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Cellular and Molecular Life Sciences[2022 IF 8.0]北京師范大學陳蘇仁課題組在CMLS發文揭示微管腔內結合蛋白TEKTIP1調控精子鞭毛軸絲穩定性的作用

2024年(nian)3月7日,北(bei)京師范(fan)大學(xue)陳蘇(su)仁課題組在國際細胞分(fen)子(zi)生物(wu)學(xue)領域知(zhi)名期刊Cellular and Molecular Life Sciences發表了(le)題為Tektin bundle interacting protein, TEKTIP1, functions to stabilize the tektin bundle and axoneme in mouse sperm flagella的(de)(de)研究論(lun)文(wen),通過基因敲除小(xiao)鼠和分(fen)子(zi)生化(hua)手段(duan)揭示了(le)TEKTIP1蛋白發揮(hui)著穩(wen)定(ding)精(jing)子(zi)鞭毛微管腔內tektin束和軸絲穩(wen)定(ding)性的(de)(de)關(guan)鍵作(zuo)用,推(tui)動了(le)人們對于精(jing)子(zi)運(yun)動結構(gou)與分(fen)子(zi)機制的(de)(de)科學(xue)認識。







精子鞭毛以“9+2”軸(zhou)絲為(wei)核心,環(huan)繞著中(zhong)央2個(ge)單體微管(guan)的(de)是9個(ge)外周二聯體微管(guan)(Doublet microtubule, DMT),其(qi)中(zhong)A管(guan)為(wei)完(wan)全(quan)微管(guan),B管(guan)為(wei)不完(wan)全(quan)微管(guan)。DMT中(zhong)含(han)有(you)多種微管(guan)腔內結(jie)合蛋白(Microtubule inner protein, MIP),這些蛋白被推測(ce)對DMT的(de)穩定性至(zhi)關重要。哺乳動(dong)(dong)物(wu)精子DMT的(de)特征是其(qi)復雜(za)的(de)筑(zhu)絲蛋白(tektin)束幾乎填滿了(le)(le)整個(ge)A管(guan)。在哺乳動(dong)(dong)物(wu)中(zhong)發現了(le)(le)5種不同(tong)的(de)tektin(tektin1~5)組成,tektin1~5基因(yin)敲(qiao)除不同(tong)程度地影(ying)響了(le)(le)小鼠(shu)精子運(yun)動(dong)(dong)能(neng)力(li),研(yan)究人員(yuan)還在弱精子癥患者中(zhong)鑒定到了(le)(le)TEKT3基因(yin)突變。


2021年,Gui M等人在Cell雜志發表文章[1]首次利用冷(leng)凍電子顯微鏡(cryo-EM)解析了牛氣管(guan)纖毛的(de)(de)DMT結構,發現(xian)一種功能未知的(de)(de)新蛋白,命名為TEKTIP1(Tektin bundle interacting protein 1),其位于tektins束的(de)(de)中心,因此(ci)推定(ding)TEKTIP1可能發揮著組裝和/或穩定(ding)tektins束的(de)(de)關鍵功能。


陳蘇(su)仁課題(ti)組(zu)利用CRISPR/Cas9基因(yin)編輯技術(shu)構建了Tektip1基因(yin)敲(qiao)除小鼠(shu),敲(qiao)除鼠(shu)生長(chang)發育正常但雄性(xing)生育力(li)顯著降(jiang)低,主要表現(xian)為(wei)一定程度的精子軸絲結構破壞和精子運動軌跡改變(圖1)。


圖1. Tektip1基因敲(qiao)除小鼠(shu)

精子運動軌(gui)跡和鞭毛軸絲結構





Tektip1基因(yin)敲除(chu)并不影響tektin 1~5蛋白(bai)的(de)表達(da),但(dan)生化實驗顯示其(qi)干擾了tektin蛋白(bai)的(de)互作(zuo)(zuo)和組裝(zhuang)。Tektip1基因(yin)敲除(chu)小鼠睪丸中tektin 3的(de)單體(ti)(ti)含量升高,而(er)其(qi)聚體(ti)(ti)含量減低;另外,tektin 3與(yu)tektin 1、tektin 2和tektin 4間(jian)的(de)相互作(zuo)(zuo)用(yong)顯著減弱。


綜上所述,本項研(yan)究對cryo-EM所解(jie)析的MIP結(jie)構進行了(le)功能(neng)性(xing)驗證,揭示(shi)了(le)TEKTIP1蛋白(bai)的確發揮著穩定tektin束和(he)軸(zhou)絲結(jie)構的關(guan)鍵(jian)作用(圖2)。TEKTIP1基因突變可能(neng)是弱精子癥潛在的致病遺傳(chuan)因素(su),尚需與臨床結(jie)合開展相(xiang)關(guan)研(yan)究。


圖(tu)2. 模式圖(tu)


北京師范大學(xue)為(wei)第一完成單位,陳蘇仁副教(jiao)授(shou)為(wei)最后通訊作者(zhe),在(zai)讀碩士研究生(sheng)耿新燕為(wei)第一作者(zhe),該項研究受(shou)到國家(jia)自然科學(xue)基(ji)金面上項目(32370905)等基(ji)金的資助。




原文鏈接:
//link.springer.com/article/10.1007/s00018-023-05081-3



文章中非變性電泳使用了Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒(RTD6139)非變性電泳蛋白質Marker(45-880 kD)(RTD6137)