RealPAGE Native BN/CN 預制膠(U型板，通用型，12孔)
RealPAGE Native BN/CN Precast Gels(U Type Plate,Universal,12 Wells)
● 貨品規格：
|
貨號
|
名稱(cheng)
|
分離范圍
|
規格
|
保存(cun)
|
|
RTD6138-0312
|
3-12% RealPAGE Native BN/CN 預(yu)制膠
(U型板，通用型，12 孔(kong))
|
30-10000 kD
|
10板
|
4℃
|
|
RTD6138-0416
|
4-16% RealPAGE Native BN/CN 預制膠
(U型板，通(tong)用型，12 孔)
|
15-1000 kD
|
10板
|
4℃
|
● 產品簡介：
Blue/Clear Native PAGE（BN/CN-PAGE）是一(yi)種從生(sheng)物(wu)樣品（質(zhi)膜，胞漿等(deng)）中(zhong)分(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)(li)分(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)量10 kD-10000 kD 范圍的(de)蛋(dan)(dan)白質(zhi)復(fu)合物(wu)的(de)電(dian)泳(yong)技術。其原理是用溫和去污劑(如 DDM，digitonin)將蛋(dan)(dan)白復(fu)合體從細胞膜中(zhong)以(yi)近似天(tian)然的(de)狀(zhuang)態分(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)(li)出(chu)來，Blue Native PAGE （BN-PAGE）是用考馬斯亮藍 G-250 代替(ti) SDS與蛋(dan)(dan)白結(jie)合而(er)(er)使其帶負電(dian)荷，根據蛋(dan)(dan)白分(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)量不同在(zai) PAGE膠中(zhong)得到分(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)(li)；Clear Native PAGE（CN-PAGE）是電(dian)泳(yong)緩(huan)沖液中(zhong)不加(jia)入任何染(ran)料，電(dian)泳(yong)中(zhong)始(shi)終保(bao)持(chi)蛋(dan)(dan)白的(de)天(tian)然電(dian)荷和活性(xing)狀(zhuang)態，然而(er)(er)，其蛋(dan)(dan)白的(de)分(fen)(fen)(fen)(fen)辨率(lv)要低(di)于(yu)(yu)Blue Native PAGE。另外，BN-PAGE由(you)于(yu)(yu)考馬斯亮藍G-250存在(zai)，使蛋(dan)(dan)白都(dou)覆蓋上(shang)負電(dian)荷，可以(yi)分(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)(li)堿(jian)性(xing)蛋(dan)(dan)白（pI＞7）；而(er)(er)CN-PAGE只適合于(yu)(yu)酸性(xing)蛋(dan)(dan)白（pI＜7）的(de)分(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)(li)。
本產(chan)品(pin)可以用(yong)于分離(li)分子(zi)量在 10 kD-10000 kD 的蛋白(bai)復合體，樣品(pin)可以來(lai)于胞(bao)漿、細胞(bao)總裂解液、細胞(bao)膜、線粒體膜和葉綠體膜等。電泳后(hou)可直接(jie)用(yong)于考染(ran)、銀(yin)染(ran)、Western 雜交、SDS-PAGE電泳、蛋白(bai)純化、蛋白(bai)活性檢測(ce)等分析實驗，也可直接(jie)用(yong)于電洗脫制備(bei)蛋白(bai)。
● 運輸和貯存：
本產品(pin)常溫運輸；凝膠4-8℃貯存，不要冷凍；有效期12個月。
● 使用說明：
1. 樣品制備：
該產品不含樣品制備的相關試劑，根據樣品種類選擇不同提取方法。植物類囊體BN樣品制備可以選擇植物類囊體膜提取試劑盒（貨號:RTU5002）；動物總蛋白BN樣品制備可以選擇
動物胞漿活性蛋白提取試劑盒(貨號:RTD8106)；動物膜蛋白BN樣品制備可以選擇動物膜蛋白提取試劑盒（貨號:RTD8111,RTD8112）；動物線粒體BN樣品制備可以選擇動物線粒體提取試劑盒（貨號:RTD8115和RTD8116)。
2. 電泳：
2.1 拆開預制膠包裝，將預制膠安裝在合適的電泳槽中。
注：伯樂Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列電泳槽請確保密封條的安裝方向（下圖）。
六一其他系列，君意東方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等電泳槽可以直接使用預制膠。
不兼容Thermol系列電泳槽。
2.2 準備電泳緩沖液：
將10×BN/CN PAGE電泳緩沖液（干粉）溶于500 ml滅菌水中，徹底溶解，測定pH應為7.0左右，不要調節pH。用前稀釋10倍即配成1×BN/CN PAGE電泳緩沖液。
2.2.1 CN-PAGE電泳：
陽極緩沖液和陰極緩沖液均直接使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖液進行電泳。
2.2.2 BN-PAGE電泳：
陽極緩沖液使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖液，陰極緩沖液按照下表配制：
|
|
1×藍色陰極緩(huan)沖液
|
|
|
150 ml
|
|
10×BN/CN PAGE電泳緩沖液
|
15 ml
|
|
2% G-250 染料（電泳用）
|
1.5 ml
|
|
超純水(shui)
|
定容至(zhi)150 ml
|
2.3準備樣品：
2.3.1 CN-PAGE電泳：
|
總體(ti)(ti)積
|
10 μl
|
|
蛋(dan)白樣品
|
x μl
|
|
4×BN/CN-PAGE蛋白上樣緩沖液
|
2.5 μl
|
|
超純水
|
補至10 μl
|
|
|
不要加熱(re)
|
2.3.2 BN-PAGE電泳：
2.3.2.1 植物類囊體膜蛋白電泳：
|
總體積
|
10
μl
|
|
|
含去垢(gou)劑樣品*
|
|
植物類囊體膜蛋白(bai)樣品
（2%DDM增溶）
|
x μl
|
|
4×BN/CN-PAGE蛋白(bai)上樣(yang)緩(huan)沖液
|
2.5 μl
|
|
5%
G-250染料（蛋白上(shang)樣(yang)）
|
1 μl
|
|
超純水
|
補至10 μl
|
|
|
不(bu)要加(jia)熱
|
*植物類囊體膜蛋白電泳中，含去垢劑樣品中染料加入按照以下原則：
植物類囊體樣品中G250終濃度為去垢劑終濃度的1/4。例如樣品中DDM（n-Dodecyl β-D-maltoside，β-DM， n-十二烷基-β-D-麥芽糖苷）終濃度為2%，則需要G-250終濃度為0.5%。10 μl蛋白樣品中需要加5%
G-250染料1 μl。
2.3.2.2 動物線粒體BN樣品電泳：
|
總(zong)體(ti)積
|
10
μl
|
|
|
含去垢劑樣品(pin)*
|
|
動物線粒(li)體(ti)BN樣品
（1%DDM增溶(rong)）
|
x μl
|
|
4×BN/CN-PAGE蛋白(bai)上樣緩(huan)沖液
|
2.5 μl
|
|
5%
G-250染料（蛋白上樣(yang)）
|
0.25 μl
|
|
超純水(shui)
|
補至10 μl
|
|
|
不(bu)要加熱
|
*動物線粒體BN樣品電泳中，含去垢劑樣品中染料加入按照以下原則：
動物線粒體BN樣品中G250終濃度為去垢劑終濃度的1/8。例如樣品中DDM終濃度為1%，則需要G-250終濃度為0.125%。10
μl蛋白樣品中需要加5% G-250染料0.25
μl。
2.4電泳過程；
2.4.1 CN-PAGE電泳：
電泳內外槽均使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖液。在電泳槽的內槽內加入1×BN/CN PAGE電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔)，輕輕撥出預制膠梳子，用1ml吸頭沖洗加樣孔3次，隨后在電泳槽外槽加入適量的1×BN/CN PAGE電泳緩沖液。
|
CN-PAGE電泳
|
|
恒電壓
|
起始電流
|
結束電流
|
電(dian)泳時間
|
|
120V
|
10-15mA/板(ban)膠
|
4-10mA/板膠
|
50+min
|
|
注：冰浴(yu)電泳
|
2.4.2 BN-PAGE電泳：
BN-PAGE電泳外槽使用1×BN/CN電泳緩沖液；內槽開始電泳使用的是1×藍色陰極緩沖液，冰浴電泳，等待電泳指示前沿到達凝膠1/3處時，將電泳緩沖液更換為1×BN/CN電泳緩沖液，繼續后續電泳，因為過多染料會影響蛋白在凝膠中的遷移以及蛋白后續的轉膜實驗。
BN-PAGE電泳條件（一板(ban)膠）
|
恒電壓(ya)
|
起(qi)始電流(liu)
|
電泳時間
|
緩沖液
|
|
|
120 V
|
8-15 mA
|
20-25 min
|
1×藍色(se)陰極緩沖液
|
冰(bing)浴(yu)電(dian)泳(yong)
|
|
指示前(qian)沿(yan)至凝(ning)膠(jiao)頂部三(san)分(fen)之二(er)處，更換內槽緩沖(chong)液為(wei)1×BN/CN 電泳(yong)緩沖(chong)液
|
|
恒(heng)電壓
|
繼續電(dian)泳時間(jian)
|
結束電流
|
緩沖液
|
|
|
120 V
|
45 min +
|
3-5 mA
|
1×BN/CN電泳(yong)緩沖液
|
冰浴電(dian)泳
|
3. 轉膜：
BN-PAGE轉(zhuan)膜(mo)(mo)必須用PVDF膜(mo)(mo)，不(bu)能(neng)用NC膜(mo)(mo)，因為NC膜(mo)(mo)與G-250結合(he)非常緊密(mi)，不(bu)易去(qu)除(chu)。轉(zhuan)膜(mo)(mo)后(hou)PVDF膜(mo)(mo)上的藍色(se)染料可以(yi)用無水甲醇漂洗去(qu)除(chu)。轉(zhuan)膜(mo)(mo)緩沖液推薦使用10×BN轉(zhuan)膜(mo)(mo)緩沖液（貨號(hao)：BC600P）。
4. 染色：
4.1 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中，加入適量FastBlue蛋白染色液或常規考馬斯亮藍染色液（以剛剛覆蓋過膠面為適），條帶1-2分鐘即可見。
4.2 搖床常溫搖動10-15分鐘至條帶清晰可見。
4.3 加入適量蒸餾水脫色，期間更換1-2次蒸餾水，搖床常溫搖動10-15分鐘至背景干凈。
4.4 觀察保存結果。
5. 實驗示例：
BN-PAGE 3-12% Precast Gel
穩壓120V 1.5 h 1×BN/CN電泳(yong)(yong)緩沖(chong)液(ye) 冰(bing)浴電泳(yong)(yong)
BN-PAGE 4-16% Precast Gel
恒壓 120V 2 h 1×BN/CN電(dian)泳緩沖液 冰浴電(dian)泳
Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒(RTD6139/RTD6138)
使用該產品發表部分文章列表：
1. [2021 IF=10.15] SlRIP1b
is a global organellar RNA editing factor, required for normal fruit
development in tomato plants
Author: Jinyan Li, Keru
Wang, Yongfang Yang, Yao Lu, Kaicheng Cui, Yajing Ji, Liqun Ma, Ke Cheng, Oren
Ostersetzer-Biran, Feng Li, Guiqin Qu, Benzhong Zhu, Daqi Fu, Yunbo Luo,
Hongliang Zhu
Journal: New
Phytologist 2023，Volume237, Issue4，February 2023，Pages 1188-1203
Institution： China Agricultural University
Paper link：
2.
[2022 IF=8.0] Tektin bundle interacting protein, TEKTIP1,
functions to stabilize the tektin bundle and axoneme in mouse sperm flagella
Author: Xinyan Geng,Huijuan Jin,
Lan Xia.Binbin Wang,Suren Chen
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2024)
81:118
Institution: Beijing
Normal University
Paper link：
3.
[2022 IF2.6] What are the main proteins in the hemolymph
of Haemaphysalis flava ticks?
Author: Dan Li , Lei Liu , Zi-ling Liu
, Yuan Tian , Xin Gao，Tian-yin Cheng
Journal: Frontiers in Veterinary Science Published 17
July 2024
Institution: Hunan
Agricultural University
Paper link：