Hochest 33342活細胞染色液(ye)（100×）
Hoechst 33342 Staining
Solution for Live Cells(100×)
● 產品組成：
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貨號
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名稱
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規格
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HE1014S
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Hochest
33342活細胞染色液（100×）
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0.5
ml
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說明書
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一份
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● 產品簡(jian)介(jie)：
Hoechst 33342，也稱bisBenzimide
H 33342 或HOE 33342，分子式為C27H28N6O·3HCl
，分子量MW561.93，CAS:
23491-52-3，是一種可以穿(chuan)透(tou)細(xi)胞膜(mo)的藍色熒(ying)(ying)光(guang)染(ran)(ran)料，對細(xi)胞的毒性(xing)較低。Hoechst
33342 專一性(xing)地與雙鏈DNA結合(he)(he)（優先結合(he)(he)AT），常用于細(xi)胞核染(ran)(ran)色。染(ran)(ran)色后可以用熒(ying)(ying)光(guang)顯微(wei)鏡觀(guan)察或流式細(xi)胞儀檢(jian)測。Hoechst 33342 的最(zui)(zui)大激發波(bo)長為(wei)(wei)346 nm（紫外激發），最(zui)(zui)大發射(she)波(bo)長為(wei)(wei)460nm（藍色熒(ying)(ying)光(guang)）；Hoechst 33342 和雙鏈DNA 結合(he)(he)后，最(zui)(zui)大激發波(bo)長為(wei)(wei)350nm，最(zui)(zui)大發射(she)波(bo)長為(wei)(wei)461nm。另外，由于Hoechst 33342專一性(xing)結合(he)(he)DNA，不與RNA結合(he)(he)，樣品無需使(shi)用RNase處理。與DAPI相比(bi)，Hoechst
33342具有更(geng)好的膜(mo)通透(tou)性(xing)，更(geng)適合(he)(he)于活細(xi)胞的染(ran)(ran)色。
Hoechst 33342和Hoechst
33258相比，Hoechst 33342對細(xi)胞(bao)(bao)的毒(du)性作用(yong)更小一些，33258穿(chuan)透能力較33342弱，染活細(xi)胞(bao)(bao)時容易(yi)被"泵出"，也就是拒染。所以一般來說(shuo)Hoechst 33258用(yong)于細(xi)胞(bao)(bao)固定后再染色，而(er)Hoechst33342則可以對活細(xi)胞(bao)(bao)直(zhi)接進行染色。
本染色(se)液為100×濃度(du)，使用終濃度(du)為1×，可(ke)(ke)直接用于活細胞或(huo)組織的細胞核染色(se)，也可(ke)(ke)稀(xi)釋后用于固定細胞或(huo)組織的細胞核染色(se)。
● 貯存：
-20℃避光保存，一年有效。
● 操作步驟：
一(yi). 活細(xi)胞染色：
1.1 貼(tie)壁細胞：
1.1.1在培(pei)(pei)養(yang)液中均勻(yun)滴加適量的(de)Hoechst 33342活細(xi)胞(bao)染(ran)色液(100×)至(zhi)終濃度為1×，輕(qing)柔混勻(yun)。例(li)如對于十二孔(kong)板中培(pei)(pei)養(yang)的(de)貼壁細(xi)胞(bao)，每孔(kong)有1 ml的(de)培(pei)(pei)養(yang)液，每孔(kong)需要加入(ru)10 μl Hoechst 33342活細(xi)胞(bao)染(ran)色液(100×)。培(pei)(pei)養(yang)液中的(de)血(xue)清、酚紅等(deng)都不會對染(ran)色產生(sheng)干擾。
1.1.2在適宜(yi)于細胞培養(yang)的(de)溫(wen)度孵育(yu)10分(fen)鐘(zhong)，可以直接(jie)在熒光顯微鏡下觀(guan)察(cha)。如果(guo)考(kao)慮到(dao)培養(yang)液對觀(guan)察(cha)效果(guo)的(de)影響，進(jin)行以下操作步(bu)驟。
1.1.3吸除含染料的培養液，用(yong)PBS洗滌2-3次即可在熒(ying)光顯微鏡下(xia)觀察。
注：為避免凋亡細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)隨培養液(ye)或(huo)PBS被吸除，在吸除液(ye)體前(qian)，對于用多孔(kong)板中培養的(de)(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，最好用多孔(kong)板離(li)(li)心機離(li)(li)心一(yi)下以充分沉淀那些已經漂浮起來的(de)(de)凋亡細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)。細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)發(fa)生凋亡時，會看到(dao)凋亡細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)核呈致密濃染，或(huo)呈碎塊狀致密濃染。
1.2. 懸浮細胞：
1.2.1 在懸浮細(xi)(xi)胞培(pei)養(yang)液(ye)中加入適(shi)量(liang)的Hoechst 33342活(huo)細(xi)(xi)胞染色液(ye)(100×)至終濃(nong)度為(wei)1×，輕(qing)柔混勻。例如對于12孔(kong)(kong)板中培養(yang)(yang)的(de)貼壁細(xi)胞(bao)，每孔(kong)(kong)有1 ml的(de)培養(yang)(yang)液，每孔(kong)(kong)需要(yao)加入10 μl Hoechst 33342活細(xi)胞(bao)染色液(100×)。培養(yang)(yang)液中的(de)血(xue)清、酚紅等都不(bu)會對染色產生(sheng)干擾。
1.2.2 在適宜于細胞培養(yang)(yang)的溫度孵育10分鐘(zhong)，可以直接在熒(ying)光顯微(wei)鏡下觀察。如果(guo)考慮(lv)到培養(yang)(yang)液對觀察效果(guo)的影響(xiang)，進行以下操(cao)作步驟。
1.2.3將細胞轉(zhuan)移(yi)到1.5 ml離(li)(li)心管中，500 g 離(li)(li)心5分鐘收集細胞。細胞沉淀用PBS洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。
1.2.4細(xi)胞(bao)沉淀中加入100-200 μl PBS，重懸沉淀。
1.2.6取5
μl抗熒光淬滅封片(pian)(pian)液(ye)于載(zai)玻(bo)片(pian)(pian)上(shang)，加入等體積步(bu)驟(zou)1.2.4染色后細胞(bao)重懸液(ye)，蓋上(shang)一潔(jie)凈的(de)蓋玻(bo)片(pian)(pian)，盡量(liang)避(bi)免(mian)氣泡。
1.2.6 熒光(guang)顯微鏡使用紫(zi)外激(ji)發(fa)，可檢(jian)測到呈(cheng)藍色的細(xi)胞核。激(ji)發(fa)波(bo)長350nm左右，發(fa)射波(bo)長460nm左右。
注：熒光染料都存在(zai)淬滅的問題，建議染色后盡快檢測。
二(er). 實驗示(shi)例(li):
染色程序：
Jurkat細(xi)胞密度調整(zheng)到(dao)1×106/ml，六孔板(ban)接種2 ml，加入(ru)10 μl STS（星孢菌素）至(zhi)終濃(nong)度1 μM
37度培養(yang)3小時(shi)；加入20 μl Hochest 33342活細胞(bao)染(ran)色(se)液（100×），RT避(bi)光(guang)染(ran)色(se)15分鐘，熒光(guang)顯微鏡直接(jie)觀察。左圖為正常細胞(bao)（10×），右圖為STS誘(you)導凋(diao)亡的細胞(bao)（10×）。
染(ran)色(se)程序：
左為(wei)明(ming)場 20×相(xiang)差；右為(wei)紫外激(ji)發
293細胞消(xiao)化后調整密度為1×105/ml；12孔板，每孔接種1 ml，37度培養30小時(shi)；加入10 μl Hochest 33342活細胞染(ran)色液（100×）；37度培養10分鐘(zhong)，直接觀察。