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非變性蛋白電泳Marker轉膜問題
//liuzai.cn/news_detail.aspx?NewsID=248
非變性電泳蛋白質Marker（45-880
kD）
Native
Electrophoresis Protein Marker（45-880 kD）
●產品編號及規格：
RTD6137 20次 100
μl
●儲存及運輸條件：
-20℃保存，濕冰運輸，有效期為12個月。
● 產品簡介：
本產品有4種蛋白組成，分子量范圍為45-880
kD，經過非變性電泳后，用考馬斯亮藍染色后可以得到5條主帶。
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蛋白名稱
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分子量(kD)
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蛋(dan)白來源
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pI
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說明(ming)
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Ferritin
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440
880
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equine
spleen
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N/A
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非變性下440kD和(he)880
kD
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Carbonic
Anhydrase
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300
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Bovine
Erythrocytes
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6.4
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單(dan)體(ti)(ti)分子量(liang)29kD，非(fei)變性(xing)下(xia)為(wei)多聚體，表現為(wei)多(duo)種(zhong)電荷異構體(ti)（charge
isomer）
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Albumin
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66
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bovine
serum
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4.6-5.8
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球蛋白，單體(ti)分子量(liang)66
kD，非變(bian)性下可形成少(shao)量二聚體(ti)
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Ovalbumin
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45
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egg
white
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4.71或
4.59
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球蛋白(bai)，分子量(liang)為45kD，非變性(xing)條件下(xia)大于(yu)45kD會出現電荷(he)異構體(ti)（charge
isomer）
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● 使用說明：
1. 取出(chu)產品后(hou)，常(chang)溫融化后(hou)，徹底混(hun)勻，上(shang)樣電泳。
注：上樣量根據膠的厚度和梳子的寬度確定。一般說來，1.0厚度10齒梳子加樣孔上樣5 μl，1.0厚度15齒梳子加樣孔上樣量2.5 μl，其他規格梳子請適當調整上樣量。
2. 該產品不(bu)含蛋白凝膠(jiao)制(zhi)(zhi)備試劑(ji)，您(nin)可以選擇非(fei)變性PAGE凝膠(jiao)制(zhi)(zhi)備及(ji)電(dian)(dian)泳試劑(ji)盒(he)（貨號(hao)：RTD6130）或(huo)者蛋白預制(zhi)(zhi)膠(jiao)（貨號(hao)RTD6118）。如自備試劑(ji)，經典Laemmli系統中把制(zhi)(zhi)膠(jiao)溶液(ye)、電(dian)(dian)泳緩沖液(ye)和上樣緩沖液(ye)中的SDS和還原劑(ji)（DTT或(huo)β-巰基乙醇）全部去除即可進行(xing)非(fei)變性電(dian)(dian)泳。
3. 電泳條件：
建議使用8%非變(bian)性等度膠(jiao)或者4-15%非變(bian)性梯度膠(jiao)進行電(dian)泳。
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恒電壓
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150-200 V
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起始電流
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27-35 mA/板膠
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結束電流
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7-10 mA/板膠
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電泳時間
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50-80min+
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4. 電泳結束后，考馬斯亮藍(lan)染色，觀察結果。
注：使用銀染染色時，由于靈敏度高于考馬斯亮藍染色方法，需要適當降低Marker上樣量，一般稀釋50倍后上樣。
注意：
1.本蛋白Marker不適用于變性蛋白電泳(SDS-PAGE)。
2. 蛋白非變性電泳條件下，不能精確判斷蛋白的分子量大小。因為在非變性條件下，蛋白的電荷，空間結構，物化性質等都對蛋白的遷移有影響。
3.非變性蛋白電泳Marker（RTD6137，RTD6142，RTD6144）由于要保持蛋白的天然結構，都沒有偶聯染料，在電泳時基本都看不到條帶；然而，RTD6137和RTD6144中的440 kD和880 kD由于天然蛋白中含有鐵離子，使得電泳后在膠上可見淡黃色，其中440 kD顏色更深。凝膠轉膜后，膜上也可以看到黃色的440 kD條帶，可以大體判斷Marker轉膜的效果。
4. 非變性Marker轉膜后可以后用麗春紅染色液（貨號：RTD6301）染膜，可以看到Marker條帶，順便可以檢測轉膜效率，然而要注意的是麗春紅染色靈敏度比較低，可能不能完全看到完整的Marker條帶。
● 實驗示例：
使用RTD6137非變性電泳蛋白質Marker（45-880
kD）產品發表部分文章列表：
1.
[2022 IF=8.0] Tektin bundle interacting protein, TEKTIP1,
functions to stabilize the tektin bundle and axoneme in mouse sperm flagella
Author: Xin?Yan Geng,Hui?Juan Jin,
Lan Xia.Bin?Bin Wang,Su?Ren Chen
Marker: RTD6137非變性電泳蛋白質Marker（45-880 kD）
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2024)
81:118
Institution: Beijing
Normal University
Paper link：