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碘(dian)化(hua)丙啶染(ran)色液（Propidium Iodide Staining Solution）

●  產品(pin)組成(cheng)：

● 產品簡介(jie)：

碘(dian)化(hua)丙(bing)啶(propidium iodide，PI)，分子式C₂₇H₃₄I₂N₄ ，MW 668.39，CAS：25535-16-4。碘化丙啶(ding)不(bu)能穿過完整(zheng)的活(huo)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)膜(mo)，即正常(chang)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)和(he)(he)凋(diao)亡細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)在不(bu)固定的情況下對(dui)PI拒(ju)染，而壞死細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)由于失去膜(mo)的完整(zheng)性，PI可進入細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)內(nei)與DNA結(jie)合，根據此特點(dian)，使(shi)用PI染色可鑒別死細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)。如果使(shi)用PI對(dui)活(huo)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)染色必須(xu)在染色前進行(xing)固定，以增加細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)膜(mo)對(dui)染料的通透(tou)性。PI經常(chang)被用來(lai)與 Calcein-AM 或(huo)(huo)者 FDA等熒光探(tan)針(zhen)一起使(shi)用，能同時對(dui)活(huo)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)和(he)(he)死細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)染色。 PI-DNA復合物的激發(fa)和(he)(he)發(fa)射波(bo)長分(fen)別為 535 nm 和(he)(he)615 nm。常(chang)用于流式(shi)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)儀分(fen)析和(he)(he)顯(xian)微鏡觀(guan)察，檢(jian)測細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)凋(diao)亡(apoptosis)或(huo)(huo)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)壞死(necrosis)。

本產品為(wei) PI 水溶(rong)液，濃度為(wei) 1 mg/ml（1.5 mM）。使用時根據實驗不同直接將(jiang)本產品用相應(ying)溶(rong)液稀(xi)釋(shi)到工作濃度。

● 貯(zhu)存：

-20℃保存，一年有效。

● 操作步驟：

一 懸浮細胞染(ran)色

1.1 500 g（2400 rpm，下同）離心(xin)收集細(xi)胞樣品于1.5 ml離心(xin)管內，加(jia)入0.5 ml固定(ding)液（貨號：KA5010，卡諾固定(ding)液），緩緩懸起細(xi)胞，常(chang)溫固定(ding)10分鐘或更(geng)長時間(可4℃過夜)。

1.2離心去盡(jin)固(gu)定(ding)液，用PBS洗兩遍，每(mei)次3分鐘，洗滌期間手動晃動數(shu)次。

1.3 細胞沉淀(dian)中(zhong)加入(ru)200μl 1×PBS重懸，加入(ru)10 μl 碘化丙啶染色(se)液，37℃避光染色(se)10-15分(fen)鐘，手動晃動數次。

1.4 離(li)心收(shou)集沉淀(dian)，重(zhong)懸于100 μl 1×PBS中。

1.5 取5 μl抗熒光淬滅封片液（貨號：AM0510）于(yu)載玻片上，加(jia)入等體積步驟1.4染(ran)色后細(xi)胞重懸(xuan)液，蓋(gai)上一潔凈的蓋(gai)玻片，盡量避免氣泡(pao)。

1.6 熒(ying)光顯微鏡下觀察可(ke)檢測到(dao)呈紅(hong)色(se)的細胞核。激發波(bo)(bo)長為535 nm，發射波(bo)(bo)長為615 nm。

注：熒光染(ran)料都(dou)存在淬滅的問題，建議染(ran)色后盡快檢(jian)測(ce)。

二(er) 貼(tie)壁細胞染色

2.1 取潔凈(jing)蓋(gai)玻片在70%乙醇中浸泡5分鐘(zhong)或更長時間(jian)，無(wu)(wu)菌超凈(jing)臺內(nei)吹干或用無(wu)(wu)菌的(de)PBS洗滌(di)三遍(bian)(bian)，再用細(xi)(xi)胞培(pei)養液洗滌(di)一(yi)遍(bian)(bian)。將蓋(gai)玻片置于(yu)六(liu)孔板(ban)內(nei)，種入(ru)細(xi)(xi)胞培(pei)養過夜，生長至50%-80%滿度。

2.2刺激(ji)細胞發生凋亡(wang)后(hou)，吸盡培養液，加入0.5 ml固(gu)定液，固(gu)定10分鐘或更長時間(可4℃過夜)。

2.3去(qu)盡(jin)固定液，用(yong)PBS洗(xi)兩遍，每(mei)次(ci)3分鐘(zhong)，吸盡(jin)液體。洗(xi)滌(di)時宜用(yong)搖床或手動(dong)晃動(dong)。

2.4加入0.5 ml PBS，加入25 μl碘化丙啶染色(se)液，37℃避光染色(se)10-15分鐘，手動(dong)(dong)晃動(dong)(dong)數次。

2.5去(qu)盡(jin)染色液，用PBS洗兩(liang)遍，每次3分鐘，吸盡(jin)液體。洗滌(di)時宜(yi)用搖床或手動晃動。

2.6滴一滴抗熒光淬滅封片液(ye)（貨號(hao)：AM0510）于載玻(bo)片上，蓋上貼(tie)有細胞(bao)(bao)的蓋玻(bo)片，讓細胞(bao)(bao)接觸封片液(ye)，盡量避免氣泡。

2.7熒光顯微鏡下(xia)觀察可檢測到呈紅色的細胞核(he)。激發(fa)波長(chang)為535 nm，發(fa)射波長(chang)為615 nm。

注(zhu)：熒(ying)光染料都存在淬滅的問題，建議染色后(hou)盡快檢測。

● 實驗示例：

操作流程： 胰酶消化液消化，計數2×10⁶/ml