Anti-Lamin
B1抗體（兔單抗）
Anti-Lamin B1 Antibody（Monoclonal Antibody from Rabbit）
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產品編號
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產品(pin)名稱
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規(gui)格(ge)
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RGL1150
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Anti-Lamin B1抗(kang)體（兔單抗(kang)）
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20 μl
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● 產品簡介
Lamin B1是(shi)由LMNB1基(ji)因(yin)(yin)編(bian)碼一種(zhong)(zhong)(zhong)核(he)(he)(he)纖層蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)。在(zai)(zai)(zai)動(dong)物(wu)細胞中(zhong)，3種(zhong)(zhong)(zhong)基(ji)因(yin)(yin)編(bian)碼了至少7種(zhong)(zhong)(zhong)核(he)(he)(he)纖層蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)。LMNA基(ji)因(yin)(yin)通過可變剪接編(bian)碼A型(xing)(xing)(xing)和C型(xing)(xing)(xing)核(he)(he)(he)纖層蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)，而LMNB1和LMNB2分(fen)別(bie)編(bian)碼核(he)(he)(he)纖層蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)B1和B2。B型(xing)(xing)(xing)核(he)(he)(he)纖層蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)存在(zai)(zai)(zai)于每(mei)個細胞。A型(xing)(xing)(xing)核(he)(he)(he)纖層蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)在(zai)(zai)(zai)原腸胚形成后(hou)表達(da)，C型(xing)(xing)(xing)核(he)(he)(he)纖層蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)的(de)表達(da)是(shi)組織特異性(xing)的(de)。在(zai)(zai)(zai)核(he)(he)(he)纖層蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)中(zhong)，核(he)(he)(he)纖層蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)B1往(wang)往(wang)被用作(zuo)核(he)(he)(he)被膜內參。核(he)(he)(he)纖層蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)B1在(zai)(zai)(zai)物(wu)種(zhong)(zhong)(zhong)間(jian)是(shi)高度保守的(de)，分(fen)子量為~68kD。
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來源(yuan)
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用途及稀釋比例
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抗體類型
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Lamin B1分子量
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Rabbit
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WB 1:1000-5000
IHC 1:200-1000
IF 1:200-1000
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單克隆(long)抗體
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~68 kD
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注(zhu)：WB, Western blot; IHC, Immunohistochemistry;
IF, Immunofluorescence
● 貯(zhu)存(cun)形式(shi)：
穩定溶液(ye)，1 mg/ml 抗(kang)體溶于PBS，50%甘(gan)油，pH7.2。
● 保存(cun)及運(yun)輸條(tiao)件：
-20℃保存，一年有效；避(bi)免反復凍融；濕冰運(yun)輸。
● 使用(yong)說明：
1. Western Blot雜交(jiao)(ECL顯色)：1:1000-5000稀釋，常溫孵育1-2 h或4℃過夜。
2. 免疫(yi)熒光（IF）和免疫(yi)組(zu)化（IHC）：1:200-1000稀釋。
● 實驗示例：
1 變性檢測：
總蛋白(bai)提(ti)取：5×106 K562細(xi)胞，400 g 離心收集，去(qu)上清(qing)，沉淀中(zhong)加入(ru)200 μl RIPA（加2 μl 100 mM PMSF），冰(bing)上裂解5分鐘(zhong)，4℃ 16000 g 15 分鐘(zhong)，上清(qing)即為總(zong)蛋白(bai)（TP）。
電泳：4-15%RealPAGE Tris-Glycine預制膠（貨號：RTD6117-0415）；1×TGS 200V 55min
轉膜：0.45μm PVDF膜，1×RealBlot快速(su)轉膜液(ye) 400 mA 40 min，電壓變(bian)化85-68 V
封閉(bi)：Western快速封(feng)閉(bi)液（貨號：WR5020）
RT封(feng)閉(bi) 10 min
一抗： Anti-Lamin B1抗體(ti)（兔(tu)單抗）（貨號：RGL1150） 1：3000，RT 60min
Anti-GAPDH抗(kang)體（兔單(dan)抗(kang)）（貨號(hao)：RGA1150） 1：10000，RT 60min
二抗：HRP標記羊抗兔gG（貨號：HGR1020）1：5000
RT 60min
ECL發光：RealECL發(fa)光液（貨號(hao)：EC2520）；化學(xue)發(fa)光成像系統（貨號(hao)：RT523）曝(pu)光1秒。
2 非(fei)變(bian)性(xing)檢測：
實驗程(cheng)序：
樣品提(ti)取(qu)：K562細胞(bao) 1×107細胞(bao)，400 g 離心3 min收(shou)集(ji)，1×PBS清洗(xi)2次，細胞沉淀中加入0.6 ml
非變性裂(lie)解液（貨號：RL1080），輕(qing)柔懸(xuan)浮細(xi)胞，4度(du)冰浴(yu)15min，間歇混勻(yun)，
4度 16000 g 15 min，收集上(shang)清。
電泳上樣樣品制備：BCA蛋白濃(nong)度(du)測(ce)(ce)定試劑盒測(ce)(ce)定濃(nong)度(du)（貨號：RTP7102），
樣(yang)品加(jia)入4×BN/CN-PAGE蛋白上(shang)樣(yang)緩沖液(ye)（貨號：PL114 ），調(diao)配為0.3 μg/μl上(shang)樣(yang)液(ye)，
上樣(yang)40 μl（12 μg）。
樣(yang)品(pin)1：RL1080提(ti)取樣(yang)品(pin)，加終濃度0.125% G-250（5% G-250染料，貨(huo)號：BC260）；
樣品(pin)2：RL1080提取樣品(pin)，不加G-250；
樣品(pin)3：RL1080提取樣品(pin)使用離心式(shi)去(qu)(qu)(qu)垢劑(ji)去(qu)(qu)(qu)除柱（貨號：DD0550）去(qu)(qu)(qu)除去(qu)(qu)(qu)垢劑(ji)，
樣(yang)品(pin)4：柱式動物胞漿蛋白提(ti)取試劑(ji)盒(細胞樣(yang)品(pin),非變性提(ti)取,不含去垢(gou)劑(ji))（貨號:RTD8106）提(ti)取樣(yang)品(pin)；
凝(ning)膠制備：Blue/Clear 非變性凝(ning)膠電泳試劑盒（手灌(guan)膠）（貨號(hao)：RTD6140）
制備10% 厚度1.5 mm凝膠(jiao)；
電(dian)泳(yong)：使用(yong)10×BN電(dian)泳(yong)緩沖(chong)液（貨號(hao)：BC500P）。開始電(dian)泳(yong)用(yong)1×藍色BN電(dian)泳(yong)緩沖(chong)液（0.02%G250），
恒(heng)壓200 V 51min后，換無(wu)色1×BN 電泳緩沖液,電泳時間(jian)共104 min
凝膠預處理：凝膠浸(jin)泡于1×BN轉膜(mo)緩沖(chong)液+0.1%SDS中 搖床(chuang)慢搖10 min
濕轉法(fa)轉膜：用10×BN轉膜緩沖(chong)液（貨號：BC600P）配制1×BN轉膜緩沖(chong)液+20%甲醇(chun)，用0.45 μm
PVDF，恒流200 mA（電(dian)壓變化114-83 V） 2小時(shi)，未冰(bing)浴(yu)（緩沖液(ye)水溫36度）。膜用無水甲醇去除藍(lan)色(se)
封(feng)閉：Western快速封(feng)閉液（貨號：WR5020）快速封(feng)閉 10 min
GAPDH檢測：GAPDH 兔單(dan)抗（貨號(hao)：RGA1150） 1:10000 過(guo)夜孵育(yu)；
羊(yang)抗兔IgG-HRP 1:5000（貨號(hao)：HGR1020） RT 1h，ECL 1秒
抗體清除(chu)：PVDF膜用Western一抗二抗去除(chu)液（弱堿，溫和型）（貨號(hao)：WS1200） 清除(chu)30min，
Western快速封閉液（貨(huo)號(hao)：WR5020）快速封閉 10min。
Lamin B1檢測(ce)：Anti-Lamin B1抗體（兔單抗）（貨號：RGL1150）1：3000 RT 1h，
羊抗兔(tu)IgG-HRP 1:5000（貨號：HGR1020） RT 1h，ECL 8秒