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非變性蛋白電泳Marker轉膜問題
//liuzai.cn/news_detail.aspx?NewsID=248
寬分子量非(fei)變性電泳蛋(dan)白質Marker（21-880
kD）
Broad
MW Native Electrophoresis Protein Marker（21-880
kD）
●產品編(bian)號及規格：
RTD6144 20次 100
μl
●儲存及運輸條件：
-20℃保存，濕冰運輸，有效期為12個月。
● 產(chan)品簡介(jie)：
本產品有5種蛋白組成，分(fen)子量范圍為21-880
kD，經過非變性電泳后(hou)，用考馬斯(si)亮藍染(ran)色后(hou)可以得到5條主(zhu)帶。
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蛋白名稱
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分子量(kD)
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蛋白(bai)來源
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pI
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說明
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Ferritin
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440
880
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equine
spleen
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N/A
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非變性下(xia)440kD和880
kD
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Carbonic
Anhydrase
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300
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Bovine
Erythrocytes
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6.4
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單體分子(zi)量29kD，非變性下為(wei)10聚體(ti)，低(di)于300kD有電荷異構體（charge
isomer）
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Lactic
Dehydrogenase
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165
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Microorganism
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4.5
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球蛋(dan)白，單體分子量36 kD，非(fei)變(bian)性下可形成四(si)聚體
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Ovalbumin
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45
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egg
white
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4.71或(huo)4.59
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球蛋白(bai)，分子量(liang)為45kD，非變(bian)性條(tiao)件下大于45kD會出(chu)現電(dian)荷異構體（charge
isomer）
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Trypsin
Inhibitor
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21
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Soybean
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4.5
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非變性下(xia)21 kD
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● 使用說(shuo)明：
1. 取出產品后(hou)，常溫融(rong)化后(hou)，徹(che)底混勻，上樣電(dian)泳。
注：上樣(yang)量根據膠的厚度和(he)梳子(zi)的寬度確定。一般說來，1.0厚度10齒梳子加(jia)樣孔上樣5 μl，1.0厚度15齒(chi)梳(shu)子加樣孔上(shang)樣量2.5 μl，其他規格梳子請適(shi)當調整上(shang)樣量(liang)。
2. 該產品不含蛋白凝(ning)膠(jiao)制(zhi)備試劑，您(nin)可以(yi)選(xuan)擇非變(bian)性PAGE凝(ning)膠(jiao)制(zhi)備及電(dian)泳(yong)試劑盒（貨號(hao)：RTD6130）或(huo)者蛋白預制(zhi)膠(jiao)（貨號(hao)RTD6118）。如自備試劑，經典Laemmli系(xi)統中把制(zhi)膠(jiao)溶液(ye)、電(dian)泳(yong)緩沖液(ye)和上樣緩沖液(ye)中的SDS和還原劑（DTT或(huo)β-巰基乙醇）全部(bu)去除即可進行非變(bian)性電(dian)泳(yong)。
3. 電泳條(tiao)件：
建議使用(yong)10%非變性(xing)膠或者4-20%梯度非(fei)變性(xing)膠（貨號：RTD6118-0420）進行電泳(yong)。
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恒電壓(ya)
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120 V
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起始電流
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27-35 mA/板膠(jiao)
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結束電流
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7-10 mA/板膠(jiao)
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電泳(yong)時間
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1h20min+
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4. 電(dian)泳結束后，考馬(ma)斯(si)亮藍染色，觀察結果(guo)。
注：使(shi)用銀染染色時，由于靈敏度高(gao)于考(kao)馬(ma)斯亮藍染色方法，需要適當降低Marker上樣量(liang)，一般(ban)稀釋50倍(bei)后上樣。
注意：
1. 本(ben)蛋(dan)白Marker不適用于變性蛋白電(dian)泳（SDS-PAGE），因為在(zai)SDS存在下(xia)，含有多(duo)個亞單位的蛋白會不同程度解聚(ju)。
2. 在非變性條(tiao)件下，蛋(dan)白(bai)的遷移與(yu)蛋(dan)白(bai)的電荷、蛋(dan)白(bai)形狀以(yi)及蛋(dan)白(bai)分子(zi)量都(dou)有關(guan)。因此，在一種凝膠濃度(du)下使用(yong)本(ben)Marker不能精確估計出目的蛋白的分子量(liang)。非變性電泳(yong)中，蛋白分子量(liang)的確定(ding)應該是在不同(tong)凝(ning)膠濃度下，確定(ding)出蛋白的Rf值，繪制出凝(ning)膠濃度(du)對Rf的(de)(de)曲線從(cong)而(er)判(pan)定蛋白(bai)的(de)(de)分子量(liang)。
● 實驗示例：
1 4-20% Tris-甘(gan)氨(an)酸 非(fei)變性膠電泳：
4-20% RealPAGE Precast Gel
1×TG 200V 50-19mA 47min
2. 4-16% Blue Native：
3： 4-15% Tris-甘氨酸非變性：
