氨芐青霉素溶液(100 mg/ml)
● 產品包裝：
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產(chan)品編號
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產品名稱
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產品包裝
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說明書
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AA0120S-02
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氨芐青霉素溶液(100mg/ml)
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10×1 ml
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1份
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● 產品簡介：
氨芐(xia)青(qing)(qing)(qing)(qing)霉素(su)(Ampicillin, Amp)又稱(cheng)安比西林、氨芐(xia)西林，是(shi)一種β-內酰胺類抗(kang)生(sheng)素(su),干擾肽聚糖(tang)的交(jiao)聯從(cong)而抑制細菌細胞壁的合(he)成。氨芐(xia)青(qing)(qing)(qing)(qing)霉素(su)時常被用(yong)于(yu)分子生(sheng)物(wu)學實驗(yan)研究中(zhong)，如用(yong)于(yu)配制含(han)氨芐(xia)青(qing)(qing)(qing)(qing)霉素(su)的LB培養基(ji)或LB平板等。氨芐(xia)青(qing)(qing)(qing)(qing)霉素(su)溶液已(yi)經(jing)0.22
μm過(guo)濾除菌，可以直接添(tian)加到培養基(ji)中(zhong)。一般推(tui)薦工作濃(nong)度為50～100
μg/ml。
本(ben)氨芐青霉素溶(rong)(rong)液已(yi)經優化溶(rong)(rong)解液，可以(yi)保(bao)持溶(rong)(rong)液在-20℃下基本(ben)不結冰(bing)，方便使(shi)用的同時(shi)降低了(le)反復(fu)凍融對抗性的影響。
● 貯存、效期及運輸：
-20℃保存；有效(xiao)期(qi)6個月(yue)；濕冰運(yun)輸。
● 使用方法：
1. 取(qu)出-20℃保存的(de)氨(an)芐青霉素溶(rong)液，常溫徹(che)底溶(rong)化，完全混勻。
注：溶液(ye)在-20℃下基本為流動性溶液(ye)，如有冰晶形(xing)成，常溫徹底溶化后使用。
2.一般(ban)Amp在LB中終濃(nong)度為50～100
μg/ml。可以(yi)大體(ti)按(an)照(zhao)1/1000 LB體(ti)積加入100 mg/ml Amp溶液，如100 ml LB中加入50-100 μl Amp 100 mg/ml。
注：氨(an)芐(xia)(xia)青(qing)霉素對高溫(wen)敏感，要(yao)等待LB瓊脂溫(wen)度低于(yu)55℃后(hou)再加入氨(an)芐(xia)(xia)溶液。
3. 在所有的細菌篩選抗(kang)生素(su)(su)中，氨芐青霉素(su)(su)的穩定(ding)(ding)性(xing)最為不佳(jia)，參照(zhao)下表確(que)定(ding)(ding)使用(yong)的效期：
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類型
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貯存溫(wen)度
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抗性維(wei)持時間
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備注(zhu)
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LB氨芐(xia)平(ping)板(ban)
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4-8℃
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＜2周(zhou)
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平板要Parafilm封口，避免平板水分蒸發干裂
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氨芐溶液(ye)（100mg/ml）
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-20℃
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6個(ge)月
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盡量降(jiang)低溶液反復(fu)凍融(rong)次數
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氨芐溶液（100mg/ml）
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4-8℃
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＜2周
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盡量避免(mian)溶(rong)液貯存在4-8℃
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LB液體(ti)搖菌
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37℃培養(yang)
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＜2天
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搖菌時，OD值控制(zhi)在3以內
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● 注意事項：
1. 衛星(xing)(xing)菌(jun)(jun)落(luo)：LB氨(an)(an)芐(xia)瓊脂平(ping)板培(pei)養(yang)時(shi)(shi)(shi)間過長(chang)(chang)時(shi)(shi)(shi)，會(hui)(hui)(hui)發(fa)現(xian)一個大(da)菌(jun)(jun)落(luo)的(de)(de)周圍(wei)會(hui)(hui)(hui)出現(xian)一些小(xiao)的(de)(de)菌(jun)(jun)落(luo)，這(zhe)些小(xiao)的(de)(de)菌(jun)(jun)落(luo)稱為衛星(xing)(xing)菌(jun)(jun)落(luo)（satellite
colony）。原因：氨(an)(an)芐(xia)青霉素(su)可以被β-內(nei)(nei)酰(xian)胺(an)(an)酶（β-lactamase）水解。平(ping)板上的(de)(de)細菌(jun)(jun)產生的(de)(de)β-內(nei)(nei)酰(xian)胺(an)(an)酶分泌到細胞(bao)外，隨著細菌(jun)(jun)的(de)(de)生長(chang)(chang)，培(pei)養(yang)基中的(de)(de)β-內(nei)(nei)酰(xian)胺(an)(an)酶會(hui)(hui)(hui)不斷增(zeng)加，這(zhe)時(shi)(shi)(shi)培(pei)養(yang)基內(nei)(nei)氨(an)(an)芐(xia)青霉素(su)會(hui)(hui)(hui)被降解，因此沒(mei)有(you)氨(an)(an)芐(xia)抗性質粒的(de)(de)小(xiao)菌(jun)(jun)群則環繞大(da)菌(jun)(jun)落(luo)生長(chang)(chang)，產生衛星(xing)(xing)菌(jun)(jun)落(luo)。衛星(xing)(xing)菌(jun)(jun)落(luo)沒(mei)有(you)氨(an)(an)芐(xia)抗性，挑取單(dan)菌(jun)(jun)落(luo)時(shi)(shi)(shi)，不要挑取衛星(xing)(xing)菌(jun)(jun)落(luo)培(pei)養(yang)。
2. 質(zhi)粒丟(diu)失：氨芐抗(kang)性(xing)(xing)細(xi)(xi)菌在(zai)傳(chuan)代的(de)(de)(de)時候，會出現(xian)質(zhi)粒丟(diu)失，傳(chuan)代次數越多，質(zhi)粒丟(diu)失的(de)(de)(de)可(ke)能性(xing)(xing)越大。對(dui)于(yu)其他抗(kang)生素(su)如氯霉素(su)，細(xi)(xi)菌如果丟(diu)失了部分(fen)帶抗(kang)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)質(zhi)粒，該菌在(zai)含有氯霉素(su)的(de)(de)(de)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)是(shi)(shi)不會生長的(de)(de)(de)。但是(shi)(shi)對(dui)于(yu)氨芐則(ze)不然，在(zai)液體(ti)(ti)培(pei)(pei)養(yang)液中(zhong)，培(pei)(pei)養(yang)時間過長的(de)(de)(de)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)氨芐的(de)(de)(de)濃度(du)會降低，丟(diu)失了一部分(fen)質(zhi)粒的(de)(de)(de)細(xi)(xi)菌也(ye)可(ke)以在(zai)其中(zhong)生長。因(yin)此對(dui)于(yu)使用氨芐作為抗(kang)性(xing)(xing)標記的(de)(de)(de)克隆，每隔一段時間需要檢查細(xi)(xi)菌質(zhi)粒丟(diu)失情況(kuang)。比較直(zhi)觀(guan)的(de)(de)(de)辦(ban)法就是(shi)(shi)通過SDS-PAGE，如果發現(xian)蛋白質(zhi)的(de)(de)(de)表達水(shui)平降低了，很(hen)大可(ke)能是(shi)(shi)因(yin)為質(zhi)粒丟(diu)失了，此時需要重新轉(zhuan)化重組載體(ti)(ti)。
3. 不要使用配(pei)制時間(jian)過(guo)長(chang)或(huo)超過(guo)效期(qi)的氨(an)芐溶液。氨(an)芐存(cun)儲時間(jian)過(guo)長(chang)或(huo)者(zhe)保存(cun)不當，很有可能發(fa)生(sheng)降解。
4. 液體培養建議：在液體培養中，不要讓細菌長到過飽和，在LB培養基中，OD600絕對不能超過(guo)3。如果是擴大(da)培(pei)養(yang)，可以先把初始(shi)培(pei)養(yang)液(ye)內細菌沉淀，然后利用新鮮(xian)的培(pei)養(yang)液(ye)重懸，再進行下一步的培(pei)養(yang)，這樣可以大(da)大(da)減少β-內酰(xian)胺酶在液(ye)體中的含量。