單鏈DNA Marker（20-75 nt）預(yu)混型
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貨號(hao)
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名稱(cheng)
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規格
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RTM501
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單(dan)鏈DNA Marker（20-75 nt）預混型
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25次
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● 產品編(bian)號及規格：
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貨號
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名稱
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規格
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貯(zhu)存
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RTM501-01
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單鏈DNA Marker（20-75 nt）預混型
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25次（125 μl）
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-20℃
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DL080-01
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2×TBE尿素上樣緩(huan)沖(chong)液
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1 ml
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4℃或-20℃
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● 產品簡介：
單(dan)鏈(lian)DNA Marker由(you)不(bu)同長(chang)度的(de)單(dan)鏈(lian)DNA分(fen)(fen)子混合(he)而成(cheng)，7條帶的(de)大小(xiao)為(wei)20，25，30，35，40，
50，75
nt。35
nt 濃度約為(wei)100
ng/μl，其(qi)余條帶濃度約為(wei)50
ng/μl。該產品(pin)已(yi)經含(han)有上樣緩沖液，使用前70度處理5分(fen)(fen)鐘后可以直接上樣。該Marker適用于跑(pao)尿素(su)變性膠(jiao)，電(dian)泳后使用單(dan)鏈(lian)DNA
PAGE電(dian)泳染色(se)試劑盒（Cat：RTS5103），核酸PAGE電(dian)泳染色(se)試劑盒（Cat：RTS5102），核酸快速高靈敏度染色(se)試劑盒（Cat：RTS5101）或核酸染料如RealSafe
Red（貨號(hao)：GR002）或RealSafe
All（貨號(hao)：GR004）均可以得(de)到清晰的(de)條帶分(fen)(fen)離(li)效果。
產品內附帶2×TBE尿素(su)上(shang)樣緩沖(chong)液（Cat：DL080-01），方便待(dai)檢樣品的上(shang)樣。以每次(ci)上(shang)樣5 μl計算，該(gai)產品可(ke)以使(shi)用大(da)約(yue)25次(ci)。
● 保存條件和運輸：
-20℃貯存；有效期(qi)2年；濕冰(bing)運輸。
● 使用方法：
注：以下使用(yong)方法均以8×10cm凝膠 厚1.0mm示例，其(qi)他(ta)規格凝膠請(qing)適當調整。
一. 凝膠制(zhi)備：
1.1 可以選擇DNA尿素PAGE電泳試劑盒（Cat：RTE4102））或按(an)照以下程序制膠：
表(biao)一 TBE-尿素PAGE分離膠(jiao)配方表 (總(zong)體積5 ml，適用于厚(hou)度1.0 mm小板膠)
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單鏈DNA長度
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最佳凝(ning)膠濃(nong)度(du)
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尿素(su)（克(ke)）
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40%PAA
（29:1）
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10×TBE
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補水到(dao)總體積
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10%APS
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TEMED
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200-1000 nt
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5%
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2.1克
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0.625 ml
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0.5 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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50-400 nt
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8%
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2.1克
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1 ml
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0.5
ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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30-300 nt
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10%
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2.1克
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1.25 ml
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0.5
ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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10-150 nt
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15%
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2.1克
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1.875 ml
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0.5
ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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5-120 nt
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20%
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2.1克
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2.5 ml
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0.5
ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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1.2在凝膠(jiao)模具中灌入(ru)適(shi)量(liang)分(fen)離(li)膠(jiao)溶(rong)(rong)液（對于mini-gel，凝膠(jiao)液加至約距前玻璃板頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可），然后(hou)在分(fen)離(li)膠(jiao)溶(rong)(rong)液上輕(qing)輕(qing)覆蓋一層1-5 cm的(de)水層，使凝膠(jiao)表面(mian)保持平整。
1.3靜置(zhi)10-20分(fen)鐘，待分(fen)離膠和水層之(zhi)間出現一個清晰的(de)界面后，說明(ming)凝膠已聚合。
注：凝膠的聚(ju)合時間(jian)與環(huan)境溫度有關。夏(xia)天溫度較(jiao)高時，聚(ju)合較(jiao)快；冬天氣溫低時，聚(ju)合時間(jian)會延長。可以根據環(huan)境溫度的不同調節APS的加入量。
1.4去(qu)除覆蓋在分離膠(jiao)上的水層；按照表二(er)將不同(tong)體積成(cheng)分在一(yi)個(ge)小燒杯(bei)中混(hun)合；最后加(jia)入10%過(guo)硫酸(suan)銨和TEMED，輕輕攪拌(ban)使其混(hun)勻，避免產生氣泡(pao)。
表二(er) TBE-尿素PAGE 4%濃縮配方表 (總體積2 ml，適用于1.0mm厚度膠)
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各組份體積（ml）
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凝(ning)膠濃度
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尿素
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40%PAA（29:1）
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10×TBE
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滅(mie)菌水(shui)
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10%APS
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TEMED
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4%
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0.84克(ke)
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0.2 ml
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0.2 ml
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補(bu)水至體積(ji)2 ml
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20 μl
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2 μl
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1.5將濃(nong)縮膠(jiao)溶(rong)液(ye)加至分離膠(jiao)的上面，直至凝膠(jiao)溶(rong)液(ye)到達(da)前玻璃(li)板(ban)的頂端(duan)；將梳子插入凝膠(jiao)內，避免產生氣泡。
1.6靜置30-60分鐘(zhong)，等待濃縮膠聚合。
注：凝膠(jiao)的聚合(he)(he)時(shi)間與環(huan)境溫度(du)有(you)關。夏天(tian)溫度(du)較(jiao)高時(shi)，聚合(he)(he)較(jiao)快(kuai)；冬天(tian)氣(qi)溫低時(shi)，聚合(he)(he)時(shi)間會延長。可以根據環(huan)境溫度(du)的不同調(diao)節APS的加入量。
二. 樣品制(zhi)備：
2.1
取適量體(ti)積(ji)單鏈DNA
Marker樣品(pin)（不用添加上樣緩(huan)沖液）；待測樣品(pin)與等體(ti)積(ji)的2×TBE尿素上樣緩(huan)沖液（Cat：DL080-01）混合，70℃處理(li)5分鐘，冰浴制冷后(hou)待上樣。
三.電(dian)泳：
3.1. 預(yu)電泳(yong)(yong)（可選）：電泳(yong)(yong)槽(cao)內(nei)外加入適量1×TBE緩沖液穩壓200V預(yu)電泳(yong)(yong)30分鐘。電泳(yong)(yong)結束后，用(yong)1×TBE緩沖(chong)液(ye)徹底(di)沖(chong)洗加(jia)樣孔2-3次，去除殘余的尿(niao)素。
3.2.上(shang)(shang)樣(yang)：根據梳齒(chi)(chi)確定(ding)Marker上(shang)(shang)樣(yang)量(liang)， 一般是10齒(chi)(chi)1mm厚梳子上(shang)(shang)樣(yang)5
μl，15齒(chi)(chi)1mm厚梳子上(shang)(shang)樣(yang)3
μl。
3.3. 連接電(dian)源線，打開(kai)電(dian)源開(kai)關，按照以下條件電(dian)泳。
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恒電壓
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起始電流
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結束電流
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電泳(yong)時(shi)間
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適用條(tiao)件
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推薦電壓
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200 V
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15-20 mA/板膠
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10-15 mA/板膠
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60+ min
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最佳電壓，最優的(de)分辨率
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3.4. 等待上(shang)樣(yang)緩沖液的溴酚藍指示前沿(yan)到(dao)凝膠底(di)部(bu)時終止電泳，取出凝膠進行后續實驗。
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變性(xing)膠濃度(du)
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溴酚藍
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二甲苯(ben)菁
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5%
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35 nt
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130 nt
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8%
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19 nt
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75 nt
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10%
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15 nt
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55 nt
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15%
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10 nt
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52 nt
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20%
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8 nt
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35 nt
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四．染色：
用(yong)(yong)單(dan)鏈DNA PAGE電泳染(ran)(ran)(ran)色試(shi)劑(ji)(ji)盒(he)（Cat：RTS5103），核酸(suan)PAGE電泳染(ran)(ran)(ran)色試(shi)劑(ji)(ji)盒(he)（Cat：RTS5102）或核酸(suan)快(kuai)速高靈敏度染(ran)(ran)(ran)色試(shi)劑(ji)(ji)盒(he)（Cat：RTS5101）染(ran)(ran)(ran)色均可(ke)以得到清晰的條帶(dai)分離效果(guo)。注：如果(guo)使用(yong)(yong)核酸(suan)染(ran)(ran)(ran)料(liao)(liao)染(ran)(ran)(ran)色，RealSafe Red（貨號：GR002）或RealSafe All（貨號：GR004）核酸(suan)染(ran)(ran)(ran)料(liao)(liao)結合(he)單(dan)鏈核酸(suan)效果(guo)最佳，強(qiang)烈建(jian)議使用(yong)(yong)以便獲得最佳效果(guo)的膠圖。其余染(ran)(ran)(ran)料(liao)(liao)如GelRed，Goldview，EB等染(ran)(ran)(ran)色效果(guo)不好。
● 注(zhu)意(yi)事項：
1. 單鏈DNA Marker產品適(shi)用于變性PAGE垂直(zhi)電泳，不適(shi)用于水平(ping)瓊脂糖凝膠電泳。
● 電泳示(shi)例(li)：
1. 使用單鏈DNA PAGE電泳染色(se)試劑盒（貨號(hao)：RTS5103）染色(se)：
2. 使用核酸PAGE電泳染(ran)色試(shi)劑盒（貨號：RTS5102）染(ran)色：
3. 使用RealSafe Red核酸染料（貨(huo)號：GR002）染(ran)色：
4. 使用核酸快速高靈敏度染色(se)試劑盒(he)（貨號：RTS5101）染(ran)色：
使用RTM501 單鏈DNA
Marker（20-75 nt）發表部分文章列表：
1. [2021 IF=3.532] Real-time detection of
SARS-CoV-2 in clinical samples via ultrafast ligation-dependent RNA transcription
amplification
Marker :RTM501，單鏈DNA Marker（20-75
nt）
Author: Peng
Zhang, Yang Li, Dongmei Zhang, Xinghao Zhu, Jinling Guo, Cuiping Ma and Chao
Shi
Journal: Analytical Methods 2023,
15,1915
Institution： Qingdao University
Paper
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