Top10化學感受態細胞
目錄號：RTX303
儲存條件：-70℃凍存六個月
產品包裝：
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貨號(hao)
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RTX303-04
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Top10
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50×100ml
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Competent
cell Control Plasmid pUC18 (1 ng/μl)
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10μl
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產品簡介：
本公司生產的Top10感受態細胞采用經特殊工藝處理得到，可用于DNA的化學轉化。使用pUC18質粒檢測，轉化效率可達108cfu/μg，-70℃保存幾個(ge)月轉(zhuan)化效(xiao)率不發生改(gai)變。
Top10菌株介紹：
基因型：F- mcrA △(mrr-hsdRMS-mcrBC) j80 lacZ△M15△?lacⅩ74 recA1 deoR araD139△(ara-leu) 7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG
特點：一種用于鋪制與培養質粒平板和粘粒平板的重組缺陷的抑制型菌株。其j80 lacZ△M15基因的產物可(ke)與pUC載(zai)體(ti)編碼的 b-半乳糖(tang)苷酶氨基端實現a互補(bu)，可(ke)用于藍白(bai)斑篩選。
操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）
1取(qu)感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞(bao)(bao)置(zhi)于(yu)冰浴(yu)中(zhong)，如需分裝(zhuang)可將剛融化細(xi)胞(bao)(bao)懸(xuan)液分裝(zhuang)到(dao)無菌預冷的(de)離心管中(zhong)，置(zhi)于(yu)冰浴(yu)中(zhong)。一(yi)次轉化感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞(bao)(bao)的(de)建議用(yong)量為(wei)50-100
μl，可以根據實際情(qing)況分裝(zhuang)使用(yong)。應注意所(suo)用(yong)DNA體積不(bu)要超過感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞(bao)(bao)懸(xuan)液體積的(de)十分之(zhi)一(yi)。
以(yi)(yi)下(xia)實驗以(yi)(yi)100 μl感受態(tai)細胞為(wei)例(li)。
2 向感受態細(xi)胞懸液中加入目(mu)的(de)DNA（50
μl的(de)感受態細(xi)胞能夠被1 ng超螺旋質粒(li)DNA所飽和），輕輕旋轉離心管以(yi)混勻內容物，在冰浴中靜置(zhi)30分鐘。
3 將離心管(guan)(guan)置(zhi)于42℃水浴中(zhong)放置(zhi)45秒，然后(hou)快速將管(guan)(guan)轉(zhuan)移(yi)到冰浴中(zhong)，使細胞冷卻(que)2-3分鐘，該過程不要搖動離心管(guan)(guan)。
4 向(xiang)每(mei)個離心(xin)管中加入500
μl 無菌(jun)的(de)SOC或LB培養(yang)(yang)基（不含抗(kang)生素）， 混(hun)勻(yun)后置于37℃搖床(chuang)振蕩(dang)培養(yang)(yang)45分(fen)鐘（150轉/分(fen)鐘），目的(de)是使質(zhi)粒(li)上相關的(de)抗(kang)性標記基因表達，使菌(jun)體復蘇。
5將離心管內容物(wu)混勻，吸取(qu)100
μl已轉化的(de)感受態細胞(bao)加(jia)到含相應抗生(sheng)素(su)的(de)SOB或(huo)LB固體瓊(qiong)脂培養基上(shang)，用無菌的(de)彎頭玻棒輕(qing)輕(qing)的(de)將細胞(bao)均勻涂開。將平板置于室(shi)溫直至(zhi)液(ye)體被(bei)吸收(shou)，倒置平板，37℃培養12-16小時。
注：涂(tu)布(bu)(bu)用量(liang)可(ke)根據具體實驗來調整。如(ru)(ru)轉化(hua)的(de)DNA總量(liang)較(jiao)多，可(ke)取(qu)更(geng)少量(liang)轉化(hua)產(chan)物(wu)涂(tu)布(bu)(bu)平(ping)板(ban)(ban)；反之(zhi)，如(ru)(ru)轉化(hua)的(de)DNA總量(liang)較(jiao)少，可(ke)取(qu)200-300
μl轉化(hua)產(chan)物(wu)涂(tu)布(bu)(bu)平(ping)板(ban)(ban)。如(ru)(ru)果預計的(de)克隆較(jiao)少，可(ke)通過(guo)離心(xin)（4,000 rpm, 2分(fen)鐘(zhong)）后(hou)吸除部分(fen)培(pei)養(yang)液，懸(xuan)浮(fu)菌(jun)(jun)體后(hou)將(jiang)其涂(tu)布(bu)(bu)于(yu)一個平(ping)板(ban)(ban)中。（涂(tu)布(bu)(bu)剩余的(de)菌(jun)(jun)液可(ke)置于(yu)4℃保存，如(ru)(ru)果次日(ri)的(de)轉化(hua)菌(jun)(jun)落數過(guo)少可(ke)以(yi)將(jiang)剩下的(de)菌(jun)(jun)液再涂(tu)布(bu)(bu)新的(de)培(pei)養(yang)板(ban)(ban)）
注意事項：
1. 感受態(tai)細胞(bao)應(ying)保存在-70℃，不可(ke)多次凍融和放置時間過長，以(yi)避免(mian)感受態(tai)細胞(bao)的轉化(hua)效率。
2. 進(jin)行(xing)(xing)轉化操作時，應(ying)根據相應(ying)溫度(du)及無菌條件的(de)要求進(jin)行(xing)(xing)。
3. 為(wei)防止轉化實驗不成功，可(ke)以(yi)保留部分連接反應液，以(yi)重新轉化，將(jiang)損失降到最低(di)。
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1. 感(gan)受態細胞(bao)應保存(cun)在-70℃，不可多(duo)次凍融和(he)放置時間(jian)過(guo)長，以避(bi)免感(gan)受態細胞(bao)的轉化(hua)效率。
2. 進(jin)行(xing)轉化操作時，應根(gen)據相應溫度及無菌(jun)條件(jian)的要求進(jin)行(xing)。
3. 為防止(zhi)轉化實驗不成(cheng)功(gong)，可以保留(liu)部分連接反應液，以重新轉化，將損失降到最低。