核酸快速高靈敏度染(ran)色(se)試劑盒
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產(chan)品編號
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規格
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貯存
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RTS5101
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25次
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常溫
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● 儲存(cun)、運輸及(ji)效期
常溫(wen)保存；常溫(wen)運輸；有效期一(yi)年。
● 產品(pin)簡介
核酸(suan)快速(su)高(gao)靈(ling)敏度染色(se)試劑盒(Fast and High Sensitivity Stain Kit
for Nucleic Acids)是一種快速(su)簡單、可用(yong)(yong)于聚丙(bing)烯(xi)酰胺凝膠(jiao)中的(de)(de)核酸(suan)檢測的(de)(de)試劑盒。該方法檢測靈(ling)敏度比 EB 高(gao)達 200 倍(bei)，能檢測到(dao)10ng的(de)(de) DNA條帶，常用(yong)(yong)于檢測 SSR 標記、SNP 標記等(deng)。
本試劑盒可(ke)足夠(gou)用于25塊常規的(de)8×10cm凝膠的(de)染(ran)色(se)。
說明書后附有實驗記錄表格，方便記錄實驗步(bu)驟。
● 產品組成：
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產品編號
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產品(pin)名稱
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規格(ge)
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貯存
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RTS5101-1
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試劑A-增敏(min)液（10×）
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250 ml
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常(chang)溫
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RTS5101-2
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試(shi)劑B-加速液(ye)（10×）
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250 ml
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常溫
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RTS5101-3
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試劑C-染色溶液(100×)
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26 ml
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常(chang)溫(wen)，避光
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RTS5101-4
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試(shi)劑D-基本顯色液(10×)
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250 ml
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常溫
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RTS5101-5
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試劑E-顯色(se)加速液(500×)
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5 ml
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常(chang)溫，避光
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● 注意事(shi)項：
1. 由于染(ran)色非(fei)常(chang)靈(ling)敏，操作(zuo)時(shi)請注意盡(jin)量使(shi)(shi)用高純度的(de)水，并確保所使(shi)(shi)用的(de)器皿非(fei)常(chang)清潔(jie)，最好(hao)使用潔(jie)凈(jing)的玻璃器(qi)皿(min)。操作時必須(xu)戴手套，避免皮膚和凝膠直接接觸。
2. 需自(zi)備(bei)無水(shui)乙醇及MilliQ級純水(shui)。
3. 下述使用說(shuo)明中各種溶(rong)液的(de)(de)使用量(liang)適用于(yu)大(da)小為8×10cm厚度(du)為0.75-1mm的(de)(de)凝膠。對于(yu)更大(da)的(de)(de)凝膠，各種溶(rong)液的(de)(de)使用量(liang)需(xu)按(an)凝膠面積的(de)(de)比例放大(da)，對于(yu)更厚的(de)(de)凝膠，作用時(shi)間需(xu)按(an)照(zhao)厚度(du)的(de)(de)比例適當延長。
4. 本說(shuo)明(ming)書所指的(de)常(chang)溫溫度為20-25℃，操作溫度(du)較低時由于(yu)溶液的擴散能力下降(jiang)，各步驟需(xu)適當延(yan)長時間。
5. 基本(ben)顯色(se)液(10×)在低溫(wen)環(huan)境(jing)下可(ke)能會出現(xian)沉淀，可(ke)在37℃水浴中溶(rong)解，并充分混(hun)勻后使用。
● 使用方(fang)法：
一. 漂洗步驟：
電(dian)泳(yong)結束后，凝膠(jiao)中加入100 ml MilliQ級純(chun)水(shui)，在搖(yao)床(chuang)上常溫搖(yao)動2分鐘，搖(yao)動速度為60-70rpm；重復此步驟1次(ci)。
二. 染(ran)色步驟：
2.1 染色：
棄水，加(jia)入(ru)100 ml即用(yong)型染(ran)色液(ye)，在搖床上常溫搖動(dong)5分(fen)鐘，搖動(dong)速度(du)為(wei)60-70 rpm。
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即用型染色(se)液配制量(liang) 100 ml
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超純水(shui)
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79 ml
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試(shi)劑A-增敏液（10×）
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10 ml
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試劑B-加速液（10×）
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10 ml
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試劑C-染色溶液(100×)
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1 ml
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注：即(ji)用型染色(se)液(ye)配制后需在20分(fen)鐘內使(shi)用。
2.2 水洗滌：
棄原有溶液，加入(ru)100 ml MilliQ級純(chun)水(shui)或雙蒸水(shui)，在搖(yao)床上室(shi)溫搖(yao)動15-20秒，搖(yao)動速度為60-70rpm。
注意(yi)：水洗滌的時間不能超過20秒。
三(san). 顯色步驟(zou)：
棄水，加入100 ml顯色液，在搖床上室溫(wen)搖動3-10分(fen)鐘，直至出現比較理想的預期核酸條帶，搖動速(su)度為60-70rpm。
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顯色液配制量 ; ; 100 ml
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超純水
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89.8 ml
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試劑(ji)D-基(ji)本(ben)顯色液(10×)
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10 ml
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試劑E-顯(xian)色(se)加速液(500×)
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0.2 ml
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注(zhu)：顯色(se)加速液(500X)有(you)刺(ci)激性氣味，建議(yi)在通風櫥內操(cao)作；
顯色(se)液配(pei)制后需在20分鐘內使用。
四. 終止步驟：
棄顯色液，加入100 ml MilliQ級純(chun)水，在搖床上常溫搖動(dong)3-5分鐘，搖動(dong)速度為60-70 rpm。
五. 保(bao)存：
可在MilliQ級(ji)純水中(zhong)保存；或采用適(shi)當的(de)方式制(zhi)備成干膠。
● 常見問題(ti)：
一(yi). 背景太深(shen)：
1.1 顯色(se)時間過(guo)長(chang)。通常顯色(se)反應(ying)會在10分(fen)鐘(zhong)內結束，顯色(se)反應(ying)時間過(guo)長(chang)會導致背景很深(shen)。
1.2水的純度太(tai)低。需使用大于16
MΩ·cm的高純度水。
二. 核酸條(tiao)帶非常淺：
2.1 染(ran)色(se)(se)后(hou)水(shui)洗(xi)滌時間過(guo)(guo)長。在染(ran)色(se)(se)溶液(ye)染(ran)色(se)(se)后(hou)需(xu)嚴格控制(zhi)水(shui)洗(xi)滌的時間，水(shui)洗(xi)滌的時間不(bu)能超過(guo)(guo)20秒，否則會導(dao)致過(guo)(guo)多的染(ran)色(se)(se)離(li)子被洗(xi)去，導(dao)致檢測靈敏度下(xia)降。
2.2顯色(se)(se)加(jia)速液（500×）失(shi)(shi)效(xiao)。顯色(se)(se)加(jia)速液（500×）不(bu)能低溫(wen)保存(cun)，低溫(wen)保存(cun)會導(dao)致加(jia)速液失(shi)(shi)效(xiao)。
三(san). 凝膠上出(chu)現小(xiao)點或其它非核酸的(de)痕(hen)跡：
3.1 凝(ning)膠(jiao)沒有充分被(bei)溶(rong)液浸(jin)(jin)沒。請注意選擇大(da)小(xiao)合適的(de)(de)(de)容器，并加入足(zu)量的(de)(de)(de)各(ge)種溶(rong)液，同(tong)時需(xu)保持適當(dang)的(de)(de)(de)混勻速度確保凝(ning)膠(jiao)可以被(bei)溶(rong)液浸(jin)(jin)沒。
3.2 用(yong)(yong)(yong)于染(ran)色的容(rong)器(qi)(qi)沒(mei)有(you)充分(fen)洗(xi)滌(di)干凈。容(rong)器(qi)(qi)需先用(yong)(yong)(yong)洗(xi)滌(di)劑(ji)充分(fen)洗(xi)滌(di)，隨后(hou)用(yong)(yong)(yong)自(zi)來水充分(fen)沖洗(xi)，最后(hou)用(yong)(yong)(yong)高純度水再洗(xi)滌(di)數次。該容(rong)器(qi)(qi)最好能專(zhuan)用(yong)(yong)(yong)于染(ran)色，并注(zhu)意(yi)避免各(ge)種可能的污染(ran)。
3.3 指紋或其(qi)它壓痕。請注(zhu)意(yi)戴手套操作(zuo)，切勿直接(jie)接(jie)觸皮膚(fu)。操作(zuo)時請注(zhu)意(yi)盡量勿擠壓、折疊或(huo)摩(mo)擦凝膠。
3.4 有金屬物(wu)質接觸(chu)凝膠。金屬物(wu)質例如金屬鑷子等接觸(chu)凝膠會出現非特(te)異性痕跡。
實(shi)驗記錄表格
實驗日期：
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約25-30分鐘
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標記√
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起始時間
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一 漂洗步驟
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水漂洗
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2×2 min
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二 染色步驟
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染色
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5 min
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水漂洗
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＜1 min
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三 顯色步(bu)驟
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顯色(se)
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3-10 min
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四 終止步驟
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水漂洗
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5 min
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五 保存
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實驗示例：
1 雙(shuang)鏈DNA染色：
2 單鏈(lian)DNA/RNA染(ran)色(se)：
使用RTS5101 核酸快速高靈敏度染色試劑盒產品發表部分文章列表：
1. [2022 IF=8.4] A novel label-free
fluorescence aptasensor for dopamine detection based on an Exonuclease III- and
SYBR Green I- aided amplification strategy.
Author：Yanxian
Wang, Kai Kang, Sui Wang,Weijun Kang, Cheng Cheng, Ling Mei Niu，Zhiyong
Guo.
Journal: Sensors and Actuators B: Chemical.
2019, 305:127348
Institution：Ningbo University
Paper link：
2. [2022 IF=8.4] A robust photoluminescence
screening assay identifies uracil-DNA glycosylase inhibitors against prostate
cancer.
Author：Guodong
Li，Chung-Hang
Leung.
Journal: Chemical Science 2020,
11,1750–1760
Paper link：
3. [2022 IF=6.0] A novel resonance Rayleigh
scattering aptasensor for dopamine detection based on an Exonuclease III assisted
signal ampli?cation by G – quadruplex nanowires formation
Author：Yanxian
Wang, Kai Kang, Sui Wang,LiMa, Weijun Kang,Xue Hui Liu, Ling Mei Niu , Zhiyong
Guo
Journal: Arabian Journal of Chemistry (2020)
13, 6598–6605
Institution：Ningbo University
Paper link：
4. [2022 IF=6] A novel ?uorescent sensor
based on aptamer recognition and DNA walker ampli?cation strategy and its
determination of 17b-estradiol.
Author: Yajun Zhang, Licong Jia, Wei Wang,
Meng Jiang, Hongying Zhang, LingMei Niu
Journal: Arabian Journal of Chemistry. 16
(2023) 105340.
Institution：School of Public Health, Hebei Medical
University
Paper link：
5. [2022 IF=5.1] Repurposing sodium
stibogluconate as an uracil DNA glycosylase inhibitor against prostate cancer
using a time-resolved oligonucleotide-based drug screening platform.
Author: Sang-Cuo Nao, Le-Sheng Huang, Daniel
Shiu-Hin Chan, Xueliang Wang, Guo-Dong Li, Jia Wu, Chun-Yuen Wong, Wanhe Wang,
Chung-Hang Leung
Journal: Bioorganic Chemistry 144 (2024)
107176.
Institution：University of Macau
Paper link：