGE中尿(niao)素(su)作為輔(fu)助的(de)變性劑，能與SDS一(yi)(yi)起徹底變性蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)，特別是一(yi)(yi)些跨膜多次的(de)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)，尿(niao)素(su)輔(fu)助SDS可以徹底打開蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)的(de)高級結構。該(gai)產(chan)品可以用(yong)(yong)于(yu)Blue Native電(dian)泳分(fen)離后的(de)二(er)向電(dian)泳，也可以用(yong)(yong)于(yu)一(yi)(yi)些堿性蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)如組蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)，魚精蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)的(de)變性電(dian)泳分(fen)離。
本(ben)試劑盒可配制至少50塊(kuai)常(chang)規大小（8×10 cm）1mm厚度的(de)PAGE膠。
● 使用說明：
一. 配制分離膠（各試劑使用量請參考表1）
1.1 配制(zhi)分離膠前，根(gen)據以下配方(fang)準備(bei)10% APS溶液-5 ml：
將0.5 gAPS干粉溶于5 ml滅菌(jun)水(shui)中，徹底溶解后分(fen)裝，1 ml/支(zhi)，-20℃備存(cun)(cun)，每次(ci)取一管使用。10% APS應盡量減少(shao)常溫存(cun)(cun)放(fang)時(shi)(shi)間，以(yi)防失效(xiao)。10%APS在4℃有效(xiao)期為一周，-20℃有效(xiao)期6個月。若發現(xian)凝膠聚合(he)時(shi)(shi)間延長，應考(kao)慮更換使用-20℃保存(cun)(cun)的(de)10%APS。
1.2按照表1將(jiang)不同體積(ji)的(de)成分(fen)在小燒杯或試管中混合；加入(ru)10%APS和TEMED，輕輕攪(jiao)拌使其(qi)混勻，避免(mian)產生(sheng)氣泡。
1.3 在(zai)凝(ning)膠(jiao)(jiao)模具(ju)中灌入適量分(fen)離(li)膠(jiao)(jiao)溶(rong)液（對于mini-gel，凝(ning)膠(jiao)(jiao)液加至約距(ju)前玻璃板頂端1.5 cm或(huo)距(ju)梳齒(chi)約0.5 cm即可），然后在(zai)分(fen)離(li)膠(jiao)(jiao)溶(rong)液上(shang)輕輕覆蓋一層1-5
cm的水層，使凝(ning)膠(jiao)(jiao)表面保持(chi)平(ping)整。
1.4 靜置30-60分鐘，待(dai)分離膠(jiao)和水層(ceng)之間出(chu)現一個清晰的界面后，說明凝膠(jiao)已(yi)聚合。
表1 SDS-PAGE分離膠配方表
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組份
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不(bu)同(tong)凝膠體積對應各組份的取樣量
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6％ 膠
; 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
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尿素
|
1.8
g
|
3.6
g
|
5.4
g
|
7.2
g
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4×Tris/SDS分(fen)離膠buffer
pH8.8
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1.25 ml
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2.5
ml
|
3.75
ml
|
5
ml
|
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40％ PAA（29:1）
|
0.75 ml
|
1.5
ml
|
2.25
ml
|
3
ml
|
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H2O
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定容(rong)至5ml
|
定容至10 ml
|
定容至15 ml
|
定容至20 ml
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TEMED
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0.005 ml
|
0.01
ml
|
0.015
ml
|
0.02
ml
|
|
10％ APS
|
0.05 ml
|
0.1
ml
|
0.15
ml
|
0.2
ml
|
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8％ 膠 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
|
|
尿素
|
1.8
g
|
3.6
g
|
5.4
g
|
7.2
g
|
|
4×Tris/SDS分離(li)膠buffer
pH8.8
|
1.25 ml
|
2.5
ml
|
3.75
ml
|
5
ml
|
|
40％ PAA（29:1）
|
1 ml
|
2
ml
|
3
ml
|
4
ml
|
|
H2O
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定容至(zhi)5ml
|
定容至10 ml
|
定容至15 ml
|
定容至20 ml
|
|
TEMED
|
0.005 ml
|
0.01
ml
|
0.015
ml
|
0.02
ml
|
|
10％ APS
|
0.05 ml
|
0.1
ml
|
0.15
ml
|
0.2
ml
|
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10％ 膠 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
|
|
尿素(su)
|
1.8
g
|
3.6
g
|
5.4
g
|
7.2
g
|
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4×Tris/SDS分(fen)離膠(jiao)buffer
pH8.8
|
1.25 ml
|
2.5
ml
|
3.75
ml
|
5
ml
|
|
40％ PAA（29:1）
|
1.25
ml
|
2.5
ml
|
3.75
ml
|
5
ml
|
|
H2O
|
定容(rong)至5ml
|
定容至10 ml
|
定容至15 ml
|
定容至20 ml
|
|
TEMED
|
0.005 ml
|
0.01
ml
|
0.015
ml
|
0.02
ml
|
|
10％ APS
|
0.05 ml
|
0.1
ml
|
0.15
ml
|
0.2
ml
|
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12％ 膠 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
|
|
尿(niao)素
|
1.8
g
|
3.6
g
|
5.4
g
|
7.2
g
|
|
4×Tris/SDS分離膠buffer
pH8.8
|
1.25 ml
|
2.5
ml
|
3.75
ml
|
5
ml
|
|
40％ PAA（29:1）
|
1.5
ml
|
3
ml
|
4.5
ml
|
6
ml
|
|
H2O
|
定(ding)容(rong)至5ml
|
定容至10 ml
|
定容至15 ml
|
定容至20 ml
|
|
TEMED
|
0.005 ml
|
0.01
ml
|
0.015
ml
|
0.02
ml
|
|
10％ APS
|
0.05 ml
|
0.1
ml
|
0.15
ml
|
0.2
ml
|
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15％ 膠 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
|
|
尿素
|
1.8
g
|
3.6
g
|
5.4
g
|
7.2
g
|
|
4×Tris/SDS分離膠buffer
pH8.8
|
1.25 ml
|
2.5
ml
|
3.75
ml
|
5
ml
|
|
40％ PAA（29:1）
|
1.875
ml
|
3.75
ml
|
5.625
ml
|
7.5 ml
|
|
H2O
|
定容至5ml
|
定容至10 ml
|
定容至15 ml
|
定容至20 ml
|
|
TEMED
|
0.005 ml
|
0.01
ml
|
0.015
ml
|
0.02
ml
|
|
10％ APS
|
0.05 ml
|
0.1
ml
|
0.15
ml
|
0.2
ml
|
二. 濃縮膠制備：
2.1 去除覆蓋(gai)在分離膠上的(de)水層。
2.2
按照表(biao)2將不同體積成分(fen)在一個(ge)小燒杯或試管中混合(he)；加入(ru)10%過硫酸銨和TEMED，輕(qing)輕(qing)攪拌使其混勻(yun)，避免產(chan)生氣泡。
2.3 將(jiang)濃縮膠溶(rong)液(ye)加至分離膠的上面，直至凝膠溶(rong)液(ye)到達前玻璃板(ban)的頂端。
2.4 將梳子插入(ru)凝(ning)膠(jiao)內，避免產生氣(qi)泡。
2.5 靜置30-60分鐘(zhong)，等待濃縮膠聚合。
表2 SDS-PAGE濃縮膠(4%)配方表
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組份
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不同凝膠體積對應各組份的取樣(yang)量
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2 ml
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4 ml
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5 ml
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10 ml
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尿素
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0.72 g
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1.44 g
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1.8 g
|
3.6 g
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4×Tris/SDS濃(nong)縮膠buffer pH6.8
|
0.5
ml
|
1
ml
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1.25
ml
|
2.5
ml
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40％ PAA（29:1）
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0.2
ml
|
0.4
ml
|
0.5
ml
|
1
ml
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H2O
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定(ding)容至2 ml
|
定容至4 ml
|
定容至5 ml
|
定容至10 ml
|
|
TEMED
|
0.002
ml
|
0.004
ml
|
0.005
ml
|
0.01
ml
|
|
10％ APS
|
0.02
ml
|
0.04
ml
|
0.05
ml
|
0.1
ml
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三. 電泳：
3.1 5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液的配制-1 L：
將一包5×Tris-甘(gan)氨酸-SDS電泳(yong)緩(huan)(huan)沖(chong)液(ye)干粉全部(bu)倒(dao)入(ru)1L燒(shao)杯中，加(jia)入(ru)約900 ml水徹底溶解(jie)，用(yong)水定容(rong)至1 L，即配成(cheng)5×Tris-甘(gan)氨酸-SDS電泳(yong)緩(huan)(huan)沖(chong)液(ye)（此溶液(ye)不(bu)用(yong)調(diao)節pH值）。用(yong)前再稀釋(shi)5倍(bei)即配成(cheng)1×Tris-甘(gan)氨酸-SDS電泳(yong)緩(huan)(huan)沖(chong)液(ye)。
3.2 電泳(yong)：
在電(dian)泳槽(cao)的內槽(cao)內加(jia)入1×Tris-甘氨(an)(an)酸-SDS電(dian)泳緩沖液(ye)(ye)(讓電(dian)泳緩沖液(ye)(ye)漫過加(jia)樣孔)，輕輕的撥出(chu)梳子，隨后在電(dian)泳槽(cao)外槽(cao)加(jia)入適(shi)量的1×Tris-甘氨(an)(an)酸-SDS電(dian)泳緩沖液(ye)(ye)。上樣，電(dian)泳，一(yi)般是濃縮膠80V，分離膠120V恒壓，等指示前沿溴酚(fen)蘭電(dian)泳到分離膠下緣后，結束電(dian)泳，染色或(huo)者(zhe)進(jin)行下一(yi)步實驗(yan)。