過濾紙(類(lei)囊(nang)體提取用)
1 新鮮(xian)采(cai)集植物葉片(約30克),快速(su)去除葉脈并將葉片(pian)剪(jian)成1-3 cm2大小的碎片(pian)并浸泡在120 ml的預(yu)冷(leng)的1×類囊體(ti)膜提取(qu)緩(huan)沖液(即(ji)用型)中(每克葉片(pian)加4 ml)。
2 將浸泡了葉片的溶液轉(zhuan)移到電動勻漿機(ji)(即家用(yong)制備果(guo)汁的勻漿機(ji),可選貨號:RT-2243A)中,低速勻漿5秒,避(bi)免起泡沫(mo)。用玻(bo)璃棒(bang)把(ba)液(ye)面的碎片按入勻漿機底部后,再低(di)速勻漿5秒。注意:除電(dian)動勻(yun)漿(jiang)機(ji)外,還(huan)可(ke)以選擇玻璃勻(yun)漿(jiang)器和研(yan)磨(加玻璃珠)等裂解細(xi)胞的方法,但這些(xie)方法的單次(ci)處理(li)量(liang)都比較小(xiao),需要(yao)將(jiang)樣品分(fen)成(cheng)很多小(xiao)份單獨勻(yun)漿(jiang),然后再(zai)匯集。注:不(bu)(bu)要(yao)用液(ye)氮(dan)研(yan)磨,會(hui)損傷類囊(nang)(nang)體膜;不(bu)(bu)要(yao)過度勻(yun)漿(jiang),把葉片(pian)打碎(sui)即可(ke),否則會(hui)降低類囊(nang)(nang)體膜得率。
3 過(guo)濾勻漿液:2層過濾紙放于漏斗上,用漏斗將(jiang)濾液收集到預(yu)冷的(de)250 ml量(liang)筒中(zhong),一般分(fen)三(san)次收集(ji),總(zong)共(gong)可收集(ji)80-85 ml濾液,將濾液等分到4個預冷(leng)的50 ml的塑料(liao)離心管中(每個管中的濾液不要超過35 ml)。