Bradford蛋白濃度測定試劑盒
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名稱
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貨號
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規格
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Bradford蛋白濃度測定試(shi)劑(ji)盒(he)
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RTP7101
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1000次（微孔(kong)板）
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● 試劑盒內容及保存：
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貨(huo)號
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產品名稱
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包裝
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貯存(cun)方式(shi)
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RTP7101-01
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考馬(ma)斯亮藍G-250染色(se)液
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200
ml
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4℃
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BSA-01
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牛(niu)血清白蛋白(BSA)標準溶液(ye)（5 mg/ml）
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2×1 ml
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-20℃
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RT0280-02
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PBS溶液
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10
ml
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4℃
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說明書
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1份
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● 儲存條件和效期：
考馬斯(si)亮藍G-250染(ran)色液4℃避光保存(cun)；牛血(xue)清(qing)白蛋白標(biao)準溶(rong)液-20℃貯(zhu)(zhu)存(cun)。PBS溶(rong)液4℃貯(zhu)(zhu)存(cun)。試劑(ji)盒常溫(wen)運輸；本(ben)試劑(ji)盒有效期1年。
● 產品簡介：
Bradford蛋(dan)白質(zhi)濃(nong)度測(ce)定試劑盒是根據考馬斯亮藍G-250（Coomassie
brilliant blue G-250）法(fa)研制而(er)成(cheng)，其原理(li)是考馬斯亮藍G-250在(zai)酸性條件下(xia)和(he)蛋(dan)白質(zhi)結合，使(shi)得染料最大吸(xi)收峰從465 nm變為595 nm，在(zai)一定的線性范圍內，反(fan)應(ying)液(ye)595 nm處(chu)吸(xi)光度的變化量與反(fan)應(ying)蛋(dan)白量成(cheng)正(zheng)比，測(ce)定595 nm處(chu)吸(xi)光度的增(zeng)加即可(ke)進行蛋(dan)白定量。
每個試劑盒可以檢測1000個樣品（使用微孔板）或60個樣品（使用試管）
● 產品特點：
1.
檢測速度(du)極快(kuai)，10個樣(yang)品只需不足10分鐘即(ji)可完成。
2.
靈敏度高，檢測(ce)濃(nong)(nong)度下限可達(da)(da)25
μg/ml （測(ce)定濃(nong)(nong)度范(fan)圍在25-1000 μg/ml內有較(jiao)好的線性關系，最佳測(ce)定濃(nong)(nong)度范(fan)圍為50-750
μg/ml），最小檢測(ce)蛋白(bai)量可達(da)(da)0.5
μg，待(dai)測(ce)樣品體積為1-20 μl。
3.
Bradford法測(ce)定(ding)蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)(du)(du)不受絕大部(bu)分樣(yang)品(pin)(pin)中的(de)(de)化學(xue)物質的(de)(de)影響。樣(yang)品(pin)(pin)中β-巰基(ji)乙醇的(de)(de)濃(nong)度(du)(du)(du)可(ke)高(gao)達1
M，DTT的(de)(de)濃(nong)度(du)(du)(du)可(ke)高(gao)達5
mM。然(ran)而(er)，此方法測(ce)定(ding)蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)(du)(du)受高(gao)濃(nong)度(du)(du)(du)的(de)(de)去(qu)(qu)垢劑影響，故不能適(shi)用(yong)膜蛋(dan)白(bai)樣(yang)品(pin)(pin)的(de)(de)濃(nong)度(du)(du)(du)測(ce)定(ding)。需確保測(ce)定(ding)樣(yang)品(pin)(pin)中SDS濃(nong)度(du)(du)(du)低(di)于(yu)(yu)0.01%，Triton
X-100濃(nong)度(du)(du)(du)低(di)于(yu)(yu)0.05%，Tween
20, 60, 80濃(nong)度(du)(du)(du)低(di)于(yu)(yu)0.015%。測(ce)定(ding)含去(qu)(qu)垢劑的(de)(de)樣(yang)品(pin)(pin)推薦使用(yong)BCA蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)(du)(du)測(ce)定(ding)試劑盒（RTP7102）。
● 操作方法
微孔板測定程序：（最優工作范圍50-750 μg/ml）
1． G-250染液在使用前應平衡溫度至室溫并溫和顛倒混勻；
2． 1 mg/ml蛋白標準品配制：常溫完全溶解蛋白標準品，取25 μl 5mg/ml BSA蛋白標準溶液，加入100 μl PBS溶液，使其終濃度為1 mg/ml。
3． 按照下表配制BSA標準測定溶液，建議做3個重復：
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編號(hao)
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0
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1
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2
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3
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4
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5
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6
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7
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1 mg/ml BSA標(biao)準溶液 μl
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BSA標準溶液 μl
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0
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1
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1.5
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2
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3
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6
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10
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15
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PBS 溶液 μl
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20
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19
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18.5
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18
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17
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14
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10
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5
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BSA終濃度 μg/ml
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0
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50
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75
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100
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150
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300
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500
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750
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總體(ti)積
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20 μl
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4． 將適當體積的待測樣品加入到微孔板中，并用PBS補足到20 μl；
5． 向微孔板中加入200 μl G-250染色液，混勻，室溫放置5分鐘；
6． 測定595 nm 處的吸光值，并記錄讀數；以不含BSA 的樣品的光吸收值作為空白對照。
7． 以BSA含量為縱坐標A595讀數為橫坐標，繪制標準曲線，計算樣品中的蛋白濃度。如果所得到的蛋白濃度不在標準曲線范圍內，請稀釋樣品后重新測定。
試管測定程序：（最優工作范圍50-750 μg/ml）
1. G-250染液在使用前應平衡溫度至室溫并溫和顛倒混勻；
2. 1mg/ml蛋白標準品配制：室溫完全溶解蛋白標準品，取360 μl 5mg/ml BSA蛋白標準溶液，加入1440 μl PBS溶液，使其終濃度為1.0 mg/ml。
3. 按照下表配制BSA標準測定溶液，建議做3個重復：
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編(bian)號
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0
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1
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2
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3
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4
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5
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6
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7
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1 mg/ml BSA標準溶(rong)液 μl
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BSA標(biao)準溶液(ye) μl
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0
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10
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15
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20
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30
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60
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100
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150
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PBS 溶液 μl
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200
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190
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185
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180
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170
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140
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100
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50
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BSA終濃(nong)度 μg/ml
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0
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50
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75
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100
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150
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300
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500
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750
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總體積
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200 μl
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4. 將適當體積的待測樣品加入到試管中，并用PBS補足到200 μl；
5. 向試管中加入3ml G-250染色液，混勻，室溫放置3-5分鐘；
6. 測定595
nm 處的吸光值，并記錄讀數；以不含BSA 的樣品的光吸收值作為空白對照。
7. 以BSA含量為縱坐標A595讀數為橫坐標，繪制標準曲線，計算樣品中的蛋白濃度。如果所得到的蛋白濃度不在標準曲線范圍內，請稀釋樣品后重新測定。
實驗示例：
引用RTP7101 Bradford蛋白濃度測定試劑盒發表文章
使用該產品發表部分文章列表：
1. [2013 IF=3.5] Identification of Novel
Surface-Exposed Proteins of Rickettsia rickettsii by Affinity Purification and
Proteomics.
Author: Wenping Gong, Xiaolu Xiong, Yong Qi, Jun Jiao, Changsong
Duan, Bohai Wen
Journal: Plos One. June 2014 | Volume 9 |
Issue 6 | e100253
Institution： State Key Laboratory of
Pathogen and Biosecurity, Beijing Institute of Microbiology and Epidemiology
Paper link： //journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0100253