單鏈DNA Marker（10-75 nt）預混型
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貨號
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名稱
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規格
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RTM508
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單(dan)鏈DNA Marker（10-75 nt）預混型
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25次(ci)
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● 產品編號及規格：
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貨號
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名稱
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規格
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貯存
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RTM508-01
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單(dan)鏈DNA Marker（10-75 nt）預(yu)混(hun)型
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25次（125 μl）
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-20℃
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DL080-01
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2×TBE尿素(su)上樣緩沖(chong)液
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1 ml
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4℃或-20℃
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● 產品簡介：
單(dan)鏈(lian)DNA Marker由不(bu)同長度的單(dan)鏈(lian)DNA分(fen)子混合而(er)成(cheng)，9條帶(dai)的大小為10，15，20，25，30，35，40，50，75
nt。35
nt 濃度約為100
ng/μl，其余條帶(dai)濃度約為50
ng/μl。該產品已經(jing)含有上(shang)樣緩沖液(ye)，使用前70度處理(li)5分(fen)鐘后可(ke)(ke)以直接上(shang)樣。該Marker適用于(yu)跑(pao)尿素變性膠，電(dian)泳后使用單(dan)鏈(lian)DNA
PAGE電(dian)泳染色(se)試劑(ji)盒(he)（Cat：RTS5103），核(he)(he)酸(suan)PAGE電(dian)泳染色(se)試劑(ji)盒(he)（Cat：RTS5102），核(he)(he)酸(suan)快速高靈敏度染色(se)試劑(ji)盒(he)（Cat：RTS5101）或(huo)核(he)(he)酸(suan)染料如(ru)RealSafe
Red（貨號：GR002）或(huo)RealSafe
All（貨號：GR004）均可(ke)(ke)以得到清(qing)晰的條帶(dai)分(fen)離效果。
產品內附(fu)帶2×TBE尿素(su)上樣緩(huan)沖液（Cat：DL080-01），方(fang)便待檢樣品的上樣。以每次上樣5 μl計算，該產品可(ke)以使(shi)用(yong)大約25次。
● 貯存、運輸及效期：
按照標簽溫(wen)度貯存；濕冰運(yun)輸，有效期2年(nian)。
● 使用方法：
注：以下使用方法均以8×10cm凝膠 厚1.0mm示例，其他規格凝膠請適當調整。
一. 凝膠制備：
1.1 可以(yi)選(xuan)擇DNA尿(niao)素PAGE電泳試劑盒（Cat：RTE4102））或按(an)照以(yi)下(xia)程序制(zhi)膠(jiao)：
表一 TBE-尿素PAGE分離膠配方表 (總體積5 ml，適用于厚度1.0 mm小板膠)
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單鏈DNA長度(du)
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最佳凝膠濃度
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尿素(su)（克）
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40%PAA
（29:1）
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10×TBE
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補水到(dao)總體(ti)積
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10%APS
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TEMED
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200-1000 nt
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5%
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2.1克
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0.625 ml
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0.5 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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50-400 nt
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8%
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2.1克(ke)
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1 ml
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0.5
ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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30-300 nt
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10%
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2.1克(ke)
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1.25 ml
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0.5
ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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10-150 nt
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15%
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2.1克
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1.875 ml
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0.5
ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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5-120 nt
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20%
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2.1克
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2.5 ml
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0.5
ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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1.2在(zai)(zai)凝膠(jiao)(jiao)模具中(zhong)灌入適量分離膠(jiao)(jiao)溶液(ye)（對于mini-gel，凝膠(jiao)(jiao)液(ye)加(jia)至約(yue)(yue)距(ju)前玻璃板(ban)頂端1.5 cm或距(ju)梳(shu)齒約(yue)(yue)0.5 cm即可），然后在(zai)(zai)分離膠(jiao)(jiao)溶液(ye)上輕(qing)輕(qing)覆蓋一層1-5 cm的水層，使凝膠(jiao)(jiao)表面保(bao)持(chi)平整。
1.3靜置10-20分鐘(zhong)，待分離膠和水層之間(jian)出現一個清(qing)晰的界(jie)面后(hou)，說明凝(ning)膠已聚合。
注：凝膠的(de)聚(ju)合(he)時(shi)(shi)間與環境(jing)溫度(du)有關。夏天溫度(du)較高時(shi)(shi)，聚(ju)合(he)較快；冬天氣溫低時(shi)(shi)，聚(ju)合(he)時(shi)(shi)間會延長。可以根據環境(jing)溫度(du)的(de)不同調節APS的(de)加入量。
1.4去除覆蓋(gai)在分(fen)離膠(jiao)上的水層(ceng)；按照表(biao)二將不同體積成分(fen)在一個小燒(shao)杯中混合；最后加入(ru)10%過硫酸銨和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免(mian)產生(sheng)氣泡。
表二 TBE-尿素PAGE 4%濃縮配方表 (總體積2 ml，適用于1.0mm厚度膠)
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各組份體積（ml）
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凝膠濃度
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尿素
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40%PAA（29:1）
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10×TBE
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滅菌水(shui)
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10%APS
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TEMED
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4%
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0.84克
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0.2 ml
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0.2 ml
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補水至(zhi)體積2 ml
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20 μl
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2 μl
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1.5將濃縮膠溶液(ye)加至分離膠的上面，直至凝膠溶液(ye)到達前(qian)玻璃(li)板的頂端(duan)；將梳子插入凝膠內，避免產生(sheng)氣泡。
1.6靜置(zhi)30-60分(fen)鐘，等(deng)待濃縮膠(jiao)聚(ju)合。
注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時，聚合較快；冬天氣溫低時，聚合時間會延長。可以根據環境溫度的不同調節APS的加入量。
二. 樣品制備：
2.1
取(qu)適量(liang)體積單鏈DNA
Marker樣(yang)品(pin)（不用添加上樣(yang)緩(huan)沖液）；待(dai)測樣(yang)品(pin)與(yu)等(deng)體積的2×TBE尿素上樣(yang)緩(huan)沖液（Cat：DL080-01）混(hun)合，70℃處(chu)理5分(fen)鐘，冰浴制冷(leng)后待(dai)上樣(yang)。
三.電泳：
3.1. 預電泳（可選）：電泳槽內外加入適量1×TBE緩沖液穩壓200V預電泳30分鐘。電泳結束后，用1×TBE緩沖液徹底沖洗加樣孔2-3次，去除殘余的尿素。
3.2.上(shang)樣(yang)：根據梳齒確定(ding)Marker上(shang)樣(yang)量(liang)， 一般是10齒1mm厚(hou)梳子上(shang)樣(yang)5
μl，15齒1mm厚(hou)梳子上(shang)樣(yang)3
μl。
3.3. 連接電(dian)(dian)源線，打開(kai)(kai)電(dian)(dian)源開(kai)(kai)關，按照以下(xia)條件電(dian)(dian)泳。
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恒電壓
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起(qi)始電流
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結束(shu)電流(liu)
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電泳時間
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適(shi)用條件
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推薦電壓
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200 V
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15-20 mA/板膠(jiao)
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10-15 mA/板膠
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60+ min
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最佳電壓，最優的(de)分辨(bian)率
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3.4. 等待上(shang)樣緩(huan)沖液的溴酚藍指示前(qian)沿到凝(ning)膠(jiao)(jiao)底部時終止電(dian)泳，取出凝(ning)膠(jiao)(jiao)進行后續實驗(yan)。
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變性(xing)膠濃度(du)
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溴酚藍
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二甲苯(ben)菁
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5%
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~35 nt
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~130 nt
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8%
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~19 nt
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~75 nt
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10%
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~15 nt
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~55 nt
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15%
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~10 nt
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~52 nt
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20%
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~8 nt
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~35 nt
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四．染色：
用(yong)(yong)單鏈DNA PAGE電泳染(ran)(ran)(ran)色(se)試劑盒(he)（Cat：RTS5103），核(he)(he)酸(suan)(suan)(suan)PAGE電泳染(ran)(ran)(ran)色(se)試劑盒(he)（Cat：RTS5102）或核(he)(he)酸(suan)(suan)(suan)快速高靈敏度染(ran)(ran)(ran)色(se)試劑盒(he)（Cat：RTS5101）染(ran)(ran)(ran)色(se)均可以得到清晰的條帶分離效(xiao)(xiao)果(guo)(guo)。注：如果(guo)(guo)使用(yong)(yong)核(he)(he)酸(suan)(suan)(suan)染(ran)(ran)(ran)料染(ran)(ran)(ran)色(se)，RealSafe Red（貨號：GR002）或RealSafe All（貨號：GR004）核(he)(he)酸(suan)(suan)(suan)染(ran)(ran)(ran)料結(jie)合單鏈核(he)(he)酸(suan)(suan)(suan)效(xiao)(xiao)果(guo)(guo)最(zui)佳，強烈建議使用(yong)(yong)以便(bian)獲(huo)得最(zui)佳效(xiao)(xiao)果(guo)(guo)的膠(jiao)圖。其余(yu)染(ran)(ran)(ran)料如GelRed，Goldview，EB等染(ran)(ran)(ran)色(se)效(xiao)(xiao)果(guo)(guo)不好(hao)。
● 注意事項：
1. 單(dan)鏈DNA Marker產(chan)品(pin)適用于變性(xing)PAGE垂直電泳(yong)，不(bu)適用于水平瓊(qiong)脂糖凝膠(jiao)電泳(yong)。
● 電泳示例：
1. 使用RealSafe Red核酸染料（貨號：GR002）染色：
15%尿素變性膠分離單鏈DNA
lane 1-9 為10，15，20，25，30，35，40，50，75 nt ssDNA 上樣量為0.5
μg
lane 10：RTM501，單鏈DNA
Marker（20-75
nt）預混型，上樣量5
μl
lane 11：RTM507，單鏈DNA
Marker（20-75
nt）非預混型，配制后上樣量5
μl
lane 12：RTM508，單鏈DNA
Marker（10-75
nt）預混型，上樣量5
μl
電泳條件：1×TBE，恒壓200 V 50 min
染色：RealSafe Red后染20min，紫外激發
使用RTM501 單鏈DNA
Marker（20-75 nt）發表部分文章列表：
1. [2021 IF=3.532] Real-time detection of
SARS-CoV-2 in clinical samples via ultrafast ligation-dependent RNA transcription
amplification
Marker :RTM501，單鏈DNA Marker（20-75
nt）
Author: Peng
Zhang, Yang Li, Dongmei Zhang, Xinghao Zhu, Jinling Guo, Cuiping Ma and Chao
Shi
Journal: Analytical Methods 2023,
15,1915
Institution： Qingdao University
Paper
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