糖蛋白染色試劑盒
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產品(pin)編號
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規格
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運輸(shu)
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RTD6501
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10次
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RT
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● 產品簡介：
本產品(pin)用(yong)于(yu)PAGE 凝(ning)(ning)(ning)膠(jiao)或蛋白(bai)免疫印(yin)記硝酸纖維素(su)膜上(shang)糖(tang)蛋白(bai)的(de)檢測。整個染色(se)2.5小時完成。染色(se)后的(de)糖(tang)蛋白(bai)為品(pin)紅色(se)條帶，背景為淺粉色(se)或者(zhe)無色(se)。該試(shi)劑盒檢測的(de)靈敏度(du)一(yi)般可(ke)(ke)以(yi)達到微克級別，但實(shi)際靈敏度(du)跟(gen)靶蛋白(bai)糖(tang)基化(hua)程(cheng)度(du)相關，可(ke)(ke)以(yi)用(yong)于(yu) SDS-PAGE 和2D電泳(yong)的(de)凝(ning)(ning)(ning)膠(jiao)檢測，也可(ke)(ke)以(yi)用(yong)于(yu)瓊脂糖(tang)凝(ning)(ning)(ning)膠(jiao)電泳(yong)的(de)檢測（但背景較高），還可(ke)(ke)以(yi)用(yong)于(yu)硝酸纖維素(su)印(yin)跡膜的(de)檢測。
按照每次使用25 ml糖蛋白染色試劑計算，本產品可以染色 8-10塊(kuai)mini-PAGE（8×10cm）膠或印跡膜(mo)。
● 產品組成：
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產品編號(hao)
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產品名稱
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規格
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貯存(cun)
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運輸(shu)
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RTD6501-1
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氧化試劑(ji)
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2.5 g
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常溫避光
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RT
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RTD6501-2
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糖蛋白(bai)染色(se)試劑
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250 ml
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常溫避光
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RT
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RTD6501-3
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還原試劑(ji)
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1.25 g
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常(chang)溫避光(guang)
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RT
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RTD6501-4
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陽性對照(zhao)（辣根過(guo)氧化物(wu)酶(mei)）
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1 mg
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-20℃
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RT
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RTD6501-5
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陰(yin)性對照（大豆胰蛋白酶抑(yi)制劑）
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1 mg
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-20℃
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RT
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PL080
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5×MonoClolor 蛋白上樣緩(huan)沖液
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1 ml
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-20℃
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RT
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250ml棕色塑料瓶
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2個
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說(shuo)明書
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1份
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● 儲存條件
按照標簽溫度貯(zhu)存，常溫運輸(shu)。開(kai)封(feng)后(hou)一年有效。
●實驗前準備：
1.
配制 3%醋酸溶液：將 15 ml 自備的冰醋酸與 485 ml 超純(chun)水混勻，常(chang)溫保存(cun)備(bei)用。
2.
配制(zhi) 50%甲醇溶液(ye)：將 250 ml 甲醇與
250 ml 超純水混勻，常溫(wen)保存備用。
3. 配制氧(yang)化(hua)試劑溶液： 將(jiang)本試劑盒提(ti)供(gong)的氧(yang)化(hua)試劑干粉轉移到(dao)本試劑盒提(ti)供(gong)的250ml空塑料瓶中， 然(ran)后(hou)加入250
ml的超純水，充分混(hun)勻溶解后(hou)得到(dao)氧(yang)化(hua)試劑溶液，常溫保存備(bei)用。
4. 配制還(huan)(huan)原試(shi)劑(ji)溶(rong)液(ye)： 將(jiang)本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)提供的還(huan)(huan)原試(shi)劑(ji)干粉轉移到本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)提供的
250ml 空塑料瓶中，然后加(jia)入 250 ml的超純水，充(chong)分混勻溶(rong)解(jie)后得到還(huan)(huan)原試(shi)劑(ji)溶(rong)液(ye)，常溫(wen)保(bao)存備用。
5. 配制1×SDS-PAGE上樣緩(huan)沖(chong)液(ye)：取(qu)0.4
ml 5×MonoClolor 蛋白上樣緩(huan)沖(chong)液(ye)，加(jia)入1.6
ml超純(chun)水，-20℃貯存備用。
6. 配制陽(yang)性對(dui)照（辣(la)根(gen)過(guo)氧(yang)化(hua)物酶）溶(rong)液(ye)：向裝有
1 mg 辣(la)根(gen)過(guo)氧(yang)化(hua)物酶固體的(de)(de)(de)棕色管中加(jia)(jia)入 1 ml 1×SDS-PAGE 上樣緩沖液(ye)，所得辣(la)根(gen)過(guo)氧(yang)化(hua)物酶溶(rong)液(ye)的(de)(de)(de)濃(nong)度即為
1mg/ml，然(ran)后適量分(fen)裝成8-10管， 留下一管當天使(shi)用， 其余的(de)(de)(de)放-20℃長期(qi)保存。 對(dui)于(yu)
8×10 cm的(de)(de)(de)凝膠來說，每條泳道(dao)加(jia)(jia)
10 μl 的(de)(de)(de)陽(yang)性對(dui)照溶(rong)液(ye)即可，上樣前95℃處理5分(fen)鐘。
7. 配制陰性對照（大豆胰(yi)蛋白酶(mei)抑制劑）溶液(ye)：向裝有
1 mg 大豆胰(yi)蛋白酶(mei)抑制劑干粉的(de)管中加入(ru) 1×SDS-PAGE
上樣緩沖液(ye)（自備），所得(de)大豆胰(yi)蛋白酶(mei)抑制劑溶液(ye)的(de)濃度即為 1 mg/ml，然后適量(liang)分裝成8-10管， 留下一管當(dang)天使用(yong)，其余(yu)的(de)放-20℃長期(qi)保(bao)存(cun)。對于
8×10 cm的(de)凝膠(jiao)來(lai)說(shuo)，每條泳道(dao)加
10 μl 的(de)陽性對照溶液(ye)即可，上樣前95℃處理5分鐘。
8. 樣品稀釋：用 5×MonoClolor 蛋白上樣緩沖液將樣品濃度稀釋為
1 mg/ml，SDS-PAGE 上樣緩沖液終濃度為
1×。對于 8×10 cm的凝膠來說，每條泳道加 5-10 μl 的樣品即可，上樣前95℃處理5分鐘(zhong)。。
● 凝膠染色的操作步驟（膜染色從步驟3開始）：
注意事項：
1.以下步驟僅針對0.75mm厚度大小8×10cm的凝膠，1-1.5mm厚度凝膠或更大體積凝膠適當增加液體體積并延長操作時間。
2. 請在通風櫥中進行以下操作。
一. 固定：
取出(chu)電泳(yong)后的 SDS-PAGE 凝膠，在50 ml 50%甲(jia)(jia)醇溶液(ye)中，搖床慢搖30分(fen)鐘，棄(qi)甲(jia)(jia)醇溶液(ye)。
二. 漂洗：
50 ml超純(chun)水洗滌凝膠兩次(ci)，每次(ci)搖(yao)床(chuang)慢搖(yao)10分鐘，棄超純(chun)水。
三. 氧化：
凝膠中加入 25 ml 氧化試(shi)劑，搖床慢搖15分鐘，棄溶(rong)液。
四. 漂洗：
50 ml超純(chun)水洗滌凝膠(jiao)3次(ci)，每次(ci)搖床慢搖5分鐘，棄溶液。
五. 染色：
凝膠中加入25 ml糖蛋白(bai)染色(se)(se)試劑，搖床慢搖15 分鐘，糖蛋白(bai)會在5-10分鐘內顯現品(pin)紅色(se)(se)。若(ruo)檢測的糖蛋白(bai)含量較低(di)，適當延長顯色(se)(se)時(shi)間。棄染色(se)(se)溶液。
注(zhu)：若糖蛋白染色試(shi)劑中有晶體析出，只需取上清液即可，不(bu)要加熱溶解(jie)晶體。
染色步驟會產生有刺(ci)激性氣味(wei)氣體，請在通風櫥中操作。
六. 還原：
凝膠中加入 25 ml 還原試劑，搖(yao)床慢搖(yao)15分鐘，棄(qi)溶液。此時凝膠(jiao)背景(jing)略帶紅(hong)色。
七. 漂洗：
加(jia)入50 ml 3%醋酸(suan)溶(rong)液搖床慢搖洗(xi)滌膠塊3次，每(mei)次10分(fen)鐘，直至膠背景紅(hong)(hong)色(se)變淺，接近淡紅(hong)(hong)色(se)或(huo)無色(se)，此時紅(hong)(hong)色(se)糖蛋白主帶清晰可見(jian)。
八. 保存：
膠(jiao)塊(kuai)保存在50 ml 3%醋酸溶(rong)液中(zhong)。
● 實驗記錄表格
實驗日期：
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編號
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步驟
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體積
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時間(jian)
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凝膠尺寸 8×10 cm
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0.75mm膠或膜
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1
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固定
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50 ml
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30 min
膜從步驟3開始
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2
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漂洗
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2×50 ml
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2×10 min
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3
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氧化(hua)
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25 ml
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15 min
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4
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漂洗(xi)
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3×50 ml
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3×5 min
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5
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染色
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25 ml
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15 min或(huo)更長(chang)
條帶(dai)變為品紅色(se)
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6
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還原
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25 ml
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5 min
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7
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漂洗(xi)
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3×50 ml
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3×10 min
漂洗后(hou)凝(ning)膠背(bei)景變淺
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8
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保存
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50 ml
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實驗示例：
蛋白轉到NC膜(mo)后(hou)糖(tang)蛋白染色
使用糖蛋白染色試劑盒發表部分文章列表：
1. [IF=8.947] Adhesive
property and mechanism of silkworm egg glue protein.
Author: Yutian Lei, Kaiyu Guo, Yan Zhang, Xiaolu
Zhang, Lixia Qin, Xin Wang, Hongtao Zhu, Yuanyuan Guo, Wenxin Yang, Benchi Li
Qingyou Xia, Ping Zhao, Zhaoming Dong
Journal: Acta Biomaterialia. Volume 134, 15 October 2021, Pages 499-512
Institution： Southwest University
Paper link：
2. [IF=8.2] Conjugation
of dual-natural milk-derived proteins with fucoidan to preparecontrollable glycosylation
products via dielectric barrier discharge cold plasma.
Author: Shuangshuang Wang, Yi Ding, Zhenquan Huo, Jiaming Li, Jiaqing Song,
Weiwen Jian,Qinyi Gao, Minghui Zhang, Lili Zhao, Jing Zhang, Jiaying Zhang,
Wupeng Ge.
Journal: International Journal of Biological
Macromolecules. 255 (2024)
128035
Institution： Northwest
A&F University
Paper link：
3. [IF=6.1] Inhibiting
Protein Aggregation Using Cellulose Nanocrystal in MALDI-TOF MS Analysis:
Improving the Sensitivity and Repeatability of Intact Protein in Pueraria.
Author: Shan L,Huang Y ,Zhang J ,Su Y,Guo Y.
Journal: Journal of Agricultural and Food Chemistry, 07 Dec 2023, 71(50):20146-20154
Institution：Shanghai
Institute of Organic Chemistry, Chinese Academy of Sciences
Paper link：
4. [IF=3.3] Similar
construction of spicules and shell plates: Implications for the origin of
chiton biomineralization.
Author: Haipeng Liu, Chuang Liu, Wenjing Zhang, Yang Yuan, Zhenglu Wang,
Jingliang Huang
Journal: Journal of Proteomics 296 (2024) 105126
Institution：Hohai University，Sichuan University
Paper link：