快速(su)蛋白(bai)銅染試劑盒
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產品編號
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規格
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運輸
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RTD6207
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10 T
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RT
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● 產品簡介：
本試劑(ji)采(cai)用(yong)以銅離子(zi)為基礎的負(fu)染色(se)(se)(se)方法，用(yong)于(yu)SDS-PAGE或(huo)Native-PAGE電(dian)泳凝膠(jiao)染色(se)(se)(se)，不需要使(shi)用(yong)含有(you)刺激性的甲醛和冰醋酸(suan)，實驗方便快速，可以在30 min左右(you)完成(cheng)，最低能夠檢測出(chu)2 ng的蛋白條帶，該(gai)方法不對蛋白質(zhi)產生(sheng)修飾(shi)作用(yong)，而且經過脫(tuo)色(se)(se)(se)液處理(li)后(hou)，可以用(yong)于(yu)電(dian)洗脫(tuo)或(huo)采(cai)用(yong)PAGE膠(jiao)蛋白微(wei)量回(hui)收(shou)試劑(ji)盒（貨號：RTD8108）進行膠(jiao)回(hui)收(shou)，以便進行質(zhi)譜和測序分析等，也可以用(yong)于(yu)電(dian)轉(zhuan)移(yi)或(huo)用(yong)其他染色(se)(se)(se)方法（銀染或(huo)考染）對膠(jiao)重新染色(se)(se)(se)。
按照每次(ci)使用50 ml1×即用型染(ran)色液計算，本產品(pin)可(ke)以染(ran)色 8-10塊mini-PAGE（8×10cm）膠。
● 產(chan)品(pin)組(zu)成(cheng)：
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產品編號
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產品名稱
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規格
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貯存
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運輸
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RTD6207-01
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增強液(ye)（4×）
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100
ml
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4-8℃
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RT
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RTD6207-02
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染色液（10×）
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60
ml
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4-8℃
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RT
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RTD6207-03
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脫色(se)液（10×）
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100
ml
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4-8℃
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RT
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說明書
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1份(fen)
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● 儲存(cun)條件
按(an)照(zhao)標(biao)簽溫度貯存(cun)，常溫運輸。開封后一年有效(xiao)。
● 凝(ning)膠(jiao)染色(se)的操作(zuo)步驟：
以下步驟以一(yi)塊1 mm厚度8×10cm的凝膠(jiao)操(cao)作(zuo)為例。
一. 漂洗：
取出(chu)電泳后的 PAGE 凝膠(jiao)，用(yong)超純水漂洗(xi)兩次，每次1分(fen)鐘。
二. 前處理：
2.1 準(zhun)備工作(zuo)：將增強液（4×）用超純水稀釋4倍，配(pei)成1×增強液。
2.2 凝膠中加入50 ml 1×增強(qiang)液，常溫搖床慢(man)搖10分鐘。
三. 漂洗：
棄增強(qiang)液，用(yong)超(chao)純水漂洗凝膠兩次(ci)，每次(ci)10-20秒，至(zhi)泡(pao)沫完全清除干凈。
注：漂洗時間不要太(tai)長，否則(ze)會導(dao)致染色效果下降。
四. 染(ran)色：
4.1 準備工作(zuo)：將染色(se)液（10×）用超純水稀釋10倍(bei)，配成1×即用型染色(se)液。
注：染(ran)色液略成半渾濁狀(zhuang)態。
4.2凝膠中加入 50 ml 1×即(ji)用型(xing)染色(se)液，搖床慢搖5-10分(fen)鐘，觀(guan)察(cha)結果：在黑色(se)背景下，可見光觀(guan)察(cha)，蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)條帶為棕褐色(se)，無蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)區(qu)域(yu)為藍綠色(se)；可見光燈(deng)箱觀(guan)察(cha)（凝膠(jiao)底部(bu)打光），蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)質條帶反顯白(bai)(bai)色(se)，無蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)的膠(jiao)區(qu)則為黃綠色(se)。
五. 漂洗(xi)：
棄染色液，超(chao)純水(shui)洗滌凝膠2次，每次搖床慢搖1分(fen)鐘。
注：凝(ning)膠可(ke)以在水(shui)中保存(cun)1-2周。
六. 脫色：
6.1 準備工作：將脫(tuo)色液（10×）用(yong)(yong)超純水稀釋(shi)10倍(bei)，配(pei)成1×即用(yong)(yong)型(xing)脫(tuo)色液。
6.2 如需(xu)(xu)要(yao)進行蛋(dan)白切膠(jiao)回收，將所需(xu)(xu)的蛋(dan)白質(zhi)條帶切下，用(yong)超純水漂洗(xi)切下的凝膠(jiao)一次；如凝膠(jiao)需(xu)(xu)要(yao)考染，銀染或轉膜(mo)實驗，直接(jie)用(yong)超純水漂洗(xi)整(zheng)個凝膠(jiao)一次。
6.3 棄水，凝(ning)膠中加入(ru)適量1×即用型脫色液覆蓋凝(ning)膠，搖床慢搖5分(fen)鐘(zhong)，倒掉脫色液；
6.4 重復脫(tuo)色步驟2次(ci)。脫(tuo)色完(wan)全的標(biao)志是白色凝膠完(wan)全脫(tuo)色為(wei)無(wu)色透明。
6.5 超純水漂洗凝膠兩次(ci)，進行后續(xu)實(shi)驗操作。
實驗示(shi)例：
4-20% RealPAGE Precast Gel
lane
1-5: BSA分別為1，2，3，4，5μg
M：RTD6149 10-250kD
lane
6: Bacterial Lysis
凝膠(jiao)顯影后(脫色前)蛋(dan)白條帶在黑色背景(jing)下為(wei)藍綠色（左(zuo)）
可見(jian)光燈箱觀察(凝(ning)膠(jiao)底部打光),蛋白質條帶反(fan)顯(xian)白色（右）