2×GC Buffer
● 產品組成：
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目錄號
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規格
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價格
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RTB3101-01
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1ml
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RTB3101-03
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10×1ml
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300元(yuan)
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● 保(bao)存：-20℃
● 用途：
PCR 擴增復雜結構的 DNA 片(pian)段(duan)。
● 產品說明和(he)注意事項(xiang)：
1. 本產(chan)品能與各(ge)種(zhong)PCR酶配合(he)使用，能夠擴(kuo)增(zeng)具有復雜二(er)級(ji)結構模板（GC rich、重復序(xu)列等(deng)）的PCR片段。
2. 使用 GC Buffer 進行 PCR 擴增時，建(jian)議使用 Tm 值較高的引物。因此，引物最好設計(ji)在 30 mer 左右。
3. 使用 GC Buffer擴增的 GC rich 的(de)DNA 片段長度(du)，會因(yin) GC 含量不同而各有差異。
4. 由于 GC Buffer 和一般的PCR Buffer 相比 DNA 變性效果較強，因此，一般的 DNA片段(duan)（GC含量低于50%的目的片段）不(bu)推薦(jian)使用2×GC buffer進行擴增。
● 使用說明：
1.
按照(zhao)下表在0.2ml
PCR管中(zhong)制(zhi)備反應體系：
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成分
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25μl反應體(ti)系
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50μl反應體系(xi)
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終濃度
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Template
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0.05-0.5 μg
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0.1-1 μg
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as you wish
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Primer 1（10
μM）
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0.5 μl
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1 μl
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200nM
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Primer 2（10
μM）
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0.5 μl
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1 μl
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200nM
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2×GC buffer
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12.5 μl
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25 μl
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1×
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dNTP Mixture(10 mM)
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0.5 μl
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1 μl
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200μM each
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Taq (5 U/μl)
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0.25-0.5 μl
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0.5-1 μl
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2.5-5U
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ddH2O
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up to 25 μl
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up to 50 μl
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-
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2. 混勻后，離心(xin)快甩(shuai)將反應液收集到管底。
3. PCR儀如果沒有熱蓋加熱的話(hua)，補加25μl礦物(wu)油。
4. PCR儀上執行(xing)以下程序：
兩步法：
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步(bu)驟
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溫度
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時間
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循環數(shu)
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初始變性
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94℃
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5 min
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1
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變性
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94℃
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30 sec
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25-40*
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退火和延伸
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68℃
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1 min/kb
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最后延(yan)伸
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72℃
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5 min
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1
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*注： PCR 反應條件視模板、引物等的結構條件不同而各異。在實際操作中需根據模板、目的片段的大小、堿基序列和引物的長短等具體情況，設定最佳的反應條件（溫度、時間等）。
1. 怎樣確定擴增片段的GC含量大小(xiao)？
推薦使用Oligo軟件(jian)分(fen)析片段的GC含量(liang)(如(ru)下圖所(suo)示)。
2.
2×GC
buffer能擴(kuo)增(zeng)正常GC含量片段嗎？
2×GC
buffer可以擴增GC含量正常的模板。然(ran)而(er)，由(you)于(yu)GC
buffer有比較強的(de)變(bian)性效(xiao)果(guo)，因此(ci)一般的(de)模板使用GC buffer擴增時，有時會降低擴增效率(lv)。
3.
2×GC
buffer能兼容大(da)多(duo)數PCR用(yong)酶嗎？
2×GC
buffer能兼容大多數PCR酶，比如Taq，Taq
plus，Long Taq等，可以(yi)根據片段長(chang)度以(yi)及(ji)保真性要求選擇(ze)不同的(de)酶。
4. 使用GC
buffer擴增時，為什么推薦使用兩步(bu)法？
由于目的片(pian)段GC含量高(gao)，引物的(de)Tm值(zhi)往往會比較高，在(zai)PCR時(shi)，當(dang)退火溫(wen)度和延伸溫(wen)度差距較小時(shi)，比如(ru)退火溫(wen)度超過60℃時，退火溫(wen)度和(he)延伸溫(wen)度可以設成同一數值(zhi)，一般(ban)為(wei)68℃。
2×GC buffer
lane 1-5: Rice 390bp fragement(GC% 77.1%)
lane 6-10: Rice 760bp fragement(GC% 72.9%)
lane 1 and 6: TaKaRa 2×GC buffer I
lane 2 and 7: TaKaRa 2×GC buffer II
lane 3 and 8: RTB3101 2×GC buffer
lane 4 and 9: RTB3106 10×Taq PCR buffer
lane 5: Rice 390bp，RTB3101 2×GC buffer, 三(san)步法擴增(zeng)
lane 10: Rice 760bp，RTB3101 2×GC buffer, 三步法(fa)擴增
