Western一抗二抗去除液（中性，劇烈型）
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貨號
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名稱
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規格
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WS1080-100ml
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Western一(yi)抗二抗去(qu)除(chu)液（弱(ruo)堿性，劇烈型）
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100 ml
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● 產(chan)品組成：
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貨(huo)號
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名稱
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規格
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貯(zhu)存(cun)
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WS1080-01
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Western一抗(kang)二(er)抗(kang)去除液（中性(xing)，劇(ju)烈(lie)型）
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100 ml
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RT
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WS1080-02
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增強劑
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1 ml
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4℃（配(pei)成溶液后-20℃貯存(cun)）
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說明書
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一份
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● 產品簡介(jie)：
Western抗體去(qu)除液(ye)（中性，劇烈型）(Western Antibody Stripping Buffer，neutral，harsh type)可(ke)以高效去(qu)除印跡膜(mo)(mo)上的(de)(de)一抗和(he)二抗，而吸附在膜(mo)(mo)上的(de)(de)抗原基本(ben)不受影響，用(yong)(yong)(yong)于Western中轉移了(le)蛋(dan)(dan)白的(de)(de)膜(mo)(mo)的(de)(de)重(zhong)復(fu)利用(yong)(yong)(yong)，可(ke)以轉一次(ci)膜(mo)(mo)，做多次(ci)Western印跡實驗，通常可(ke)以重(zhong)復(fu)利用(yong)(yong)(yong)膜(mo)(mo)2-3次(ci)。使用(yong)(yong)(yong)本(ben)試劑只需大(da)約(yue)20-30分(fen)鐘即可(ke)實現蛋(dan)(dan)白膜(mo)(mo)的(de)(de)重(zhong)復(fu)使用(yong)(yong)(yong)，然后可(ke)以進行Western的(de)(de)后續操作。以每次(ci)使用(yong)(yong)(yong)5 ml Western抗體清除液(ye)計算，本(ben)產(chan)品可(ke)以使用(yong)(yong)(yong)20次(ci)。
該產品具有以(yi)下(xia)幾個優點：
1.可(ke)用于昂貴(gui)或珍稀樣本的多次雜交；
2.有利于用(yong)不(bu)(bu)同抗體分(fen)析單次印跡上(shang)的不(bu)(bu)同蛋(dan)白(bai)，比如不(bu)(bu)同亞型的抗體；
3.有利于對異常(chang)結(jie)果進行重新分(fen)析或確認；
4.有利于糾正孵錯的抗體；
5.節約(yue)(yue)試劑(ji)成本，并節約(yue)(yue)時間(jian)。
各種去除液的選擇請點擊Western一抗二抗去除液選擇指南。
● 貯存：
按照標簽溫度(du)貯存(cun)，有效期一年；常溫運輸。
● 用前(qian)必(bi)讀：
1. 理想的(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)去(qu)除液應該(gai)是(shi)洗(xi)(xi)(xi)脫(tuo)(tuo)(tuo)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)的(de)(de)同時，不(bu)洗(xi)(xi)(xi)脫(tuo)(tuo)(tuo)膜上(shang)結(jie)(jie)合(he)的(de)(de)蛋(dan)白(bai)或者不(bu)改(gai)變抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)的(de)(de)結(jie)(jie)合(he)性質，但是(shi)目前沒有(you)(you)一種去(qu)除液可(ke)以做到只洗(xi)(xi)(xi)脫(tuo)(tuo)(tuo)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)，而完全不(bu)洗(xi)(xi)(xi)脫(tuo)(tuo)(tuo)膜上(shang)結(jie)(jie)合(he)的(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)；也(ye)沒有(you)(you)一種去(qu)除液可(ke)以適用于所有(you)(you)不(bu)同親(qin)和(he)度的(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)復合(he)物。去(qu)除液洗(xi)(xi)(xi)脫(tuo)(tuo)(tuo)能(neng)力(li)太(tai)(tai)(tai)強，抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)也(ye)容易被洗(xi)(xi)(xi)脫(tuo)(tuo)(tuo)；太(tai)(tai)(tai)弱(ruo)，則抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)殘留(liu)太(tai)(tai)(tai)高。因(yin)此，從(cong)免疫印跡(ji)膜上(shang)去(qu)除抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)的(de)(de)方案(an)僅能(neng)用于定(ding)性用途，因(yin)為在每個抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)清(qing)除循環中，或多或少都將洗(xi)(xi)(xi)去(qu)少量膜上(shang)的(de)(de)蛋(dan)白(bai)。
2. PVDF膜(mo)比硝酸纖維(wei)素膜(mo)（NC膜(mo)）更堅韌，因(yin)此優先推薦使(shi)用PVDF膜(mo)用于涉(she)及(ji)抗體剝(bo)離的(de)實驗(yan)。
3. 從SDS-PAGE凝膠轉(zhuan)印完(wan)成(cheng)后立即干(gan)燥(zao)PVDF膜(mo)或NC膜(mo)，可改(gai)善蛋白質(zhi)與(yu)膜(mo)的(de)(de)結(jie)合，特(te)別推(tui)薦用于(yu)涉及多次抗體(ti)剝(bo)離的(de)(de)實驗。在第一輪抗體(ti)檢測之前，必須(xu)使(shi)用甲(jia)醇將干(gan)燥(zao)的(de)(de)PVDF膜(mo)潤(run)濕或用1×TBST將干(gan)燥(zao)的(de)(de)NC膜(mo)潤(run)濕。已經結合(he)有抗(kang)體的膜，決不能使得膜干燥(zao)，否則抗(kang)體分子(zi)將與膜結合(he)緊密，很難剝(bo)離。因此(ci)，在做完一輪ECL發光檢(jian)測實驗(yan)后(hou)，需要用清除液清除掉膜上的(de)抗體，推(tui)薦將膜浸泡于(yu)1×TBS（非1×TBST）中4度保存(cun)。
4. 檢(jian)測時，優先檢(jian)測低豐度(du)抗原：先孵(fu)育條(tiao)帶(dai)較(jiao)弱（表達較(jiao)低）的蛋(dan)(dan)白(bai)，再孵(fu)育條(tiao)帶(dai)明顯（表達較(jiao)高）的蛋(dan)(dan)白(bai)，最后再孵(fu)育內參。
5. 如條件允許，下一(yi)輪的(de)抗體雜交實驗(yan)選擇種(zhong)屬(shu)(shu)來源不同(tong)的(de)一(yi)抗（對應不同(tong)種(zhong)屬(shu)(shu)的(de)二抗），減少(shao)檢測的(de)交叉反應。
6. 該(gai)清(qing)除液適(shi)用于(yu)ECL發光(guang)檢測的膜上抗(kang)體清(qing)除，不(bu)適(shi)合于(yu)膜上直接(jie)顯色(se)（DAB，BCIP/NBT等），不(bu)適(shi)合熒光(guang)檢測。
● 使用說明：
1. 在完成Western化(hua)學發光檢測后(hou)，NC膜或PVDF膜用適量蒸餾水中(zhong)震蕩漂(piao)洗5分鐘(zhong)；重(zhong)復(fu)漂(piao)洗2次；1×TBST漂(piao)洗一(yi)次。
2. 棄(qi)1×TBST，加入適量的(de)Western一抗(kang)(kang)二抗(kang)(kang)去除液(ye)和1/100體(ti)積的(de)增強劑（例如使用5 ml去除液(ye)，加50 μl 增強劑）；在搖床上(shang)震(zhen)蕩漂洗20-30分鐘（轉速70 -80
rpm）。
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操(cao)作溫度(du)
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震蕩(dang)清(qing)除時間
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備注
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18℃
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40-60分鐘(zhong)
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冬天實驗室(shi)氣溫低時
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25℃
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約30分鐘
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常規樣品(pin)操作
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50℃
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15-20分鐘
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膜(mo)上蛋白含量(liang)高(gao)的(de)樣品或清除與膜(mo)親(qin)和力高(gao)的(de)抗體
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3. 棄去除(chu)(chu)液(ye)(ye)，加(jia)入足量蒸餾(liu)水，在(zai)搖床上漂洗2次，每次5分鐘，把(ba)去除(chu)(chu)液(ye)(ye)徹底(di)漂洗干凈。
注：殘余的(de)去除液會影響后續抗(kang)原抗(kang)體(ti)的(de)的(de)結(jie)合。
4. 可選(xuan)步(bu)驟(zou)：漂洗(xi)后(hou)的轉印(yin)膜(mo)孵育ECL發光液，檢測二抗的清(qing)除(chu)效率。曝光5分鐘，膜(mo)上(shang)看不(bu)到(dao)發光條帶表明二抗清(qing)除(chu)得比較干凈(jing)。如果膜(mo)上(shang)能看到(dao)條帶，重(zhong)復步(bu)驟(zou)2-3。
5．繼續(xu)進行Western的后續(xu)操作（封閉-抗體孵育-發光檢測）。
; 注：建議每(mei)次膜(mo)剝離后都要(yao)進行重新(xin)封(feng)閉，以(yi)降低(di)背景。
● 實驗(yan)示例：
Western一(yi)抗(kang)二抗(kang)去除液檢測效果圖
樣品：293細胞，Ball-1細胞總蛋白(bai)(TP)，胞漿蛋白(bai)(C-Pr)，核(he)蛋白(bai)(N-Pr)
電泳條件：12% SDS-PAGE（貨號:RTD6132） 200
V 1×TGS 53 min
轉(zhuan)膜條件：NC膜，1×RealBlot
恒流400 mA 35 min
封閉：無蛋白快速封閉液
RT 60 min
一抗(kang)：TBP鼠單抗(kang)
1:5000 ; RT 60min孵(fu)育(yu)(圖(tu)一)
GAPDH兔多抗
1:2000 RT 60 min孵育(圖三)
二抗：羊(yang)抗鼠IgG-HRP 1:5000 RT 60min(圖一)
; 羊(yang)抗兔IgG-HRP
1:5000 RT 60 min (圖三(san))
抗體去除(chu)：NC膜蒸餾水(shui)漂(piao)洗3次(ci)，加入5 ml抗體去除(chu)液和50 μl
增強劑，常溫，搖床 30 min
ECL曝光5分鐘（圖二），ECL曝光2秒（圖一，圖三）