DH5α化學克隆感受態細胞
● 目錄號：RTX302
● 儲存條件：-70℃凍存六個月
● 產品包裝：
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貨號
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RTX302-04
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DH5α
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50×100ml
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Competent
cell Control Plasmid pUC18 (1 ng/μl)
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10μl
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● 產品簡介：
本公司生產的DH5α感受態細胞采用經特殊工藝處理得到，可用于DNA的化學轉化。使用pUC18質粒檢測，轉化效率可達108cfu/μg，-70℃保(bao)存幾個月(yue)轉化效率不發生改變。
● DH5α菌株介紹：
基因型：supE44△lacU169（j80 lacZ△M15）hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1
特點：一種用于鋪制與培養質粒平板和粘粒平板的重組缺陷的抑制型菌株。其j80 lacZ△M15基因的產物可與(yu)pUC載體編碼的 b-半乳糖苷酶氨(an)基端實現a互補，可用于藍白斑篩(shai)選。
● 操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）
1取感受態(tai)(tai)細胞置于冰(bing)浴(yu)中(zhong)，如需分裝可將剛融化細胞懸(xuan)液分裝到無菌預冷的離心(xin)管中(zhong)，置于冰(bing)浴(yu)中(zhong)。一次(ci)轉(zhuan)化感受態(tai)(tai)細胞的建(jian)議用量為50-100
μl，可以根據實際情況分裝使用。應注(zhu)意所用DNA體(ti)積不要超過感受態(tai)(tai)細胞懸(xuan)液體(ti)積的十分之一。
以下實驗以100 μl感受(shou)態細胞(bao)為例。
2 向感受(shou)態細(xi)胞懸液中加入目的(de)DNA（100
μl的(de)感受(shou)態細(xi)胞能夠被1 ng超(chao)螺旋質(zhi)粒DNA所飽(bao)和），輕輕旋轉(zhuan)離心管以(yi)混勻內容(rong)物，在(zai)冰浴中靜置30分鐘(zhong)。
3 將離心(xin)管(guan)置于42℃水浴中(zhong)放置45-90秒，然后(hou)快速將管(guan)轉移(yi)到冰浴中(zhong)，使細胞(bao)冷(leng)卻(que)2-3分鐘，該過(guo)程不(bu)要(yao)搖動離心(xin)管(guan)。
4 向每(mei)個(ge)離心(xin)管中加入500
μl 無菌的SOC或LB培養(yang)基（不含抗生素）， 混勻后置于(yu)37℃搖床(chuang)振蕩培養(yang)45分鐘（150轉/分鐘），目(mu)的是(shi)使質粒上相關的抗性標記基因(yin)表達，使菌體復蘇。
5將(jiang)(jiang)離心管(guan)內容物混勻，吸取100
μl已轉化的(de)感(gan)受態細胞(bao)加到含相應抗(kang)生(sheng)素的(de)SOB或LB固體(ti)瓊脂(zhi)培(pei)養基上，用無菌的(de)彎頭玻棒輕(qing)輕(qing)的(de)將(jiang)(jiang)細胞(bao)均勻涂開。將(jiang)(jiang)平(ping)板置(zhi)于室溫(wen)直至液體(ti)被吸收，倒置(zhi)平(ping)板，37℃培(pei)養12-16小時。
注：涂(tu)布(bu)用量(liang)可根據具體(ti)實驗來調整。如(ru)轉(zhuan)化(hua)的(de)(de)(de)DNA總(zong)(zong)量(liang)較(jiao)多，可取更(geng)少(shao)(shao)量(liang)轉(zhuan)化(hua)產物(wu)涂(tu)布(bu)平(ping)板(ban)(ban)；反之(zhi)，如(ru)轉(zhuan)化(hua)的(de)(de)(de)DNA總(zong)(zong)量(liang)較(jiao)少(shao)(shao)，可取200-300
μl轉(zhuan)化(hua)產物(wu)涂(tu)布(bu)平(ping)板(ban)(ban)。如(ru)果預計的(de)(de)(de)克隆較(jiao)少(shao)(shao)，可通過(guo)離(li)心(xin)（4,000 rpm, 2分鐘）后吸(xi)除部分培(pei)(pei)養(yang)(yang)液，懸浮菌體(ti)后將(jiang)其涂(tu)布(bu)于一個(ge)平(ping)板(ban)(ban)中。（涂(tu)布(bu)剩余的(de)(de)(de)菌液可置于4℃保(bao)存，如(ru)果次(ci)日(ri)的(de)(de)(de)轉(zhuan)化(hua)菌落數過(guo)少(shao)(shao)可以(yi)將(jiang)剩下的(de)(de)(de)菌液再涂(tu)布(bu)新的(de)(de)(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)板(ban)(ban)）
注(zhu)意事項：
1. 感受態細胞應(ying)保存在-70℃，不可多次凍融和放(fang)置時間過(guo)長，以避免感受態細胞的(de)轉化(hua)效率(lv)。
2. 進(jin)(jin)行轉(zhuan)化操作時，應根(gen)據相應溫度及無菌條件的要求進(jin)(jin)行。
3. 為防止轉(zhuan)化實(shi)驗不成功(gong)，可以(yi)保留(liu)部分連(lian)接反應(ying)液，以(yi)重新轉(zhuan)化，將損失降到最(zui)低。