JM109化學克隆感受態細胞
目錄號：RTX301
儲存條件：-70℃凍存六個月
產品包裝：
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貨號
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RTX301-04
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JM109
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50×100ml
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Competent
cell Control Plasmid pUC18 (1 ng/μl)
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10μl
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產品簡介：
本公司生產的JM109感受態細胞采用經特殊工藝處理得到，可用于DNA的化學轉化。使用pUC18質粒檢測，轉化效率可達108cfu/μg，-70℃保存幾個月轉化效率不發生改變。
JM109菌株介紹：
基因型：endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+) relA1 supE44 D (lac-proAB) [F′traD36 proAB laqI qZΔM15]
特點：用于藍白斑篩選；recA1和 endA1 的突變有利于(yu)克隆 DNA 的穩定和高純(chun)度(du)質粒DNA
的提(ti)取。
操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）
1取感受(shou)態(tai)細(xi)胞(bao)置于(yu)冰浴中，如需(xu)分(fen)(fen)(fen)裝(zhuang)可(ke)將剛(gang)融化細(xi)胞(bao)懸液分(fen)(fen)(fen)裝(zhuang)到無菌預(yu)冷的(de)離心管中，置于(yu)冰浴中。一次轉化感受(shou)態(tai)細(xi)胞(bao)的(de)建議用量為(wei)50-100
μl，可(ke)以(yi)根據實際情(qing)況分(fen)(fen)(fen)裝(zhuang)使用。應注意所用DNA體積不(bu)要超過感受(shou)態(tai)細(xi)胞(bao)懸液體積的(de)十分(fen)(fen)(fen)之(zhi)一。
以下(xia)實驗以100
μl感受態細胞為例(li)。
2 向感(gan)受(shou)(shou)態細胞懸液中(zhong)加入目的(de)DNA（50
μl的(de)感(gan)受(shou)(shou)態細胞能夠被(bei)1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），輕輕旋轉(zhuan)離心管以混(hun)勻(yun)內容(rong)物，在冰浴中(zhong)靜置30分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放(fang)置45秒(miao)，然后快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻2-3分鐘，該過(guo)程不要(yao)搖動離心管。
4 向每(mei)個離(li)心管中加入500
μl 無(wu)菌的(de)SOC或LB培養基(ji)（不含(han)抗生素(su)）， 混勻(yun)后置于37℃搖床振(zhen)蕩培養45分(fen)鐘（150轉/分(fen)鐘），目的(de)是(shi)使質(zhi)粒上(shang)相關的(de)抗性標記基(ji)因表達，使菌體復蘇。
5將(jiang)離心管內容物混勻(yun)，吸(xi)取100
μl已轉化的感(gan)受態細胞加(jia)到含相應抗(kang)生素(su)的SOB或LB固體瓊脂培養(yang)基上，用無菌的彎頭(tou)玻棒輕(qing)輕(qing)的將(jiang)細胞均(jun)勻(yun)涂開。將(jiang)平板置(zhi)于室溫直至液體被吸(xi)收，倒置(zhi)平板，37℃培養(yang)12—16小時。
注(zhu)：涂(tu)布用量可(ke)(ke)根據具體(ti)實(shi)驗來調整。如(ru)轉(zhuan)化(hua)的(de)(de)(de)(de)DNA總(zong)量較多，可(ke)(ke)取更少量轉(zhuan)化(hua)產物涂(tu)布平板(ban)；反之，如(ru)轉(zhuan)化(hua)的(de)(de)(de)(de)DNA總(zong)量較少，可(ke)(ke)取200—300
μl轉(zhuan)化(hua)產物涂(tu)布平板(ban)。如(ru)果(guo)預計的(de)(de)(de)(de)克隆較少，可(ke)(ke)通過離心(xin)（4,000 rpm, 2分鐘(zhong)）后吸除(chu)部(bu)分培(pei)養液(ye)，懸浮菌(jun)體(ti)后將(jiang)其涂(tu)布于(yu)一個平板(ban)中。（涂(tu)布剩(sheng)(sheng)余的(de)(de)(de)(de)菌(jun)液(ye)可(ke)(ke)置于(yu)4℃保存，如(ru)果(guo)次日的(de)(de)(de)(de)轉(zhuan)化(hua)菌(jun)落(luo)數過少可(ke)(ke)以將(jiang)剩(sheng)(sheng)下的(de)(de)(de)(de)菌(jun)液(ye)再涂(tu)布新的(de)(de)(de)(de)培(pei)養板(ban)）
注(zhu)意事項(xiang)：
1. 感受態(tai)細胞(bao)應保存在-70℃，不(bu)可(ke)多次凍融(rong)和放(fang)置(zhi)時(shi)間過長，以避免感受態(tai)細胞(bao)的轉化效率。
2. 進行(xing)轉(zhuan)化操作時，應根(gen)據相應溫度(du)及無菌條件的要求進行(xing)。
3. 為防止轉化實(shi)驗不成(cheng)功，可(ke)以保留部分連接反應液，以重新(xin)轉化，將損失降到最低。