Real Taq DNA Polymerase
● 儲存(cun)條件(jian):-20℃ 保(bao)存
● 濃 度(du): 5 U/ml
● 產(chan)品簡(jian)介(jie)
Real Taq
DNA Polymerase是從克隆有Thermu aquaticus DNA Polymerase基因的大腸桿菌經誘導表達后分(fen)離純化的,其分(fen)子量為94 KD。具有5’-3’DNA聚合酶(mei)活性(xing)和5’-3’外(wai)切(qie)核酸酶活性,無3’-5’外切(qie)酶(mei)活性。在PCR反應中,Real Taq DNA Polymerase延伸速度為1-2 kb/分鐘,產物3’端帶A,可直接用TA載體克隆。
● 活性定義
1單位(U) Real Taq DNA Polymerase活力定義為在74℃、30分鐘內,以活性化的(de)大馬哈(ha)魚精子DNA作為模板/引物,將10 nmol脫(tuo)氧核苷酸摻入到酸不(bu)溶物質所需的酶量。
● 酶貯(zhu)存(cun)緩沖液(ye)
20 mM Tris-HCl (pH 8.0);0.1 mMEDTA;1 mMDTT;100 mMKCl ; Stabilizers; 50% glycerol
● 10×Taq Buffer
200
mM Tris-HCl (pH 8.4);200
mMKCl;15 mMMgCl2; 其它成分。
● 適用范圍
一般(ban)用(yong)于DNA片段的PCR擴增、DNA標記、引(yin)物延伸、序列(lie)測定、平末端加A等(deng),產物可(ke)以直(zhi)接(jie)用于T/A載體(ti)克隆(long)。
● 反應舉(ju)例(li):
注(zhu)意:以(yi)下(xia)舉例為常規(gui)PCR反應(ying)系統,僅(jin)供參(can)考(kao)。實際(ji)反應(ying)條件(jian)因模板、引物(wu)等的(de)結(jie)構不同而各(ge)異,需(xu)根(gen)據模板、目的(de)片段(duan)的(de)大小、堿基序(xu)列和引物(wu)長短等具體情(qing)況,設(she)定最(zui)佳反應(ying)條件(jian)。
以人基因組DNA為模板,擴增1 kb的片段
1. 反(fan)應體系的建立(li):50 ml反(fan)應體系如下(可根據(ju)比例放大或縮小反應體(ti)系(xi)):
Template
|
<1mg
|
Primer
1(10 mM)
|
1 ml
|
Primer
2(10 mM)
|
1 ml
|
10×Taq Buffer
|
5 ml
|
dNTP
Mixture(10 mM)
|
1 ml
|
Taq
(5 U/ml)
|
0.5 ml
|
ddH2O
|
補至 50 ml
|
2. PCR反應(ying)循(xun)環(huan)的設(she)置:
94℃ 3 min
94℃ 30 sec
55℃ 30 sec 30
cycles
72℃ 1 min
72℃ 5 min
3. 結果檢測:反(fan)應(ying)結束后(hou)取5 ml反應產物,瓊脂糖凝膠電泳(yong)檢測。