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20bp DNA ladder

● 產品編號及規格：

RTM441          50次 (250 μl)    

● 產品組成：

● 產品簡介：

本產品是由13條帶狀雙鏈DNA條帶組成的精準定量Marker，適用于聚丙烯酰胺凝膠電泳中DNA條帶大小和含量的分析。13條帶的大小分別為20，40，60，80，100，120，140，160，180，200，300，400，500 bp。其中100bp和200bp條(tiao)帶(dai)為加亮帶(dai)，含量為100ng/5μl，其余條(tiao)帶(dai)濃度為50ng/5μl。

本(ben)產品為雙鏈DNA Marker，適用(yong)(yong)于非變性(xing)的PAGE電(dian)泳(yong)和瓊脂(zhi)糖(tang)凝(ning)膠(jiao)電(dian)泳(yong)，不適用(yong)(yong)于尿素PAGE電(dian)泳(yong)。由于片段較小，如使(shi)用(yong)(yong)瓊脂(zhi)糖(tang)分(fen)(fen)(fen)離，建議(yi)使(shi)用(yong)(yong)高分(fen)(fen)(fen)辨率瓊脂(zhi)糖(tang)凝(ning)膠(jiao)電(dian)泳(yong)分(fen)(fen)(fen)離。

按(an)照每次上樣5 μl計(ji)算(suan)，該產品可以使用50次。

● 儲存條件：

 -20℃ 貯存,有效期3年。

● 使用方法：

一、 TBE-PAGE凝膠分離：

1、制備凝膠步驟：

1.1參(can)照凝膠模具說明書(shu)，裝(zhuang)配好凝膠模具。

1.2按照表一將不同體積的成分在小燒杯(bei)或試管中(zhong)混合；最后加入10%APS和TEMED，輕輕攪(jiao)拌使(shi)其混勻，避免產生氣泡。

   注：20bp DNA ladder 適用于配制20%TBE-PAGE膠。

1.3在(zai)凝(ning)膠(jiao)(jiao)模(mo)具中灌入(ru)適量分離膠(jiao)(jiao)溶液（對于mini-gel，凝(ning)膠(jiao)(jiao)液加(jia)至約距(ju)前玻璃(li)板頂端1.5 cm或距(ju)梳齒約0.5 cm即(ji)可），然后(hou)在(zai)分離膠(jiao)(jiao)溶液上輕(qing)輕(qing)覆蓋一層1-2 cm的無水乙醇，使凝(ning)膠(jiao)(jiao)表(biao)面保持平整(zheng)。

1.4靜置10-20分(fen)鐘，待分(fen)離膠和(he)乙醇層之間出現一個清晰的界面(mian)后，說明(ming)凝膠已(yi)聚合

表一 TBE-PAGE分離膠配方表 (總體積5 ml，適用于1mm厚度小板膠)

1.5去除覆蓋在(zai)分離(li)膠上的乙醇；按照表二將不同(tong)體積成分在(zai)一個小燒杯(bei)或試管(guan)中混(hun)合(he)；最(zui)后加入10%過硫酸銨和TEMED，輕輕攪(jiao)拌使(shi)其混(hun)勻，避免產生(sheng)氣泡。

表二 TBE-PAGE 4%濃縮配方表 (總體積1.5 ml，適用于1mm厚度小板膠)

1.6將(jiang)濃縮膠溶(rong)液(ye)加至(zhi)分離膠的上面，直至(zhi)凝膠溶(rong)液(ye)到達前玻(bo)璃板的頂(ding)端；將(jiang)梳子插入凝膠內，避免產(chan)生氣泡。

1.7靜(jing)置30-60分鐘，等(deng)待濃縮(suo)膠聚合。

注：凝膠的(de)聚合時(shi)間與(yu)環境溫(wen)度有(you)關。夏天(tian)溫(wen)度較高(gao)時(shi)，聚合較快；冬天(tian)氣溫(wen)低時(shi)，聚合時(shi)間會延長。可以根據環境溫(wen)度的(de)不同調(diao)節APS的(de)加入量。

2、電泳：

2.1 將(jiang)凝膠板固定在電泳(yong)(yong)裝置上，往上槽(cao)和下槽(cao)中加(jia)入1×TBE電泳(yong)(yong)液，1 ml吸頭(tou)沖洗加(jia)樣孔1-2次(ci)。

2.2 取待測樣品，加入相應體積6×Native PAGE DNA上樣緩沖液，如5 μl樣品加1 μl 上樣緩沖液，短暫離心后取5-10 μl上樣。 20bp DNA ladder  1 mm厚10齒梳子上樣5 μl，其(qi)余梳齒和厚度凝膠(jiao)適(shi)量(liang)調(diao)整上樣量(liang)。

2.3 連接(jie)電源(yuan)線，打開(kai)電源(yuan)開(kai)關(guan)。200V穩(wen)壓電泳。至(zhi)二甲苯菁指示(shi)前沿(yan)到達凝(ning)膠(jiao)三分之二位置時結束電泳（此時溴酚藍指示(shi)前沿(yan)已經跑出凝(ning)膠(jiao)，不(bu)可見）。

3、染色：

3.1 漂洗：玻璃板上拆下凝膠后，適量蒸餾水漂洗3-5分鐘。

3.2 染色液配制：

  TBE-PAGE膠可以使用EB或RealSafe類染料后染染色，以下程序用RealSafe Red核酸染料（貨號：GR002）進行染色。即用型染色液配制：

3.3染色和觀察：

  凝膠浸泡于即用型染色液中，常溫避光搖床40-60 rpm染色30 分鐘。紫外光下觀察。

二、 瓊脂糖凝膠分離：

1. 瓊脂糖凝膠制備：

  由于片段較小(xiao)，建議選用高分辨(bian)率瓊脂(zhi)糖（貨(huo)號(hao)AR1036）制膠。

以下步驟(zou)以制備50 ml 3%凝膠為例(li)：

稱取1.5 g瓊(qiong)脂糖于(yu)玻璃三角瓶(ping)中(zhong)，加入50 ml 1×TAE，5 μl RealSafe Red核酸(suan)(suan)染料(liao)或(huo)其他核酸(suan)(suan)染料(liao)（如EB，GoldView），混(hun)勻，蓋(gai)(gai)好(hao)瓶(ping)蓋(gai)(gai)，微波爐(lu)中(zhong)火加熱至沸騰(teng)，輕搖(yao)混(hun)勻，重復1-2次至瓊(qiong)脂糖完(wan)(wan)全溶解(jie)，無可見顆(ke)粒。倒入制膠容器中(zhong)，插好(hao)梳子，常溫凝固30-50分鐘至凝膠完(wan)(wan)全凝固。

2. 電泳：

取待測樣品，加入相應體積6×DualColor DNA loading buffer，如10 μl樣品加2 μl 上樣緩沖液，短暫離心后取5-10 μl上樣。 20bp DNA ladder  1 mm厚10齒梳子(zi)上(shang)樣(yang)5 μl，其余梳齒和厚度凝(ning)膠適量調(diao)整上(shang)樣(yang)量。

建議(yi)電(dian)(dian)泳條(tiao)件：凝(ning)膠(jiao)濃度為(wei)3％，電(dian)(dian)泳電(dian)(dian)壓8-10 v/cm（單位電(dian)(dian)壓指(zhi)電(dian)(dian)泳槽陰陽(yang)極(ji)之間的距離電(dian)(dian)壓，如(ru)陰極(ji)陽(yang)極(ji)之間的距離為(wei)20 cm，可以(yi)用160-200 V電(dian)(dian)壓進行穩(wen)壓電(dian)(dian)泳），待溴(xiu)酚(fen)藍指(zhi)示前沿距離凝(ning)膠(jiao)末端2 cm時(shi)終止(zhi)電(dian)(dian)泳，電(dian)(dian)泳時(shi)間35-40分鐘。

 注(zhu)：3% 瓊脂糖(tang)TAE電泳(yong)中，溴酚藍大小約(yue)為20bp，二甲苯菁大小約(yue)200bp。

3. 紫外燈下觀察條帶。

注：使用EB或Goldview染料時，由于染料本身帶正電荷較多，隨著電泳時間的延長，染料會向陰極聚集，導致小片段核酸結合的染料含量降低，會出現小片段的DNA片段紫外燈下亮度變弱或不可見。此時可以將膠浸泡于含有染料的1×TAE緩沖液中染色15-20分鐘即可看到小片段。

4. 實驗示例：

使用RTM441 20bp DNA ladder產品發表部分文章列表：

1. [2022 IF=6] A novel ?uorescent sensor based on aptamer recognition and DNA walker ampli?cation strategy and its determination of 17b-estradiol.

Author: Yajun Zhang, Licong Jia, Wei Wang, Meng Jiang, Hongying Zhang, LingMei Niu

Marker: RTM441，20bp DNA ladder

Journal: Arabian Journal of Chemistry. 16 (2023) 105340.

Institution：School of Public Health, Hebei Medical University

Paper link：