植物脯氨酸檢測試劑盒(茚三酮比色法)
Plant
Proline Assay Kit with Ninhydrin
● 產品組成：
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組分貨號
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名稱
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規格
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貯存
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PP5040-01
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試劑(ji)1-Pro裂(lie)解液(ye)
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125 ml
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RT
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PP5040-02
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試劑(ji)2-Pro標準液
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1 ml
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4℃
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PP5040-03
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試劑3-Pro顯色液
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50 ml
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4℃ 避光
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● 產品簡介：
脯(fu)氨(an)(an)酸(suan)(Proline，Pro)是(shi)一種環(huan)狀的α-亞氨(an)(an)基酸(suan)，呈中性，等電(dian)點(dian)為6.30，易溶(rong)于(yu)水(shui)。在(zai)正常(chang)環(huan)境(jing)(jing)情況下(xia)脯(fu)氨(an)(an)酸(suan)含量(liang)較低(di)，但在(zai)逆境(jing)(jing)下(xia)(旱、熱(re)、冷、凍(dong)、鹽堿等)，脯(fu)氨(an)(an)酸(suan)常(chang)有明顯積累，即(ji)積累指數與(yu)(yu)植(zhi)物的抗逆性有關。植(zhi)物脯(fu)氨(an)(an)酸(suan)檢測(ce)試劑盒(茚(yin)三(san)(san)酮(tong)比(bi)色(se)(se)法(fa))檢測(ce)原理(li)是(shi)脯(fu)氨(an)(an)酸(suan)與(yu)(yu)茚(yin)三(san)(san)酮(tong)共熱(re)發生反應，能(neng)產(chan)生穩定的紅色(se)(se)產(chan)物，以(yi)分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計測(ce)定處吸光(guang)度(du)，在(zai)一定范(fan)圍內顏色(se)(se)深淺(即(ji)吸光(guang)度(du))與(yu)(yu)脯(fu)氨(an)(an)酸(suan)濃度(du)成正比(bi)。
該試劑盒不使用甲苯等有害溶劑，經濟環保。
該(gai)試(shi)劑盒主(zhu)要用于(yu)(yu)測(ce)定植物組(zu)織中(zhong)的游離(li)脯氨酸(suan)含量(liang)，不適用于(yu)(yu)動物及醫療樣(yang)品中(zhong)脯氨酸(suan)的測(ce)定。
按照一次(ci)使用1 ml Pro顯色液計算，試劑盒可(ke)以使用50次(ci)。
● 自備材料：
植物根莖、葉(xie)子等；剪刀；螺蓋離心管或(huo)鎖蓋離心管或(huo)96孔板；1ml玻璃比(bi)色皿(min)；分光光度計或(huo)酶標儀；水浴(yu)鍋(guo)或(huo)干浴(yu)器；離心機
● 操作步驟：
1、 樣本處理：
取新鮮植物組織，清洗干凈，擦干，剪碎，迅速稱取， 按照20mg重量加入1ml Pro裂解液（注意是否已經加入無水乙醇）的比例加入Pro裂解液（建議使用1.5ml螺口離心管或鎖蓋離心管），沸水(shui)浴(yu)或干浴(yu)處理20分鐘(zhong) (期間間歇混勻)，10000 rpm離心(xin) 2分鐘(zhong)，上清即為脯氨(an)酸提(ti)(ti)取液，4℃保存(cun)備(bei)用。待測提(ti)(ti)取液如不能及(ji)時測定，應置于(yu)-20℃保存(cun)，1-2天內穩定。
2、 配制系列脯氨酸標準溶液：
取1ml 試(shi)劑1-Pro裂解液全部加入(ru)到試(shi)劑2-Pro標準液的(de)小(xiao)管(guan)中，混勻后徹(che)底(di)溶解，即配成的(de)Pro標準液（100mg/ml）。
取(qu)1 μl 100mg/ml 標準液(ye)加入(ru)到(dao)1ml Pro裂解液(ye)中(zhong)，即配(pei)成(cheng)100μg/ml Pro標準液(ye)待用。參(can)照下(xia)表配(pei)制1-6號不同(tong)濃度的Pro標準溶液(ye)。
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編號
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1
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2
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3
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4
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5
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6
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7
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8
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100μg/ml Pro標準液加入量（ml）
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0.01
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0.02
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0.04
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0.06
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0.08
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0.10
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0.15
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0.2
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Pro裂解液(ye)（ml）
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0.49
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0.48
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0.46
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0.44
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0.42
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0.4
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0.35
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0.3
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脯(fu)氨酸含量（μg）
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1
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2
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4
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6
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8
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10
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15
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20
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4、 樣品測定:
=
1 \* GB3 ① 分光光度計(ji)測定：參考下(xia)表設置(zhi)反應混合液，依次加入試劑：
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編號
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0
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1-8
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9-X
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空(kong)白管
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標準管
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測定(ding)管
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試劑1-Pro裂解液
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0.5 ml
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-
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-
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步驟(zou)1中的脯氨酸(suan)提取液(ye)
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-
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-
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0.5 ml
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Pro標準液（步驟3中(zhong)1-8管）
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-
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0.5 ml
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-
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試劑(ji)3-Pro顯色液
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1 ml
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1 ml
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1 ml
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③ 水浴(yu)煮(zhu)沸(fei)或(huo)干浴(yu)20分鐘(zhong)，間歇混(hun)勻(yun)。加熱時務(wu)必注意避免液體暴沸(fei)濺出，可使用鎖蓋離心管(guan)或(huo)螺旋(xuan)蓋離心管(guan)。
④ 冰(bing)浴或流水冷卻至(zhi)室溫(wen)，10000 rpm離心 2分鐘，如發(fa)現沒有不溶物，也(ye)可以不離心。
⑤ 取上清，用(yong)空白管(guan)作為對照，取1ml反應混合液用(yong)分光(guang)光(guang)度計測(ce)定520nm吸光(guang)度值。
=
6 \* GB3 ⑥ 酶標(biao)儀(yi)測(ce)定(ding)：參考下表設置反應混合液，依次加(jia)入試劑：
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空白管
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標(biao)準管
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測(ce)定管
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試劑1-Pro裂解液
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50 μl
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-
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-
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步驟1中的(de)脯氨酸(suan)提取液(ye)
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-
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-
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50 μl
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Pro標準液（步(bu)驟3中1-8管）
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-
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50 μl
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-
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試(shi)劑(ji)3-Pro顯色液
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100 μl
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100 μl
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100 μl
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5、 計算：
以系列脯(fu)氨(an)酸標(biao)準(zhun)(1-8號管)含(han)量(liang)(μg)為橫坐標(biao)，以對應的吸光度為縱坐標(biao)，制作標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)，根據測定管的吸光度進(jin)而(er)計(ji)算(suan)其脯(fu)氨(an)酸含(han)量(liang)。
如使用分光光度計測定，根據如下公式計算具體樣品中脯氨酸的含量：
植物組織樣品脯氨酸含量(μg/g)=1.5（C×VT）/(W×VS) =3C/W
VT=步驟1中脯氨(an)酸提取液總(zong)體積(ml)，此處為(wei)1ml
W=步(bu)驟1中使用的樣品鮮重(g)
VS=步驟4中測定時加(jia)入(ru)的(de)脯(fu)氨酸提(ti)取(qu)液體(ti)積(ml)，本實驗為0.5ml
1.5系數為步驟(zou)4中反應混合液(ye)體積(ji)為1.5ml，取1ml測定(ding)吸光值
