Western無蛋白快速封閉液
Protein Free Rapid
Blocking Buffer for WB
● 產品組成：
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貨號
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名(ming)稱
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規格
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保存條件
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PF1070-100ml
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Western無蛋白(bai)快(kuai)速封閉液
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100 ml
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2-8℃
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PF1070-500ml
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Western無蛋(dan)白(bai)快速封閉液(ye)
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500 ml
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2-8℃
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說明書
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一份
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● 產品簡介：
本產品(pin)(pin)專為快速(su)高效封(feng)(feng)閉(bi)(bi)Western Blot 轉印(yin)膜(mo)而(er)(er)設(she)計，采(cai)用(yong)(yong)無蛋白(bai)配方，避免(mian)抗體(ti)與封(feng)(feng)閉(bi)(bi)劑(ji)的(de)非特異結(jie)(jie)合，最大程(cheng)度(du)地降(jiang)低了背(bei)景(jing)。同時，本封(feng)(feng)閉(bi)(bi)劑(ji)無內(nei)源的(de)磷酸(suan)(suan)化蛋白(bai)及(ji)生物素，對磷酸(suan)(suan)化特異抗體(ti)及(ji)生物素檢(jian)測也(ye)不會產生干擾。本封(feng)(feng)閉(bi)(bi)劑(ji)不與蛋白(bai)產生非特異性結(jie)(jie)合，因而(er)(er)只封(feng)(feng)閉(bi)(bi)膜(mo)而(er)(er)不會屏蔽樣(yang)品(pin)(pin)蛋白(bai)的(de)抗體(ti)識別位點(dian)，大大提高了抗體(ti)檢(jian)測靈敏度(du)。實驗表明(ming)，本封(feng)(feng)閉(bi)(bi)劑(ji)對許多抗體(ti)都有(you)不同程(cheng)度(du)的(de)信號(hao)增(zeng)強作(zuo)用(yong)(yong)。然而(er)(er)這種(zhong)信號(hao)增(zeng)強作(zuo)用(yong)(yong)因抗體(ti)而(er)(er)異，對某一(yi)特定抗體(ti)，并不一(yi)定具有(you)確定的(de)信號(hao)增(zeng)強作(zuo)用(yong)(yong)。
注意(yi)： 沒有任何一種(zhong)封閉劑(ji)能(neng)適合所有抗(kang)原(yuan)和(he)抗(kang)體的檢測系統。如(ru)出現本試(shi)劑(ji)不(bu)適合的抗(kang)體，請替換使用其它種(zhong)類的封閉劑(ji)如(ru)BSA或脫(tuo)脂奶(nai)粉等。
● 貯存：
2-8℃貯存，有效(xiao)期一年。
● 注意事項：
1. 快速高(gao)(gao)效：10-60 min內完成封(feng)閉(bi)；只結合封(feng)閉(bi)轉印(yin)膜而不(bu)結合蛋白，因此(ci)不(bu)會屏蔽(bi)樣品蛋白的(de)(de)抗體(ti)識(shi)別位點，與傳(chuan)統(tong)的(de)(de)脫脂奶粉和BSA 封(feng)閉(bi)相比信噪(zao)比更高(gao)(gao)；
2. 方便快捷：無需(xu)稀釋，即取即用；
3. 性能可(ke)靠：無蛋(dan)白配(pei)方，與抗(kang)體無交(jiao)叉反應；
4. 應(ying)用范圍(wei)廣：無磷酸化蛋(dan)白，無生物素(su)，尤其(qi)適合磷酸化特異抗體及生物素(su)檢測系統；
5. 節(jie)省(sheng)抗(kang)體(ti)(ti)：使用本封閉劑后(hou)，所需的(de)最適抗(kang)體(ti)(ti)濃(nong)度低于常規使用濃(nong)度，可(ke)大(da)大(da)節(jie)省(sheng)抗(kang)體(ti)(ti)使用量。
6. 與(yu)PVDF膜相比，NC膜需要更長時間的封閉。
● 使用說明：
1. 本產(chan)品無需稀(xi)釋，開(kai)蓋(gai)即用(yong)。
2. 完(wan)成轉(zhuan)膜后，使用TBST漂(piao)洗轉(zhuan)印膜3次，每次5分鐘；
3. 將轉印膜放入到雜交孵育盒中，加入10-20 ml 無(wu)蛋白快(kuai)速封閉(bi)液完全覆蓋轉印膜，置(zhi)于搖(yao)床(chuang)輕(qing)輕(qing)搖(yao)動，參(can)考下表確定封閉(bi)時間(jian)：
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膜類型
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推薦(jian)封閉(bi)時間(jian)
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反應溫度
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PVDF膜
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10-20分鐘
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常溫 25度
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NC膜
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40-60 分鐘
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常溫(wen)25度
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注意：使(shi)用本(ben)產品，PVDF膜和NC膜使(shi)用推薦封(feng)(feng)閉(bi)(bi)(bi)時(shi)(shi)間，經(jing)多種抗(kang)體的(de)(de)測試封(feng)(feng)閉(bi)(bi)(bi)效果顯著優于常規的(de)(de)BSA封(feng)(feng)閉(bi)(bi)(bi)1 h。對于一(yi)些背(bei)景非常高(gao)的(de)(de)抗(kang)體，可(ke)以嘗(chang)試延(yan)長封(feng)(feng)閉(bi)(bi)(bi)時(shi)(shi)間。如(ru)有特殊需要，也可(ke)4℃封(feng)(feng)閉(bi)(bi)(bi)過夜。
4. 封閉結束后棄去封閉液，進行Western Blot后續操作。
● 實驗示例：
Jurkat細胞總蛋白GAPDH檢測
電泳條件：200 V 1×TGS 40-12 mA 53 min
轉膜條件：NC膜，1×RealBlot快速轉膜液(Cat:RT5020)
恒流400 mA 35 min 65-59 V
封閉：無蛋白封閉液（Cat：PF1070） RT 60 min
一抗：兔GAPDH多抗(Cat: RGA1040) 1:2000 過夜4℃孵育
二抗：羊抗兔IgG-HRP(Cat: RGA1040) 1:5000 RT 60min
ECL發光：RealECL發光液（Cat:EC2520 ） 10秒曝光
植(zhi)物葉綠體(ti)LHCa3檢測
Electrophoresis: 10% RealPAGE SDS
Electrophorosis(RTD6148)
Transfer: 1×RealBlot transfer buffer(Cat:RT5020)
350 mA blotting to NC membrane for 30
min.
Blocking: 無(wu)蛋白封(feng)閉液（Cat:PF1070） RT for 20 min;
BSA at RT for 1 h.
Primary antibody: Lhca3（Cat:RGL2080） 1:2000 dilution at RT for
1h
Secondary antibody: 1:5000 dilution using
Goat Anti-Rabbit IgG AP(Cat:AGR1030)
Detection: using
BCIP/NBT(Cat:BN1026) at RT for 5 min