RealPure植物基因組DNA提取試劑盒
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貨號
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名稱
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規(guī)格
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RTG2404-01
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RealPure植物基因組DNA提取試劑盒
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50次
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● 試劑盒內(nèi)容：
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試劑盒組成
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RTG2404-01（50次）
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緩沖液AP1
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25 ml
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緩沖液AP2
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10 ml
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緩沖液AP3(濃縮液)
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15 ml
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漂洗液PW（濃縮液）
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25 ml
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洗脫緩沖液EB
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15 ml
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RNase A（10
mg/ml）
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0.5 ml
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吸附柱CG（白色）
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50個
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過濾柱CF
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50個
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收集管
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100個
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說明書
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1份
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● 儲存條件和效期：
本試劑盒在常溫（25℃左右）干燥條件下，可保存1年；更長時間的保存可置于2–8℃。2–8℃保存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，應(yīng)在使用前置于37℃下溶解沉淀至溶液澄清后再使用。
單獨包裝的RNaseA收到后-20℃保存。
● 產(chǎn)品簡介：
本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和獨特的緩沖液系統(tǒng)，能提取多種植物細胞/組織中的基因組DNA。離心吸附柱可以高效、專一吸附DNA，可最大限度去除雜質(zhì)蛋白及細胞中其他有機化合物。提取的基因組DNA片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。
使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建、Southern雜交等實驗。
● 提取得率：
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材料
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DNA得量（μg/100mg）
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Arabidopsis
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3–4 μg
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Barley
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8–12 μg
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Maize
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15-20
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Pine
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20-25
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Potato
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4-6
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Rape
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2-4
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Spinach
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5-10
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Tobacco
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20-25
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Wheat
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25-30
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● 準(zhǔn)備工作：
1. 準(zhǔn)備液氮；65℃水浴；無水乙醇；1.5ml滅菌離心管。
2. 按照標(biāo)簽所示在緩沖液AP3和漂洗液PW中加入無水乙醇，混勻后蓋緊瓶蓋后常溫貯存?zhèn)溆谩?
3. 每次使用前請檢查緩沖液AP1，緩沖液AP2和緩沖液AP3是否有沉淀生成，如果出現(xiàn)沉淀，37℃溫浴至沉淀溶解后再使用。
● 操作步驟：
如非指出，所有離心步驟均為使用臺式離心機在常溫下離心。
1. 取適量植物新鮮組織0.5-1g加入液氮充分研磨，取約100mg粉末置于1.5ml離心管中，加入400 μl 緩沖液AP1和6
μl RNaseA (10mg/ml)，漩渦震蕩1分鐘。
2. 將離心管放在65℃水浴10分鐘，水浴過程中顛倒離心管以混合樣品數(shù)次。
3. 加入130
μl 緩沖液AP2，顛倒混勻，冰浴5分鐘。
4. 12,000rpm離心5分鐘。
注：此步驟離心去除去垢劑，蛋白以及多糖等雜質(zhì)。
5. 取上清（通常為400
μl）轉(zhuǎn)移到過濾柱CF中，12,000rpm
離心1分鐘。
6. 將濾出液轉(zhuǎn)移到1.5
ml離心管中，加入1.5倍體積（例如400
μl的上清液加600 μl緩沖液AP3）緩沖液AP3（使用前請注意是否已經(jīng)加入無水乙醇），立即顛倒混勻，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。
7．吸取步驟6中的混合液加入到吸附柱CG中（吸附柱放入收集管中），12,000
rpm離心1分鐘，倒掉廢液，吸附柱CG放回收集管中。
注：離心吸附柱的最大容積是700μl，如果一次不能完全上柱，可以分次上柱離心，保證全部溶液全部加到離心柱中。
8．向吸附柱CG中加入500
μl漂洗液PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm離心1分鐘，倒掉廢液，吸附柱CG放入收集管中。
9．重復(fù)步驟8。
10. 可選步驟：如果離心柱的吸附膜上有顏色，向吸附柱CG中加入500
μl無水乙醇，12,000 rpm離心1分鐘，倒掉廢液，吸附柱CG放入收集管中。
11．將吸附柱CG放回廢液收集管中，12,000 rpm離心2分鐘。
注：此步驟非常重要，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實驗。
12．將吸附柱CG轉(zhuǎn)入一個干凈的1.5ml離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加50-100 μl經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫緩沖液EB，常溫放置2分鐘，12,000
rpm g離心2分鐘。
注；1. 洗脫緩沖液體積最好不少于50 μl，體積過小影響回收效率。
2. 洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會降低洗脫效率。
13. DNA產(chǎn)物-20℃保存。
● DNA濃度及純度檢測：
基因組DNA片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。提取的DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度?？膳渲?.8-1.0％瓊脂糖凝膠，使用λ/HindIII判斷基因組的大小，完整的基因組大小應(yīng)在23kb以上。使用分光光度計檢測時，
OD260/OD280比值應(yīng)為1.7–1.9之間，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水洗脫，比值可能偏低，但并不表明DNA純度不高。