BL21(DE3)化學感受態細胞
目錄號：RTX304
儲存條件：-70℃凍存六個月
產品包裝：
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貨號
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RTX304-04
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BL21（DE3）
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50×100ml
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Competent
cell Control Plasmid pUC18 (1 ng/μl)
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10μl
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產品簡介：
本公司生產的BL21(DE3)感受態細胞采用經特殊工藝處理得到，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達108cfu/μg，-70℃保存幾個月轉化(hua)效率不(bu)發生改變。
BL21(DE3)菌株介紹：
特(te)點(dian)：(1)T7 RNA 聚合酶基因的表達受控于λ 噬菌體DE3
區的lacUV5 啟動子(zi)，該區整合于BL21
的染色體上。
(2)適(shi)用(yong)于T7、T7
lac 啟動子的表達系統，如pET，pEASY。
(3) 適用(yong)于(yu)非毒性蛋白的(de)表達。
(4) 使用pUC19
質粒DNA 檢測，轉化效率可達107 cfu/μg
DNA。
操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）
1取感受態細(xi)胞置于冰浴(yu)中(zhong)，如需分裝(zhuang)可(ke)將剛(gang)融(rong)化細(xi)胞懸(xuan)液(ye)分裝(zhuang)到無菌預冷的(de)離心管中(zhong)，置于冰浴(yu)中(zhong)。一次轉化感受態細(xi)胞的(de)建(jian)議用(yong)(yong)量為50-100
μl，可(ke)以根據實(shi)際情況分裝(zhuang)使(shi)用(yong)(yong)。應注意所(suo)用(yong)(yong)DNA體積不要超(chao)過(guo)感受態細(xi)胞懸(xuan)液(ye)體積的(de)十分之一。
以下實驗以100 μl感受態細胞為例。
2 向感受態細(xi)胞懸液中(zhong)加入(ru)目的DNA（50
μl的感受態細(xi)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhi)粒(li)DNA所飽和），輕輕旋轉離心管以混勻內(nei)容物，在(zai)冰浴(yu)中(zhong)靜置30分鐘。
3 將(jiang)離心管(guan)置于42℃水浴中放置90秒，然后快速將(jiang)管(guan)轉(zhuan)移到冰(bing)浴中，使(shi)細胞冷卻2-3分(fen)鐘，該(gai)過(guo)程不要搖動離心管(guan)。
4 向每個離心管中加入(ru)500
μl 無(wu)菌的SOC或LB培養(yang)(yang)基(ji)（不含抗(kang)生素）， 混(hun)勻(yun)后置于37℃搖(yao)床(chuang)振蕩培養(yang)(yang)45分鐘（150轉/分鐘），目的是(shi)使質粒上相關的抗(kang)性(xing)標記基(ji)因表(biao)達(da)，使菌體復蘇。
5將(jiang)(jiang)離心管內容(rong)物(wu)混(hun)勻，吸取100
μl已轉化(hua)的(de)(de)感(gan)受態(tai)細胞(bao)加到(dao)含相應抗生(sheng)素的(de)(de)SOB或LB固(gu)體(ti)(ti)瓊脂培養基上，用(yong)無菌的(de)(de)彎頭玻棒(bang)輕輕的(de)(de)將(jiang)(jiang)細胞(bao)均勻涂(tu)開。將(jiang)(jiang)平板(ban)置于室(shi)溫直至液體(ti)(ti)被吸收，倒置平板(ban)，37℃培養12-16小時。
注：涂布(bu)用(yong)量(liang)可根據具體實驗來調整。如(ru)(ru)轉(zhuan)化(hua)(hua)的(de)DNA總(zong)量(liang)較(jiao)多，可取更少(shao)量(liang)轉(zhuan)化(hua)(hua)產(chan)物涂布(bu)平(ping)板(ban)；反之，如(ru)(ru)轉(zhuan)化(hua)(hua)的(de)DNA總(zong)量(liang)較(jiao)少(shao)，可取200-300
μl轉(zhuan)化(hua)(hua)產(chan)物涂布(bu)平(ping)板(ban)。如(ru)(ru)果預計的(de)克隆較(jiao)少(shao)，可通(tong)過離心（4,000 rpm, 2分鐘(zhong)）后(hou)吸除(chu)部分培(pei)養液，懸浮菌(jun)(jun)體后(hou)將(jiang)其涂布(bu)于一個平(ping)板(ban)中。（涂布(bu)剩(sheng)余的(de)菌(jun)(jun)液可置于4℃保(bao)存，如(ru)(ru)果次(ci)日的(de)轉(zhuan)化(hua)(hua)菌(jun)(jun)落數過少(shao)可以(yi)將(jiang)剩(sheng)下的(de)菌(jun)(jun)液再涂布(bu)新(xin)的(de)培(pei)養板(ban)）
注意事項：
1. 感(gan)受態(tai)細胞應保存在-70℃，不可多(duo)次凍融和放置時間過(guo)長(chang)，以避免感(gan)受態(tai)細胞的轉化效率(lv)。
2. 進行轉化操作(zuo)時，應根(gen)據相應溫度及無菌條(tiao)件的要求(qiu)進行。
3. 為防止轉化實驗(yan)不成功，可以(yi)(yi)保(bao)留部分連接反應液，以(yi)(yi)重(zhong)新轉化，將損(sun)失降到最低。