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DAPI染(ran)色液（DAPI Stain Solution,10 μg/ml）

●  產品組成：

● 產品(pin)簡介：

DAPI染(ran)色液(DAPI Staining Solution)是適用于常見細胞和組(zu)織細胞核染(ran)色的染(ran)色液。 DAPI即 2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride，也稱DAPI dihydrochloride，分子式為(wei)C₁₆H₁₅N₅? 2HCl ，MW為350.25，CAS Number 28718-90-3。

DAPI是(shi)一種可(ke)以穿透細(xi)胞膜的藍色(se)熒(ying)光(guang)(guang)染(ran)料，它可(ke)以用于活細(xi)胞和(he)固定細(xi)胞的染(ran)色(se)。和(he)EB(ethidium bromide)相(xiang)比，對雙鏈(lian)DNA的染(ran)色(se)靈(ling)敏度(du)要(yao)高很多倍，DAPI和(he)雙鏈(lian)DNA結(jie)合(he)后可(ke)以產生比DAPI自身強20多倍的熒(ying)光(guang)(guang)。 DAPI染(ran)(ran)色(se)常用(yong)于細(xi)胞(bao)(bao)凋(diao)亡檢測(ce)，染(ran)(ran)色(se)后用(yong)熒光顯(xian)微(wei)鏡觀察或流式(shi)細(xi)胞(bao)(bao)儀檢測(ce)。DAPI也常用(yong)于普(pu)通的(de)(de)細(xi)胞(bao)(bao)核染(ran)(ran)色(se)以及某些特定情(qing)況下的(de)(de)雙鏈DNA染(ran)(ran)色(se)。 DAPI的最(zui)(zui)大(da)(da)激(ji)(ji)發波(bo)長(chang)為(wei)340nm，最(zui)(zui)大(da)(da)發射波(bo)長(chang)為(wei)488nm；DAPI和雙鏈(lian)DNA結合后(hou)，最(zui)(zui)大(da)(da)激(ji)(ji)發波(bo)長(chang)為(wei)364nm，最(zui)(zui)大(da)(da)發射波(bo)長(chang)為(wei)454nm。 DAPI的(de)發射(she)光(guang)(guang)為藍色，且DAPI和綠(lv)色熒光(guang)(guang)蛋白GFP或Texas Red染劑(紅(hong)色熒光(guang)(guang)染劑)的(de)發射(she)波(bo)長(chang)僅有少(shao)部分重疊(die)，可以利(li)用這項(xiang)特性在(zai)單(dan)一的(de)樣品上進行多重熒光(guang)(guang)染色。

本DAPI染色(se)液為即用型，濃度為10μg/ml，可(ke)以直接用于固定細胞(bao)或組織的細胞(bao)核染色(se)。

● 貯存：

-20℃避(bi)光保存(cun)，一(yi)年有效。

● 操作步驟：

一 懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)染色

1.1 500 g（2400 rpm，下同）離(li)心收集細胞樣品于(yu)1.5 ml離(li)心管內，加入0.5 ml固(gu)定液（貨號：KA5010，卡(ka)諾(nuo)固(gu)定液），緩(huan)(huan)緩(huan)(huan)懸起細胞，常溫(wen)固(gu)定10分鐘(zhong)或更長時(shi)間(可4℃過(guo)夜(ye))。

1.2離心去盡(jin)固定液，用PBS洗(xi)兩遍，每次3分(fen)鐘，洗(xi)滌期間手動(dong)晃(huang)動(dong)數次。

1.3 細胞(bao)沉淀中(zhong)加入200 μl DAPI染(ran)色液，重懸細胞(bao)，37℃避(bi)光染(ran)色10-15分鐘，手動(dong)晃動(dong)數(shu)次。

1.4 離心收集(ji)沉淀，重懸于100 μl 1×PBS中(zhong)。

1.5 取5 μl抗熒光淬滅封片液（貨(huo)號：AM0510）于載玻片上，加入等(deng)體積步(bu)驟(zou)1.4染色(se)后(hou)細(xi)胞重懸液，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免(mian)氣泡(pao)。

1.6 熒(ying)光顯微鏡(jing)下紫外(wai)激發(fa)觀(guan)察可檢測到(dao)呈藍色的細胞核。

注：熒光染料都存在(zai)淬滅的(de)問題，建(jian)議染色后盡快檢測(ce)。

二 貼壁細胞染色

2.1 取潔凈蓋玻片(pian)在70%乙醇中浸泡5分鐘或更長時間，無(wu)菌(jun)超凈臺內(nei)吹干或用無(wu)菌(jun)的PBS洗滌三遍(bian)，再用細(xi)胞培養(yang)液洗滌一遍(bian)。將蓋玻片(pian)置(zhi)于六孔板內(nei)，種(zhong)入細(xi)胞培養(yang)過(guo)夜，生(sheng)長至50%-80%滿度。

2.2刺激細(xi)胞發生凋亡后，吸盡培(pei)養液，加入(ru)0.5 ml固定液，固定10分鐘或更長(chang)時(shi)間(可4℃過夜(ye))。

2.3去盡固定液，用PBS洗(xi)兩(liang)遍，每次3分鐘，吸盡液體(ti)。洗(xi)滌(di)時宜用搖床或手(shou)動晃動。

2.4加(jia)入0.5 ml DAPI染(ran)(ran)色液，37℃避(bi)光染(ran)(ran)色10-15分鐘，手動(dong)晃動(dong)數(shu)次。

2.5去盡染色液(ye)，用PBS洗兩遍，每次3分(fen)鐘，吸(xi)盡液(ye)體。洗滌(di)時宜用搖(yao)床(chuang)或手動晃動。

2.6滴一滴抗(kang)熒光淬滅封片(pian)液（貨號：AM0510）于(yu)載玻片(pian)上(shang)，蓋上(shang)貼有細胞的(de)蓋玻片(pian)，讓(rang)細胞接觸(chu)封片(pian)液，盡量避免氣泡。

2.7熒(ying)光顯微鏡下紫外激(ji)發觀察可檢測到呈藍色(se)的(de)細(xi)胞核(he)。

注：熒光染料都(dou)存在淬(cui)滅的問題，建議染色后(hou)盡(jin)快檢測

實驗示例：

操作流程：使用不同濃度星飽菌素（Staurosporine，STS）凋亡處理Jurkat細胞。調整細胞密度為1×10⁶/ml，每孔2 ml接種于六孔板中；加入終濃度為0，0.1，0.5，1 μM STS，37℃ 5%CO₂培養3小時；500 g 3 min收集細(xi)胞(bao)；細(xi)胞(bao)沉淀(dian)(dian)中加入1 ml固定(ding)液，常溫(wen)固定(ding)10 min；1×PBS漂洗兩次；細(xi)胞(bao)沉淀(dian)(dian)中加入0.5 ml DAPI染(ran)(ran)色(se)(se)液，37℃避(bi)光(guang)染(ran)(ran)色(se)(se)10 min；離心后(hou)細(xi)胞(bao)沉淀(dian)(dian)重(zhong)懸于(yu)100 μl 1×PBS中；取(qu)5 μl細(xi)胞(bao)懸液滴于(yu)載玻(bo)片(pian)上，加5 μl 抗(kang)熒光(guang)淬滅劑，封片(pian)觀(guan)察。

使用DAPI染色一發表部分文章列表

1. [2022 IF=4.9] The Transcription Factor MiMYB8 Suppresses Peel Coloration in Postharvest ‘Guifei’ Mango in Response to High Concentration of Exogenous Ethylene by Negatively Modulating MiPAL1.

Author: Muhammad Muzammal Aslam, Mingrui Kou , Yaqi Dou, Shicheng Zou, Rui Li, Wen Li, Yuanzhi Shao.

Journal: International Journal of Molecular Sciences 2024, 25, 4841.

Institution： Sanya Nanfan Research Institute, Hainan University

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