單鏈DNA Marker 15-120nt 預混型
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貨號(hao)
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名稱
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規(gui)格
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RTM506
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單(dan)鏈DNA Marker（15-120 nt）
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10次
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● 產品組成：
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貨(huo)號
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名稱(cheng)
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規(gui)格
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貯存
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RTM506-01
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單鏈DNA Marker（15-120 nt）
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50 μl
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-20℃
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DL080-01
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2×TBE尿素上樣緩沖(chong)液
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1 ml
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-20℃
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● 產品簡介：
單鏈DNA Marker由6條不同長度的單鏈DNA分子混合而成，6條帶的大小為15，40，60，80，100，120 nt，80 nt 濃度為0.4 μg/μl，其余條帶濃度為0.2
μg/μl。該Marker適用于跑尿素變性膠，電泳后使用單鏈DNA
PAGE電泳染色試劑盒（Cat：RTS5103），核酸PAGE電泳染色試劑盒（Cat：RTS5102），核酸快速高靈敏度染(ran)色試劑盒（Cat：RTS5101）或RealSafe類核(he)酸染料染色均可(ke)以得到清晰(xi)的(de)條帶分離效果。
樣品(pin)保存在1×TBE尿(niao)素上樣緩(huan)沖液中，上樣方便。以每次(ci)上樣5 μl計算，該單鏈DNA
Marker可以使用大約10次(ci)。
● 保存條件和運輸：
-20℃貯存，有效期(qi)24個月(yue)；濕冰(bing)運輸。
● 使用方法：
注：以下使用方法均以8×10cm凝膠 厚1.0mm示例，其他規格凝膠請適當調整。
一. 凝膠制備：
1.1 可以(yi)選(xuan)擇DNA尿素PAGE電泳試劑盒（Cat：RTE4102））或按照以(yi)下程序制膠(jiao)：
表一 TBE-尿素PAGE分離膠配方表 (總體積5 ml，適用于厚度1.0 mm小板膠)
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單鏈(lian)DNA長度
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最佳凝膠(jiao)濃度
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尿素(su)（克）
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40%PAA
（29:1）
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5×TBE
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補水到總體積
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10%APS
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TEMED
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200-1000 nt
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5%
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2.1克(ke)
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0.625 ml
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1 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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50-400 nt
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8%
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2.1克
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1 ml
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1 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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30-300 nt
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10%
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2.1克
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1.25 ml
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1 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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10-150 nt
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15%
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2.1克(ke)
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1.875 ml
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1 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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最后加入(ru)10%APS和(he)TEMD后，立(li)即混勻。
1.2在(zai)凝膠模具中灌入適量分離膠溶(rong)液(ye)（對于(yu)mini-gel，凝膠液(ye)加至約(yue)距(ju)前(qian)玻璃板(ban)頂端1.5 cm或距(ju)梳(shu)齒約(yue)0.5 cm即(ji)可），然后在(zai)分離膠溶(rong)液(ye)上輕(qing)輕(qing)覆蓋(gai)一層(ceng)1-5 cm的水(shui)層(ceng)，使(shi)凝膠表面保持(chi)平整。
1.3靜置10-20分鐘，待分離膠和水層之間出(chu)現一(yi)個(ge)清晰(xi)的界面(mian)后(hou)，說明凝膠已聚(ju)合。
注：凝膠的聚(ju)合(he)時間與環境溫度有關。夏天(tian)溫度較(jiao)高時，聚(ju)合(he)較(jiao)快；冬天(tian)氣溫低時，聚(ju)合(he)時間會延長。可以根據環境溫度的不同(tong)調節APS的加入量。
1.4去(qu)除(chu)覆蓋在分(fen)離膠(jiao)上的水層；按照表二將不同體積成分(fen)在一個小燒杯中混(hun)合；最后加入10%過硫(liu)酸銨和TEMED，輕(qing)輕(qing)攪拌使其混(hun)勻，避免產生氣泡。
表二 TBE-尿素PAGE 4%濃縮配方表 (總體積2 ml，適用于1.0mm厚度膠)
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各組(zu)份體積（ml）
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凝膠濃度
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尿(niao)素
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40%PAA（29:1）
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5×TBE
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滅菌(jun)水(shui)
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10%APS
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TEMED
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4%
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0.84克
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0.2 ml
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0.4 ml
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補水至體(ti)(ti)積2 ml
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20 μl
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2 μl
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1.5將濃縮膠(jiao)溶液加至(zhi)分離膠(jiao)的上(shang)面(mian)，直至(zhi)凝(ning)(ning)膠(jiao)溶液到達前玻(bo)璃板的頂(ding)端；將梳子插入(ru)凝(ning)(ning)膠(jiao)內(nei)，避免(mian)產生氣泡。
1.6靜置30-60分鐘，等待濃縮(suo)膠聚合(he)。
注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時，聚合較快；冬天氣溫低時，聚合時間會延長。可以根據環境溫度的不同調節APS的加入量。
二. 樣品制備：
2.1
取適(shi)量(liang)體(ti)積(ji)單(dan)鏈DNA
Marker樣(yang)(yang)品(pin)，70℃處(chu)理5分(fen)鐘，冰浴制冷后(hou)待(dai)上(shang)樣(yang)(yang)；待(dai)測樣(yang)(yang)品(pin)序與2×TBE尿素上(shang)樣(yang)(yang)緩沖液等(deng)體(ti)積(ji)混合后(hou)70℃處(chu)理5分(fen)鐘，冰浴制冷后(hou)待(dai)上(shang)樣(yang)(yang)。
三.電泳：
3.1. 預電泳（可選）：電泳槽內外加入適量1×TBE緩沖液穩壓200 V預電泳30分鐘。電泳結束后，用1×TBE緩沖液徹底沖洗加樣孔2-3次，去除殘余的尿素。
3.2.上樣：根據梳(shu)齒確定Marker上樣量， 一(yi)般是10齒1mm厚梳(shu)子(zi)上樣5
μl，15齒1mm厚梳(shu)子(zi)上樣3
μl。
3.3. 連接電(dian)源線，打開電(dian)源開關，按照(zhao)以(yi)下(xia)條件(jian)電(dian)泳。
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恒電(dian)壓
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起始電流
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結束(shu)電(dian)流
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電泳時間
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適用條件
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推薦電壓(ya)
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200V
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15-20 mA/板(ban)膠
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10-15 mA/板膠
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60+ min
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最佳電壓，最優(you)的分(fen)辨率
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3.4. 等待上樣(yang)緩(huan)沖液的溴酚(fen)藍指(zhi)示前沿到凝膠(jiao)底部時(shi)終止電泳，取出凝膠(jiao)進行后(hou)續實驗。
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變性膠(jiao)濃(nong)度(du)
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溴酚(fen)藍
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二甲(jia)苯菁
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5%
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35 nt
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130 nt
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8%
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19 nt
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75 nt
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10%
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15 nt
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55 nt
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15%
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8 nt
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42 nt
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四．染色：
用單鏈(lian)DNA PAGE電泳染色(se)試劑盒（Cat：RTS5103），核(he)酸PAGE電泳染色(se)試劑盒（Cat：RTS5102）或核(he)酸快速銀染試劑盒（Cat：RTS5101）染色(se)均可以得到清晰(xi)的條帶分離效(xiao)果。
注(zhu)：如(ru)果(guo)使用核酸染料染色，RealSafe
Red（貨(huo)號：GR002）或RealSafe
All（貨(huo)號：GR004）核酸染料結合單鏈(lian)核酸效果(guo)最(zui)佳(jia)，強烈建(jian)議使用以便(bian)獲得(de)最(zui)佳(jia)效果(guo)的膠圖。其(qi)余(yu)染料如(ru)GelRed，Goldview，EB等染色效果(guo)不好。
● 電泳示例：
1. 使用RealSafe Red核酸染料(liao)（貨號(hao)：GR002）染色(se)：
2. 使用核酸快速高靈敏度(du)染色試(shi)劑(ji)盒(he)（貨號(hao)：RTS5101）染色：
