單鏈DNA Marker（10-75 nt）預混型
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貨(huo)號
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名稱(cheng)
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規格(ge)
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RTM508
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單(dan)鏈(lian)DNA Marker（10-75 nt）預(yu)混型(xing)
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25次
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● 產品編號及規格：
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貨(huo)號
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名稱
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規格
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貯(zhu)存
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RTM508-01
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單鏈DNA Marker（10-75 nt）預(yu)混(hun)型
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25次（125 μl）
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-20℃
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DL080-01
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2×TBE尿(niao)素上樣緩沖液
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1 ml
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4℃或-20℃
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● 產品簡介：
單鏈DNA Marker由(you)不同(tong)長(chang)度(du)的單鏈DNA分(fen)(fen)(fen)子混合而成，9條(tiao)(tiao)帶(dai)的大小(xiao)為10，15，20，25，30，35，40，50，75
nt。35
nt 濃(nong)度(du)約為100
ng/μl，其余(yu)條(tiao)(tiao)帶(dai)濃(nong)度(du)約為50
ng/μl。該產品已經含有上樣緩沖液，使用前70度(du)處(chu)理(li)5分(fen)(fen)(fen)鐘后可以(yi)直(zhi)接(jie)上樣。該Marker適用于跑尿素變性膠，電泳(yong)后使用單鏈DNA
PAGE電泳(yong)染(ran)色(se)試(shi)劑(ji)(ji)盒(he)(he)（Cat：RTS5103），核酸PAGE電泳(yong)染(ran)色(se)試(shi)劑(ji)(ji)盒(he)(he)（Cat：RTS5102），核酸快速高靈敏度(du)染(ran)色(se)試(shi)劑(ji)(ji)盒(he)(he)（Cat：RTS5101）或核酸染(ran)料如(ru)RealSafe
Red（貨(huo)號(hao)：GR002）或RealSafe
All（貨(huo)號(hao)：GR004）均(jun)可以(yi)得到清(qing)晰的條(tiao)(tiao)帶(dai)分(fen)(fen)(fen)離效果。
產(chan)(chan)品內附(fu)帶2×TBE尿素上樣(yang)(yang)緩沖液（Cat：DL080-01），方便(bian)待檢樣(yang)(yang)品的上樣(yang)(yang)。以每次(ci)上樣(yang)(yang)5 μl計算，該產(chan)(chan)品可(ke)以使用大約25次(ci)。
● 貯存、運輸及效期：
按照標簽溫度貯(zhu)存(cun)；濕(shi)冰(bing)運輸(shu)，有效期2年(nian)。
● 使用方法：
注：以下使用方法均以8×10cm凝膠 厚1.0mm示例，其他規格凝膠請適當調整。
一. 凝膠制備：
1.1 可(ke)以選擇(ze)DNA尿素(su)PAGE電泳試劑盒（Cat：RTE4102））或按照以下(xia)程序制膠：
表一 TBE-尿素PAGE分離膠配方表 (總體積5 ml，適用于厚度1.0 mm小板膠)
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單鏈DNA長度
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最(zui)佳凝(ning)膠濃度
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尿(niao)素（克）
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40%PAA
（29:1）
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10×TBE
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補(bu)水(shui)到總(zong)體(ti)積(ji)
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10%APS
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TEMED
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200-1000 nt
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5%
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2.1克
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0.625 ml
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0.5 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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50-400 nt
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8%
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2.1克
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1 ml
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0.5
ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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30-300 nt
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10%
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2.1克
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1.25 ml
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0.5
ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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10-150 nt
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15%
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2.1克
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1.875 ml
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0.5
ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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5-120 nt
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20%
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2.1克
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2.5 ml
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0.5
ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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1.2在凝膠(jiao)(jiao)模具(ju)中灌入適量分離膠(jiao)(jiao)溶液（對于(yu)mini-gel，凝膠(jiao)(jiao)液加至約距(ju)前(qian)玻璃板頂端(duan)1.5 cm或距(ju)梳齒約0.5 cm即可），然后(hou)在分離膠(jiao)(jiao)溶液上輕(qing)輕(qing)覆蓋一(yi)層1-5 cm的水(shui)層，使凝膠(jiao)(jiao)表(biao)面保持平整。
1.3靜置10-20分(fen)鐘，待分(fen)離(li)膠和水層之間出現一個清晰(xi)的界(jie)面后(hou)，說明凝膠已聚合。
注(zhu)：凝膠的聚(ju)(ju)合(he)時間與環境(jing)溫(wen)度(du)有(you)關。夏天(tian)溫(wen)度(du)較(jiao)(jiao)高時，聚(ju)(ju)合(he)較(jiao)(jiao)快；冬天(tian)氣溫(wen)低時，聚(ju)(ju)合(he)時間會延長。可以根據環境(jing)溫(wen)度(du)的不同調(diao)節APS的加入量(liang)。
1.4去(qu)除覆蓋在分(fen)離膠上的(de)水層；按照表(biao)二將(jiang)不同體積成(cheng)分(fen)在一個小(xiao)燒杯中(zhong)混合；最后加入10%過硫酸銨和TEMED，輕輕攪(jiao)拌使其混勻，避(bi)免產(chan)生氣泡(pao)。
表二 TBE-尿素PAGE 4%濃縮配方表 (總體積2 ml，適用于1.0mm厚度膠)
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各組份體積（ml）
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凝膠(jiao)濃(nong)度
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尿素
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40%PAA（29:1）
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10×TBE
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滅(mie)菌水(shui)
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10%APS
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TEMED
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4%
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0.84克(ke)
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0.2 ml
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0.2 ml
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補水至體積(ji)2 ml
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20 μl
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2 μl
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1.5將(jiang)濃(nong)縮膠(jiao)溶(rong)(rong)液加至分離(li)膠(jiao)的上面(mian)，直至凝膠(jiao)溶(rong)(rong)液到(dao)達前玻璃板的頂端(duan)；將(jiang)梳子插入凝膠(jiao)內，避免產生(sheng)氣泡。
1.6靜置(zhi)30-60分鐘，等待濃縮膠聚(ju)合。
注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時，聚合較快；冬天氣溫低時，聚合時間會延長。可以根據環境溫度的不同調節APS的加入量。
二. 樣品制備：
2.1
取(qu)適量體積單鏈DNA
Marker樣(yang)(yang)品（不用添加上(shang)樣(yang)(yang)緩沖液）；待(dai)測樣(yang)(yang)品與(yu)等(deng)體積的2×TBE尿素上(shang)樣(yang)(yang)緩沖液（Cat：DL080-01）混合，70℃處理(li)5分(fen)鐘(zhong)，冰浴制(zhi)冷后待(dai)上(shang)樣(yang)(yang)。
三.電泳：
3.1. 預電泳（可選）：電泳槽內外加入適量1×TBE緩沖液穩壓200V預電泳30分鐘。電泳結束后，用1×TBE緩沖液徹底沖洗加樣孔2-3次，去除殘余的尿素。
3.2.上樣：根據梳(shu)(shu)齒確(que)定Marker上樣量， 一(yi)般是10齒1mm厚梳(shu)(shu)子上樣5
μl，15齒1mm厚梳(shu)(shu)子上樣3
μl。
3.3. 連(lian)接(jie)電源(yuan)線，打開(kai)電源(yuan)開(kai)關，按照以下條(tiao)件電泳(yong)。
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恒電壓
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起始電(dian)流
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結束電流
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電(dian)泳時(shi)間
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適(shi)用條件(jian)
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推(tui)薦(jian)電壓
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200 V
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15-20 mA/板膠
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10-15 mA/板膠
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60+ min
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最(zui)佳電(dian)壓，最(zui)優(you)的(de)分辨率
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3.4. 等待上樣緩沖液的溴酚(fen)藍指示前沿(yan)到凝膠(jiao)底部(bu)時終(zhong)止電泳，取(qu)出凝膠(jiao)進行(xing)后續實驗(yan)。
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變(bian)性膠(jiao)濃度(du)
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溴酚藍(lan)
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二甲苯(ben)菁
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5%
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~35 nt
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~130 nt
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8%
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~19 nt
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~75 nt
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10%
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~15 nt
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~55 nt
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15%
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~10 nt
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~52 nt
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20%
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~8 nt
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~35 nt
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四．染色：
用(yong)單(dan)鏈DNA PAGE電(dian)泳(yong)染(ran)(ran)色(se)(se)試劑(ji)盒（Cat：RTS5103），核(he)(he)酸(suan)(suan)(suan)PAGE電(dian)泳(yong)染(ran)(ran)色(se)(se)試劑(ji)盒（Cat：RTS5102）或核(he)(he)酸(suan)(suan)(suan)快速高(gao)靈敏度染(ran)(ran)色(se)(se)試劑(ji)盒（Cat：RTS5101）染(ran)(ran)色(se)(se)均可以(yi)得(de)到清晰的條帶分離效果。注：如果使(shi)用(yong)核(he)(he)酸(suan)(suan)(suan)染(ran)(ran)料染(ran)(ran)色(se)(se)，RealSafe Red（貨(huo)號：GR002）或RealSafe All（貨(huo)號：GR004）核(he)(he)酸(suan)(suan)(suan)染(ran)(ran)料結合單(dan)鏈核(he)(he)酸(suan)(suan)(suan)效果最(zui)佳(jia)，強烈建議使(shi)用(yong)以(yi)便獲得(de)最(zui)佳(jia)效果的膠圖(tu)。其余(yu)染(ran)(ran)料如GelRed，Goldview，EB等染(ran)(ran)色(se)(se)效果不好。
● 注意事項：
1. 單鏈DNA Marker產品適(shi)用于變性PAGE垂(chui)直電(dian)泳，不適(shi)用于水平瓊脂糖凝膠電(dian)泳。
● 電泳示例：
1. 使用RealSafe Red核酸染料（貨號：GR002）染色：
15%尿素變性膠分離單鏈DNA
lane 1-9 為10，15，20，25，30，35，40，50，75 nt ssDNA 上樣量為0.5
μg
lane 10：RTM501，單鏈DNA
Marker（20-75
nt）預混型，上樣量5
μl
lane 11：RTM507，單鏈DNA
Marker（20-75
nt）非預混型，配制后上樣量5
μl
lane 12：RTM508，單鏈DNA
Marker（10-75
nt）預混型，上樣量5
μl
電泳條件：1×TBE，恒壓200 V 50 min
染色：RealSafe Red后染20min，紫外激發
使用RTM501 單鏈DNA
Marker（20-75 nt）發表部分文章列表：
1. [2021 IF=3.532] Real-time detection of
SARS-CoV-2 in clinical samples via ultrafast ligation-dependent RNA transcription
amplification
Marker :RTM501，單鏈DNA Marker（20-75
nt）
Author: Peng
Zhang, Yang Li, Dongmei Zhang, Xinghao Zhu, Jinling Guo, Cuiping Ma and Chao
Shi
Journal: Analytical Methods 2023,
15,1915
Institution： Qingdao University
Paper
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