JM110化學克隆感受態細胞
目錄號：RTX305
儲存條件：-70℃凍存六個月
產品包裝：
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貨號(hao)
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RTX305-04
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JM110
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50×100ml
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Competent
cell Control Plasmid pUC18 (1 ng/μl)
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10μl
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產品簡介：
本公司生產的JM1110感受態細胞采用經特殊工藝處理得到，可用于DNA的化學轉化。使用pUC18質粒檢測，轉化效率可達108cfu/μg，-70℃保存幾個月轉化效(xiao)率(lv)不發生改變。
JM110菌株介紹：
基因型：rpsL (Str R) thr leu thi-1 lacY
galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB)
/F′ [traD36 proAB lacIq lacZΔM15]
特點：1.JM 110 是一種甲基化(hua)基因dam、dcm
缺失的(de)菌株，使DNA 不被(bei)甲基化(hua)，使用其轉化(hua)所得到的(de)質粒DNA，可被(bei)對(dui)dam、dcm
甲基化(hua)敏感的(de)限(xian)制酶切割。
2.只適用于轉化(hua)質(zhi)粒DNA。
3.細胞具有(you)硫酸(suan)鏈霉(mei)素(Strr)
抗性。
操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）
1取(qu)感受(shou)態細胞置于冰(bing)浴中(zhong)，如需(xu)分裝可將剛融(rong)化(hua)細胞懸液分裝到無菌預冷的(de)離心(xin)管中(zhong)，置于冰(bing)浴中(zhong)。一(yi)次轉化(hua)感受(shou)態細胞的(de)建(jian)議用量為50-100
μl，可以根據實(shi)際情況分裝使(shi)用。應(ying)注意所(suo)用DNA體(ti)積(ji)不要超過感受(shou)態細胞懸液體(ti)積(ji)的(de)十(shi)分之一(yi)。
以(yi)下(xia)實(shi)驗以(yi)100
μl感受(shou)態細胞為(wei)例。
2 向(xiang)感受(shou)態細胞懸液中(zhong)加入目(mu)的(de)DNA（50
μl的(de)感受(shou)態細胞能夠被(bei)1 ng超螺旋(xuan)質粒DNA所飽和(he)），輕輕旋(xuan)轉離心(xin)管以混(hun)勻內容物，在冰(bing)浴中(zhong)靜(jing)置(zhi)30分鐘。
3 將離心管(guan)置(zhi)于42℃水浴中(zhong)放置(zhi)45秒，然后快速將管(guan)轉移到冰浴中(zhong)，使(shi)細胞冷卻2-3分(fen)鐘，該過程不要(yao)搖動離心管(guan)。
4 向每個離心管中加入500
μl 無(wu)菌的(de)SOC或LB培養基（不含抗(kang)生素）， 混勻后置于37℃搖床振(zhen)蕩培養45分(fen)鐘(zhong)(zhong)（150轉/分(fen)鐘(zhong)(zhong)），目的(de)是(shi)使質(zhi)粒上相關的(de)抗(kang)性標記(ji)基因表達(da)，使菌體復蘇。
5將離心管內容(rong)物混勻(yun)，吸取100
μl已轉(zhuan)化的(de)感(gan)受態細(xi)胞加(jia)到含(han)相應抗生(sheng)素的(de)SOB或LB固(gu)體瓊脂培養基上，用無菌的(de)彎頭玻(bo)棒輕輕的(de)將細(xi)胞均勻(yun)涂開(kai)。將平(ping)板(ban)置于(yu)室溫直(zhi)至(zhi)液體被(bei)吸收，倒置平(ping)板(ban)，37℃培養12—16小時。
注：涂(tu)布用量可(ke)(ke)(ke)根據具體實驗來調整(zheng)。如轉(zhuan)(zhuan)化(hua)的(de)(de)DNA總量較多，可(ke)(ke)(ke)取(qu)更少量轉(zhuan)(zhuan)化(hua)產(chan)物涂(tu)布平板(ban)(ban)；反之，如轉(zhuan)(zhuan)化(hua)的(de)(de)DNA總量較少，可(ke)(ke)(ke)取(qu)200—300
μl轉(zhuan)(zhuan)化(hua)產(chan)物涂(tu)布平板(ban)(ban)。如果預計(ji)的(de)(de)克隆較少，可(ke)(ke)(ke)通過(guo)離(li)心（4,000 rpm, 2分鐘）后吸除部(bu)分培養液(ye)，懸浮菌(jun)體后將(jiang)其(qi)涂(tu)布于一個(ge)平板(ban)(ban)中(zhong)。（涂(tu)布剩(sheng)余的(de)(de)菌(jun)液(ye)可(ke)(ke)(ke)置于4℃保存，如果次日的(de)(de)轉(zhuan)(zhuan)化(hua)菌(jun)落數(shu)過(guo)少可(ke)(ke)(ke)以將(jiang)剩(sheng)下的(de)(de)菌(jun)液(ye)再(zai)涂(tu)布新的(de)(de)培養板(ban)(ban)）
注意事項：
1. 感受態(tai)細(xi)(xi)胞(bao)應保存在-70℃，不可(ke)多次(ci)凍(dong)融和(he)放置時間(jian)過長，以避免感受態(tai)細(xi)(xi)胞(bao)的(de)轉(zhuan)化效率(lv)。
2. 進行轉化操作時(shi)，應根(gen)據(ju)相應溫度(du)及(ji)無(wu)菌條件(jian)的要求進行。
3. 為(wei)防止(zhi)轉化實驗不(bu)成功，可以保(bao)留部(bu)分(fen)連接反應液，以重新轉化，將損失降到(dao)最低。