10×RealBlot 快速轉(zhuan)膜液
; 10×RealBlot Rapid Transfer
buffer
● 產品組成：
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貨號
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名稱
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規格
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保存條(tiao)件
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RT5020
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10×RealBlo快速轉(zhuan)膜液
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500 ml
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4℃
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說明書
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一份
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● 產品(pin)簡介：
快(kuai)速轉膜液(ye)使(shi)用(yong)獨(du)特配(pei)方(fang)，能高效快(kuai)速地將蛋白轉移到印跡膜（PVDF或硝(xiao)纖膜）上。使(shi)用(yong)濕(shi)轉法（Tank blot）或半(ban)干(gan)轉法（Semi-dry blot）方(fang)法，能在10-40分(fen)鐘(zhong)內(nei)完成轉膜過程。
快速(su)和(he)(he)環(huan)保：快速(su)轉(zhuan)膜液(ye)不(bu)使用甲醇，減輕了對實驗者和(he)(he)環(huan)境的傷(shang)害。
兼容(rong)性好：快速轉(zhuan)膜液(ye)能兼容(rong)Laemmli膠，預(yu)制膠，Bis-Tris膠等多種凝膠。
轉移(yi)(yi)效率(lv)高：快速(su)轉膜(mo)液(ye)對分子量跨度較大(da)的(de)蛋白也有很好的(de)轉移(yi)(yi)效率(lv)，有效解決了大(da)小(xiao)蛋白不能在同(tong)一(yi)張膜(mo)上(shang)同(tong)時轉移(yi)(yi)的(de)問題(ti)。
● 貯(zhu)存及(ji)運輸：
4-8℃貯存(cun)，有效(xiao)期一年；常溫運輸。
● 使用說明：
轉(zhuan)膜前的準備：
6-10張裁好的(de)普(pu)通濾紙或Whatman3MM濾紙；裁好的(de)轉印膜；足夠的(de)1×快速轉移buffer；無水甲(jia)醇（處(chu)理PVDF膜用）
一 濕轉法（Tank blot）：
1 按(an)照下表配(pei)制1×快速轉膜(mo)液(ye)
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1×快速轉膜液(ye)配(pei)制(zhi)量(liang) 1000ml
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10×快(kuai)速(su)轉膜液(ye)
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100 ml
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無水乙醇
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200 ml
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超純水
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700 ml
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2 將濾紙和海綿浸泡在1×快(kuai)速轉膜液中，完全(quan)浸濕，平衡5分鐘。
3 PVDF膜使用前要(yao)用無水甲(jia)醇(chun)潤濕30秒(miao)，隨后(hou)浸(jin)(jin)泡在1×快(kuai)速轉膜液(ye)中(zhong)，完全浸(jin)(jin)濕，平衡5分鐘；NC膜無需處理，直(zhi)接(jie)浸(jin)(jin)泡在轉膜緩(huan)沖液(ye)中(zhong)。
4 將凝膠在超純水(shui)中浸(jin)泡漂洗2分鐘(zhong)，去除膠表(biao)面(mian)的SDS；隨后將凝膠浸(jin)泡在1×快速(su)轉膜液中。
注意：水中(zhong)漂洗時間一(yi)定不能超過2分鐘，否則分子量較大的蛋白(bai)不(bu)能(neng)完全轉移。
5 按(an)照(zhao)以下順序(xu)做好轉印三(san)明治結構：
1 負極(ji)（陰極(ji)）
2 一塊海綿(mian)
3 濾紙（3張(zhang)）
4 凝膠
5 轉印膜
6濾紙（3張(zhang)）
7 一塊海綿（根據(ju)三明治的厚度選擇是否使用）
8 正極(ji)（陽極(ji)）
注意： ① 要徹底清除三明治結構中的(de)氣(qi)泡(pao)，適當補加1×快速轉膜液(ye)保持(chi)三(san)明(ming)治(zhi)結(jie)構濕潤。
② 三明治結(jie)構的制作不(bu)能(neng)(neng)太(tai)(tai)緊，也不(bu)能(neng)(neng)太(tai)(tai)松(song)。太(tai)(tai)緊和太(tai)(tai)松(song)都(dou)會影響轉印效(xiao)果。如(ru)果太(tai)(tai)緊的話，可(ke)以(yi)去除陽極一側的海綿。
6 將三(san)明(ming)治結構放于轉(zhuan)移槽中(zhong)，轉(zhuan)印槽中(zhong)灌滿1×快速轉(zhuan)膜液(ye)。
7 濕轉(zhuan)推薦使用(yong)恒(heng)流轉(zhuan)移：
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電流
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轉移時間
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電壓變化
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300 mA
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30 to 35 min
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50-55 V
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350 mA
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25 to 30 min
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55-58 V
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375 mA
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20 to 25 min
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58-62 V
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400 mA
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15 to 20 min
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58-65 V
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二 半干轉（Semi-dry blot）：
1 按(an)照(zhao)下表配制1×快速轉(zhuan)膜液(ye)：
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1×快速轉膜液配制量 500ml
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10×快速轉膜液(ye)
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50 ml
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無水乙(yi)醇
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100 ml
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超純水
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350 ml
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2 將濾紙浸泡在1×快速轉膜(mo)液中(zhong)，完全(quan)浸濕。
3 PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕30秒，浸(jin)(jin)泡在1×快速轉(zhuan)膜(mo)(mo)液(ye)中，完全浸(jin)(jin)濕，平衡(heng)5分鐘。NC膜(mo)(mo)無需處(chu)理，直接浸(jin)(jin)泡在轉(zhuan)膜(mo)(mo)緩沖液(ye)中。
4 將(jiang)凝膠在超純(chun)水中(zhong)浸泡(pao)(pao)漂洗2分(fen)鐘，去(qu)除(chu)膠表(biao)面的SDS；隨后將(jiang)凝膠浸泡(pao)(pao)在1×快(kuai)速轉膜液中(zhong)。
注意：水中(zhong)漂(piao)洗時間不(bu)能超過2分鐘，否則分子(zi)量(liang)較大的蛋白可能不能完全轉移。
5 按照以下順(shun)序(xu)做好轉印三(san)明(ming)治結構：
1 負極（陰極）
2 下層濾紙（5張）
3 凝膠
4 轉印膜
5 上層濾(lv)紙（5張）
6 正極(ji)（陽極(ji)）
半干(gan)轉時，濾紙、膠(jiao)、膜之(zhi)間的大小，一般(ban)是(shi)下(xia)層濾紙>=膜>=膠>=上層(ceng)濾紙(zhi)。上下兩(liang)層(ceng)的濾紙(zhi)一(yi)定(ding)不(bu)(bu)能(neng)接(jie)觸(chu)；濾紙(zhi)、膠、膜(mo)之間(jian)千(qian)萬不(bu)(bu)能(neng)有氣泡(pao)，接(jie)觸(chu)的濾紙(zhi)和氣泡(pao)會造成短路。
6 半干轉(zhuan)推(tui)薦使(shi)用恒(heng)流(liu)轉(zhuan)移：
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恒電(dian)流(liu)
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轉移(yi)時間
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電壓變化(hua)
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400 mA
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25-30min
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9-13 V
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注：不(bu)同廠家(jia)半(ban)干轉儀(yi)器設置可(ke)能有所(suo)不(bu)同，請(qing)根據廠家(jia)說(shuo)明(ming)書適當調整。
三 問題解決：
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問(wen)題
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可能原因
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解(jie)決方法
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轉膜不(bu)充分
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濕轉轉移槽鉑金絲有(you)鹽(yan)沉積
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徹底用超純水清(qing)洗轉移槽
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轉移膜(mo)，濾紙，凝膠沒有在1×轉(zhuan)移緩沖(chong)液中徹底平衡(heng)
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轉移膜，濾紙，凝膠要(yao)在1×快速轉膜液(ye)中平(ping)衡5分鐘(zhong)，震(zhen)蕩平衡更好(hao)
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PVDF膜沒有(you)用(yong)甲醇(chun)預處(chu)理
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PVDF膜要用甲醇徹(che)底潤濕(shi)，然(ran)后在1×快速轉(zhuan)膜緩(huan)沖液中平衡5分鐘
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轉膜時間不(bu)充分
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適當延長轉膜時(shi)間
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不連續的轉膜
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凝(ning)膠和膜之間有氣泡(pao)
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轉膜三(san)明治做好后，用滾軸把凝膠和膜之間的氣(qi)泡趕走
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PVDF膜沒有用甲醇(chun)預處理(li)
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PVDF膜要(yao)用甲醇潤濕，然后在1×快速轉膜緩沖液中平衡5分鐘
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轉膜設備不工作
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電(dian)泳電(dian)源不配套
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電泳電源要符合(he)以下參數：300W，5-300V，0.01-3A
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實驗(yan)示例：
