Western無蛋白快速封閉液
Protein Free Rapid
Blocking Buffer for WB
● 產品組成：
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貨號(hao)
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名稱
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規格
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保存條件
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PF1070-100ml
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Western無蛋(dan)白快(kuai)速封閉液
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100 ml
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2-8℃
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PF1070-500ml
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Western無蛋白快(kuai)速(su)封閉(bi)液
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500 ml
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2-8℃
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說明書
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一(yi)份
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● 產品簡介：
本(ben)產(chan)品專為(wei)快速高(gao)效封(feng)(feng)閉(bi)(bi)Western Blot 轉印膜而(er)設計，采用(yong)(yong)無蛋(dan)(dan)白配方(fang)，避免抗(kang)體(ti)(ti)(ti)與封(feng)(feng)閉(bi)(bi)劑的(de)(de)非特異結(jie)合，最大(da)程度地降低了背(bei)景。同時，本(ben)封(feng)(feng)閉(bi)(bi)劑無內(nei)源的(de)(de)磷酸化蛋(dan)(dan)白及生(sheng)物素，對磷酸化特異抗(kang)體(ti)(ti)(ti)及生(sheng)物素檢測也不會產(chan)生(sheng)干擾(rao)。本(ben)封(feng)(feng)閉(bi)(bi)劑不與蛋(dan)(dan)白產(chan)生(sheng)非特異性結(jie)合，因而(er)只封(feng)(feng)閉(bi)(bi)膜而(er)不會屏蔽樣品蛋(dan)(dan)白的(de)(de)抗(kang)體(ti)(ti)(ti)識別位點(dian)，大(da)大(da)提高(gao)了抗(kang)體(ti)(ti)(ti)檢測靈敏度。實驗(yan)表明，本(ben)封(feng)(feng)閉(bi)(bi)劑對許(xu)多抗(kang)體(ti)(ti)(ti)都有不同程度的(de)(de)信(xin)號增(zeng)(zeng)強作(zuo)用(yong)(yong)。然而(er)這(zhe)種信(xin)號增(zeng)(zeng)強作(zuo)用(yong)(yong)因抗(kang)體(ti)(ti)(ti)而(er)異，對某(mou)一特定(ding)抗(kang)體(ti)(ti)(ti)，并(bing)不一定(ding)具有確定(ding)的(de)(de)信(xin)號增(zeng)(zeng)強作(zuo)用(yong)(yong)。
注意： 沒(mei)有(you)任何一種(zhong)封閉劑能適(shi)合所(suo)有(you)抗原和抗體(ti)的檢測系(xi)統。如出現(xian)本試劑不適(shi)合的抗體(ti)，請(qing)替換使用其它種(zhong)類的封閉劑如BSA或(huo)脫(tuo)脂奶粉等。
● 貯存：
2-8℃貯存，有效期一年。
● 注意事項：
1. 快速高效：10-60 min內完成封(feng)閉；只結合(he)封(feng)閉轉印膜而不結合(he)蛋(dan)白(bai)，因此不會屏蔽樣品蛋(dan)白(bai)的抗體識別(bie)位點(dian)，與傳統的脫脂奶粉和BSA 封(feng)閉相比信噪比更高；
2. 方(fang)便快(kuai)捷：無需(xu)稀釋，即取(qu)即用(yong)；
3. 性能可靠：無蛋(dan)白配方，與抗體(ti)無交(jiao)叉反應；
4. 應用范圍廣：無磷酸(suan)(suan)化蛋白，無生物素，尤(you)其適合磷酸(suan)(suan)化特異抗體及生物素檢測(ce)系(xi)統；
5. 節(jie)省抗體：使(shi)用本封(feng)閉劑后，所(suo)需的最適抗體濃度低于常(chang)規(gui)使(shi)用濃度，可(ke)大大節(jie)省抗體使(shi)用量。
6. 與(yu)PVDF膜相比，NC膜需要更長(chang)時間(jian)的封閉(bi)。
● 使用說明：
1. 本產品無(wu)需稀釋，開蓋(gai)即(ji)用。
2. 完成轉(zhuan)(zhuan)膜后，使用TBST漂(piao)洗轉(zhuan)(zhuan)印(yin)膜3次，每次5分(fen)鐘(zhong)；
3. 將轉(zhuan)印膜放入(ru)到雜交孵(fu)育盒中，加(jia)入(ru)10-20 ml 無(wu)蛋白(bai)快速封(feng)閉(bi)液完(wan)全(quan)覆蓋轉(zhuan)印膜，置(zhi)于搖床輕輕搖動，參考下表確定封(feng)閉(bi)時間：
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膜類(lei)型
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推薦(jian)封閉時間(jian)
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反(fan)應溫度
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PVDF膜
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10-20分鐘
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常溫 25度(du)
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NC膜
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40-60 分鐘
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常溫25度
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注(zhu)意：使(shi)用本產品，PVDF膜和NC膜使(shi)用推(tui)薦封(feng)閉(bi)(bi)時間，經多(duo)種抗(kang)體(ti)的(de)測試封(feng)閉(bi)(bi)效果顯著優于(yu)常規的(de)BSA封(feng)閉(bi)(bi)1 h。對于(yu)一(yi)些背景(jing)非常高(gao)的(de)抗(kang)體(ti)，可(ke)以(yi)嘗試延長(chang)封(feng)閉(bi)(bi)時間。如有特殊需要，也可(ke)4℃封(feng)閉(bi)(bi)過(guo)夜。
4. 封閉結束后棄去封閉液，進行Western Blot后續操作。
● 實驗示例：
Jurkat細胞總蛋白GAPDH檢測
電泳條件：200 V 1×TGS 40-12 mA 53 min
轉膜條件：NC膜，1×RealBlot快速轉膜液(Cat:RT5020)
恒流400 mA 35 min 65-59 V
封閉：無蛋白封閉液（Cat：PF1070） RT 60 min
一抗：兔GAPDH多抗(Cat: RGA1040) 1:2000 過夜4℃孵育
二抗：羊抗兔IgG-HRP(Cat: RGA1040) 1:5000 RT 60min
ECL發光：RealECL發光液（Cat:EC2520 ） 10秒曝光
植物葉綠體LHCa3檢測
Electrophoresis: 10% RealPAGE SDS
Electrophorosis(RTD6148)
Transfer: 1×RealBlot transfer buffer(Cat:RT5020)
350 mA blotting to NC membrane for 30
min.
Blocking: 無蛋白封閉(bi)液（Cat:PF1070） RT for 20 min;
BSA at RT for 1 h.
Primary antibody: Lhca3（Cat:RGL2080） 1:2000 dilution at RT for
1h
Secondary antibody: 1:5000 dilution using
Goat Anti-Rabbit IgG AP(Cat:AGR1030)
Detection: using
BCIP/NBT(Cat:BN1026) at RT for 5 min