單鏈DNA Marker（10-75 nt）非預混型
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貨號(hao)
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名稱
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規格(ge)
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RTM509
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單鏈(lian)DNA Marker（10-75 nt）非(fei)預混型(xing)
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25次
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● 產品編號及規格：
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貨(huo)號
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名稱
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規格
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貯存
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RTM509-01
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單鏈DNA Marker（10-75 nt）非(fei)預混型
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62.5 μl
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-20℃
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DL080-01
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2×TBE尿素上樣(yang)緩(huan)沖液(ye)
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1 ml
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4℃
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DL112-01
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2×非變性PAGE DNA上樣緩沖液
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1 ml
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4℃
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● 產品簡介：
單鏈DNA Marker由不(bu)(bu)同(tong)長度的(de)單鏈DNA分(fen)(fen)子混合而(er)成，9條帶(dai)的(de)大小為10，15，20，25，30，35，40，
50，75
nt。該(gai)產(chan)品不(bu)(bu)含有(you)上(shang)(shang)樣緩(huan)沖(chong)液，可(ke)以(yi)根據(ju)實驗需求(qiu)使用(yong)(yong)不(bu)(bu)同(tong)的(de)上(shang)(shang)樣緩(huan)沖(chong)液，用(yong)(yong)于尿(niao)素變性(xing)電(dian)泳或(huo)非(fei)變性(xing)電(dian)泳。電(dian)泳后(hou)的(de)PAGE膠(jiao)可(ke)以(yi)使用(yong)(yong)單鏈DNA
PAGE電(dian)泳染(ran)色(se)試劑(ji)盒（Cat：RTS5103），核(he)酸PAGE電(dian)泳染(ran)色(se)試劑(ji)盒（Cat：RTS5102），核(he)酸快(kuai)速高靈敏度染(ran)色(se)試劑(ji)盒（Cat：RTS5101）或(huo)核(he)酸染(ran)料(liao)如RealSafe
Red（貨號：GR002）或(huo)RealSafe
All（貨號：GR004）進(jin)行染(ran)色(se)，均可(ke)以(yi)得到清晰的(de)條帶(dai)分(fen)(fen)離效果(guo)。
產品(pin)附帶(dai)2×TBE尿素上(shang)樣緩沖液(ye)和2×非(fei)變性(xing)PAGE DNA上(shang)樣緩沖液(ye)，方便待(dai)檢(jian)樣品(pin)的上(shang)樣。
配制好(hao)的即用型單鏈DNA Marker以(yi)每(mei)次上樣5 μl計算，該產(chan)品可以(yi)使(shi)用大約(yue)25次。
● 保存條件和運輸：
按照(zhao)標簽(qian)溫度(du)貯存；有效(xiao)期2年；濕冰運輸。
● 使用方法：
一. 即用型單鏈DNA Marker（10-75
nt）配制方法：
1.1 進行尿(niao)素變性電泳：
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即用(yong)型(xing)單鏈DNA
Marker（10-75 nt）
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配制體(ti)(ti)積(ji) 20 μl
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DNA
Marker（10-75 nt）非預混型
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10 μl
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2×TBE尿素上(shang)樣緩沖液
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10 μl
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混勻，70℃處(chu)理5分鐘
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1.2 進行非變性電泳：
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即用(yong)型單(dan)鏈DNA
Marker（10-75 nt）
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配制(zhi)體積 20 μl
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DNA
Marker（10-75 nt）非預混型
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10 μl
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2×非變(bian)性PAGE DNA上樣緩沖液(ye)
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10 μl
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混勻(yun)，不用加熱處理
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二. 凝膠制備：
注：以下使用(yong)方法均(jun)以8×10cm凝膠(jiao) 厚1.0mm示例，其他規格凝膠(jiao)請適(shi)當調(diao)整。
2.1 TBE-尿素凝膠制備：
2.1.1 可以(yi)選擇DNA尿素PAGE電泳試劑盒(he)（Cat：RTE4102））或按照以(yi)下程序制膠：
表一 TBE-尿素PAGE分離膠配方表 (總體積5 ml，適用于厚度1.0 mm小板膠)
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單鏈(lian)DNA長度
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最佳凝膠濃度
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尿素（克）
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40%PAA
（29:1）
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10×TBE
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補水到(dao)總體(ti)積
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10%APS
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TEMED
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200-1000 nt
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5%
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2.1克
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0.625 ml
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0.5 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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50-400 nt
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8%
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2.1克(ke)
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1 ml
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0.5
ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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30-300 nt
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10%
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2.1克
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1.25 ml
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0.5
ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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10-150 nt
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15%
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2.1克
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1.875 ml
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0.5
ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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5-120 nt
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20%
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2.1克
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2.5 ml
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0.5
ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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2.1.2在凝膠(jiao)(jiao)模具中灌(guan)入適(shi)量分離膠(jiao)(jiao)溶(rong)液（對于mini-gel，凝膠(jiao)(jiao)液加至約距前玻璃(li)板(ban)頂端(duan)1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可），然(ran)后在分離膠(jiao)(jiao)溶(rong)液上輕輕覆蓋一層1-5 cm的(de)水層，使(shi)凝膠(jiao)(jiao)表面保持平整。
2.1.3靜置10-20分(fen)鐘，待分(fen)離膠和水層之間出現(xian)一個(ge)清晰的界面后(hou)，說明凝膠已聚合。
注：凝膠(jiao)的聚(ju)(ju)合(he)時(shi)(shi)(shi)間(jian)與環境溫度有關。夏天溫度較高時(shi)(shi)(shi)，聚(ju)(ju)合(he)較快；冬天氣溫低時(shi)(shi)(shi)，聚(ju)(ju)合(he)時(shi)(shi)(shi)間(jian)會延長。可以根據(ju)環境溫度的不(bu)同(tong)調(diao)節APS的加(jia)入量。
2.1.4去(qu)除覆蓋在(zai)分離膠上的水層；按照表(biao)二(er)將不同體積成分在(zai)一(yi)個小燒杯(bei)中混(hun)合；最后(hou)加入10%過硫(liu)酸銨和TEMED，輕輕攪拌使(shi)其混(hun)勻，避(bi)免(mian)產生氣泡。
表二 TBE-尿素PAGE 4%濃縮配方表 (總體積2 ml，適用于1.0mm厚度膠)
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各(ge)組份體積(ji)（ml）
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凝膠濃度
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尿(niao)素
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40%PAA（29:1）
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10×TBE
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滅菌(jun)水(shui)
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10%APS
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TEMED
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4%
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0.84克(ke)
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0.2 ml
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0.2 ml
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補水至體積(ji)2 ml
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20 μl
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2 μl
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2.1.5將濃縮膠(jiao)溶液加至分離膠(jiao)的上面，直至凝膠(jiao)溶液到(dao)達(da)前玻璃板的頂端(duan)；將梳子插入(ru)凝膠(jiao)內，避免(mian)產生氣泡。
2.1.6靜置30-60分鐘，等待(dai)濃縮膠聚合。
注：凝膠的聚(ju)合(he)(he)時間與環境(jing)溫(wen)度(du)有(you)關。夏天(tian)溫(wen)度(du)較高時，聚(ju)合(he)(he)較快(kuai)；冬(dong)天(tian)氣溫(wen)低時，聚(ju)合(he)(he)時間會延長。可(ke)以根據環境(jing)溫(wen)度(du)的不同調節APS的加入量。
2.2非變性凝膠制備：
2.2.1可(ke)以選擇(ze)DNA非變性PAGE電泳試劑盒(he)（貨號：RTE4101）或按(an)照(zhao)以下程(cheng)序制膠。
2.2.2按照(zhao)表三將不同體積的(de)成分在(zai)小燒杯或試管中混(hun)合；最后加入10%APS和(he)TEMED，輕(qing)輕(qing)攪拌使其混(hun)勻(yun)，避免產生氣泡。
2.2.3在凝膠模(mo)具中灌入適量分離膠溶(rong)液(ye)（對于mini-gel，凝膠液(ye)加至約距前(qian)玻璃板頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可），然后在分離膠溶(rong)液(ye)上輕(qing)輕(qing)覆蓋一層1-5
cm的水層，使凝膠表(biao)面(mian)保持(chi)平整。
2.2.4靜置10-20分鐘，待分離膠(jiao)和(he)水層之間出現一個(ge)清晰的界面(mian)后，說明凝膠(jiao)已聚合
表三 TBE-非變性PAGE分離膠配方表 (總體積5 ml，適用于厚度1.0 mm小板膠)
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各(ge)組份體積（ml）
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最佳DNA分離范圍
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凝膠濃度
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滅菌水
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30%PAA（29：1）
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5×TBE
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10%APS
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TEMED
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70-450 bp
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6%
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3
|
1.0
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1.0
|
0.05
|
0.005
|
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60-460 bp
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8%
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2.66
|
1.34
|
1.0
|
0.05
|
0.005
|
|
50-300 bp
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10%
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2.33
|
1.67
|
1.0
|
0.05
|
0.005
|
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40-200 bp
|
12%
|
2
|
2.0
|
1.0
|
0.05
|
0.005
|
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25-150 bp
|
15%
|
1.5
|
2.5
|
1.0
|
0.05
|
0.005
|
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5-100 bp
|
20%
|
0.66
|
3.34
|
1.0
|
0.05
|
0.005
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注：凝膠的聚(ju)合時(shi)(shi)間(jian)與環(huan)境溫(wen)度有關。夏天(tian)溫(wen)度較高時(shi)(shi)，聚(ju)合較快；冬天(tian)氣溫(wen)低時(shi)(shi)，聚(ju)合時(shi)(shi)間(jian)會延長。可(ke)以(yi)根據環(huan)境溫(wen)度的不同調(diao)節(jie)APS的加(jia)入量。
2.2.5去除覆蓋在分離膠(jiao)上的(de)水(shui)層；按照表四將不同體(ti)積(ji)成分在一個小燒杯或試(shi)管中混合；最后加入10%過硫酸銨和TEMED，輕(qing)輕(qing)攪(jiao)拌使其混勻(yun)，避免產生氣泡(pao)。
表四 TBE-非變性PAGE 4%濃縮配方表 (總體積1.5 ml，適用于1.0mm厚度膠)
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各組份體積（ml）
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凝膠濃度
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滅菌水
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30%PAA（29：1）
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5×TBE
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10%APS
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TEMED
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|
4%
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1.0
|
0.2
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0.3
|
0.02
|
0.002
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2.2.6將濃縮膠(jiao)(jiao)溶(rong)液(ye)加至分離膠(jiao)(jiao)的(de)上面，直(zhi)至凝(ning)膠(jiao)(jiao)溶(rong)液(ye)到達前(qian)玻璃板的(de)頂端；將梳子插入凝(ning)膠(jiao)(jiao)內(nei)，避免產(chan)生氣泡(pao)。
2.2.7靜(jing)置30-60分鐘，等待濃縮膠聚合(he)。
注：凝膠(jiao)的聚合(he)時(shi)間與環境溫(wen)度(du)(du)有關(guan)。夏(xia)天溫(wen)度(du)(du)較高時(shi)，聚合(he)較快；冬天氣溫(wen)低時(shi)，聚合(he)時(shi)間會延長。可以根據環境溫(wen)度(du)(du)的不同調節APS的加入量。
三. 樣品制備：
3.1
根據實驗目的，配制(zhi)即用(yong)(yong)型(xing)單(dan)鏈(lian)DNA
Marker樣品（步驟一）。單(dan)鏈(lian)DNA樣品使(shi)用(yong)(yong)尿(niao)素變性(xing)電泳，雙(shuang)鏈(lian)DNA樣品使(shi)用(yong)(yong)非變性(xing)電泳，單(dan)鏈(lian)/雙(shuang)鏈(lian)混合樣品使(shi)用(yong)(yong)非變性(xing)電泳。
四. 電泳：
4.1. 預電(dian)(dian)泳(yong)（可選）：電(dian)(dian)泳(yong)槽(cao)內外加入適量1×TBE緩(huan)(huan)沖(chong)液(ye)穩壓200V預電(dian)(dian)泳(yong)30分鐘。電(dian)(dian)泳(yong)結束后，用1×TBE緩(huan)(huan)沖(chong)液(ye)徹(che)底沖(chong)洗加樣孔2-3次(ci)。
4.2.上樣：根據梳齒確定Marker上樣量， 一般是10齒1mm厚梳子上樣5
μl，15齒1mm厚梳子上樣3
μl。
4.3. 連接電(dian)源(yuan)線(xian)，打(da)開(kai)電(dian)源(yuan)開(kai)關，按照以(yi)下條(tiao)件電(dian)泳。
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恒電壓
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起始(shi)電流
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結(jie)束電(dian)流
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電泳時間
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適(shi)用(yong)條件
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推薦(jian)電(dian)壓
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200 V
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15-20 mA/板膠(jiao)
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10-15 mA/板膠(jiao)
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60+ min
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最(zui)佳電(dian)壓，最(zui)優的(de)分辨率
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4.4. 等待上樣緩沖(chong)液的溴(xiu)酚(fen)藍(lan)指示前沿到凝膠底部時終(zhong)止(zhi)電泳，取(qu)出凝膠進行后續實驗(yan)。
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膠(jiao)濃度(du)
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溴(xiu)酚藍
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二甲苯菁
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5%
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~35 nt
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~130 nt
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|
8%
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~19 nt
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~75 nt
|
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10%
|
~15 nt
|
~55 nt
|
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15%
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~10 nt
|
~52 nt
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20%
|
~8 nt
|
~35 nt
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五．染色：
用單鏈DNA PAGE電(dian)泳染(ran)(ran)(ran)色(se)試劑(ji)盒(he)(he)（Cat：RTS5103），核(he)(he)酸(suan)(suan)PAGE電(dian)泳染(ran)(ran)(ran)色(se)試劑(ji)盒(he)(he)（Cat：RTS5102）或核(he)(he)酸(suan)(suan)快速高靈敏度染(ran)(ran)(ran)色(se)試劑(ji)盒(he)(he)（Cat：RTS5101）染(ran)(ran)(ran)色(se)均可以得(de)到清(qing)晰的條(tiao)帶分離(li)效(xiao)果(guo)(guo)(guo)。注：如果(guo)(guo)(guo)使用核(he)(he)酸(suan)(suan)染(ran)(ran)(ran)料染(ran)(ran)(ran)色(se)，RealSafe Red（貨號：GR002）或RealSafe All（貨號：GR004）核(he)(he)酸(suan)(suan)染(ran)(ran)(ran)料結合單鏈核(he)(he)酸(suan)(suan)效(xiao)果(guo)(guo)(guo)最佳(jia)，強烈建議使用以便獲得(de)最佳(jia)效(xiao)果(guo)(guo)(guo)的膠(jiao)圖。其余染(ran)(ran)(ran)料如GelRed，Goldview，EB等染(ran)(ran)(ran)色(se)效(xiao)果(guo)(guo)(guo)不(bu)好。
六. 電泳示例：
6.1 使用RealSafe Red核酸染料（貨號：GR002）染色：
15%尿素變性膠分離單鏈DNA
lane 1-9 為10，15，20，25，30，35，40，50，75 nt ssDNA 上樣量為0.5 μg
lane 10：RTM501，單鏈DNA Marker（20-75 nt）預混型，上樣量5 μl
lane 11：RTM507，單鏈DNA Marker（20-75 nt）非預混型，配制后上樣量5 μl
lane 12：RTM509，單鏈DNA Marker（10-75 nt）預混型，配制后上樣量5 μl
電泳條件：1×TBE，恒壓200
V 50 min
染色：RealSafe
Red后染20min，紫外激發
使用RTM501 單鏈DNA
Marker（20-75 nt）發表部分文章列表：
1. [2021 IF=3.532] Real-time detection of
SARS-CoV-2 in clinical samples via ultrafast ligation-dependent RNA transcription
amplification
Marker :RTM501，單鏈DNA Marker（20-75
nt）
Author: Peng
Zhang, Yang Li, Dongmei Zhang, Xinghao Zhu, Jinling Guo, Cuiping Ma and Chao
Shi
Journal: Analytical Methods 2023,
15,1915
Institution： Qingdao University
Paper
link：