RealPAGE Native BN/CN 預(yu)制膠(U型板，通用型，12孔)
; RealPAGE Native BN/CN Precast Gels(U Type Plate,Universal,12 Wells)
● 貨品規格(ge)：
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貨(huo)號
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名稱
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分離范(fan)圍(wei)
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規格(ge)
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保(bao)存
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RTD6138-0312
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3-12% RealPAGE Native BN/CN 預制膠
(U型板，通用型，12 孔)
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30-10000 kD
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10板
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4℃
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RTD6138-0416
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4-16% RealPAGE Native BN/CN 預制膠
(U型(xing)板，通用型(xing)，12 孔(kong))
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15-1000 kD
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10板(ban)
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4℃
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● 產品簡介：
Blue/Clear Native PAGE（BN/CN-PAGE）是一種從生物(wu)樣(yang)品（質(zhi)膜，胞漿等）中(zhong)(zhong)分(fen)(fen)離分(fen)(fen)子量10 kD-10000 kD 范圍的蛋(dan)白(bai)(bai)質(zhi)復合(he)(he)物(wu)的電泳技術。其(qi)原理是用溫和(he)去(qu)污劑(如(ru) DDM，digitonin)將蛋(dan)白(bai)(bai)復合(he)(he)體從細胞膜中(zhong)(zhong)以(yi)近似天然的狀態(tai)(tai)分(fen)(fen)離出(chu)來，Blue Native PAGE （BN-PAGE）是用考馬斯(si)(si)亮(liang)藍 G-250 代替(ti) SDS與(yu)蛋(dan)白(bai)(bai)結合(he)(he)而(er)使其(qi)帶負電荷(he)，根(gen)據(ju)蛋(dan)白(bai)(bai)分(fen)(fen)子量不同在(zai) PAGE膠中(zhong)(zhong)得到分(fen)(fen)離；Clear Native PAGE（CN-PAGE）是電泳緩沖(chong)液中(zhong)(zhong)不加入(ru)任何染料，電泳中(zhong)(zhong)始終(zhong)保(bao)持蛋(dan)白(bai)(bai)的天然電荷(he)和(he)活性(xing)狀態(tai)(tai)，然而(er)，其(qi)蛋(dan)白(bai)(bai)的分(fen)(fen)辨率要低(di)于(yu)Blue Native PAGE。另(ling)外，BN-PAGE由于(yu)考馬斯(si)(si)亮(liang)藍G-250存在(zai)，使蛋(dan)白(bai)(bai)都(dou)覆蓋上負電荷(he)，可(ke)以(yi)分(fen)(fen)離堿(jian)性(xing)蛋(dan)白(bai)(bai)（pI＞7）；而(er)CN-PAGE只適合(he)(he)于(yu)酸性(xing)蛋(dan)白(bai)(bai)（pI＜7）的分(fen)(fen)離。
本產品可以用于(yu)(yu)分離分子量在 10 kD-10000 kD 的蛋白(bai)(bai)復(fu)合體(ti)，樣(yang)品可以來于(yu)(yu)胞(bao)(bao)漿、細(xi)胞(bao)(bao)總裂(lie)解液、細(xi)胞(bao)(bao)膜、線粒體(ti)膜和葉(xie)綠體(ti)膜等(deng)。電泳(yong)后可直接用于(yu)(yu)考(kao)染、銀染、Western 雜交、SDS-PAGE電泳(yong)、蛋白(bai)(bai)純化、蛋白(bai)(bai)活性檢測等(deng)分析實驗，也可直接用于(yu)(yu)電洗脫制備蛋白(bai)(bai)。
● 運(yun)輸和貯存(cun)：
本產(chan)品(pin)常溫運(yun)輸(shu)；凝膠(jiao)4-8℃貯(zhu)存，不要冷凍；有(you)效期12個(ge)月。
● 使用說(shuo)明：
1. 樣品制備：
該產品不(bu)含(han)樣品制(zhi)(zhi)備的相(xiang)關試(shi)劑，根(gen)據(ju)樣品種類選擇不(bu)同提取(qu)方法。植物類囊(nang)體BN樣品制(zhi)(zhi)備可以(yi)選擇植物類囊(nang)體膜提取(qu)試(shi)劑盒(he)（貨號:RTU5002）；動物總蛋(dan)白BN樣品制(zhi)(zhi)備可以(yi)選擇
動(dong)(dong)物(wu)(wu)胞(bao)漿活性蛋白提取試(shi)劑盒(貨號:RTD8106)；動(dong)(dong)物(wu)(wu)膜(mo)蛋白BN樣品(pin)制(zhi)備(bei)可(ke)以(yi)選(xuan)擇(ze)動(dong)(dong)物(wu)(wu)膜(mo)蛋白提取試(shi)劑盒（貨號:RTD8111,RTD8112）；動(dong)(dong)物(wu)(wu)線(xian)粒(li)體(ti)BN樣品(pin)制(zhi)備(bei)可(ke)以(yi)選(xuan)擇(ze)動(dong)(dong)物(wu)(wu)線(xian)粒(li)體(ti)提取試(shi)劑盒（貨號:RTD8115和RTD8116)。
2. 電泳：
2.1 拆(chai)開預(yu)制膠包裝，將預(yu)制膠安(an)裝在(zai)合適的電泳槽中。
注：伯樂(le)Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能(neng)VE-180，六一24K系列電泳槽(cao)請確(que)保密(mi)封條的安裝(zhuang)方(fang)向（下圖）。
六一其他系(xi)列，君意東方JY-SCZ2/4，百(bai)晶(jing)BG-verMINI等電泳槽(cao)可以直接(jie)使用(yong)預制膠。
不兼容Thermol系列電泳槽(cao)。
2.2 準備電泳緩沖液：
將10×BN/CN PAGE電(dian)泳(yong)(yong)緩沖液(ye)（干粉）溶于500 ml滅菌水中，徹(che)底溶解(jie)，測定pH應為(wei)7.0左(zuo)右(you)，不要(yao)調節pH。用前稀釋10倍(bei)即配成1×BN/CN PAGE電(dian)泳(yong)(yong)緩沖液(ye)。
2.2.1 CN-PAGE電泳：
陽極緩沖(chong)液和(he)陰極緩沖(chong)液均(jun)直接使(shi)用1×BN/CN PAGE電泳緩沖(chong)液進行電泳。
2.2.2 BN-PAGE電(dian)泳(yong)：
陽極緩沖(chong)液使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖(chong)液，陰(yin)極緩沖(chong)液按照(zhao)下表(biao)配制：
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1×藍色陰(yin)極緩沖液(ye)
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150 ml
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10×BN/CN PAGE電泳緩沖液
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15 ml
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2% G-250 染料（電泳用）
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1.5 ml
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超純水(shui)
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定容至150 ml
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2.3準備樣品(pin)：
2.3.1 CN-PAGE電(dian)泳(yong)：
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總體積
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10 μl
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蛋白樣品
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x μl
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4×BN/CN-PAGE蛋(dan)白上樣(yang)緩沖(chong)液
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2.5 μl
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超純水
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補至10 μl
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不要加熱
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2.3.2 BN-PAGE電(dian)泳：
2.3.2.1 植(zhi)物類囊(nang)體膜蛋白電泳：
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總體(ti)(ti)積
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10 μl
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含去垢劑樣品*
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植物類囊體膜蛋白(bai)樣品
（2%DDM增溶）
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x μl
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4×BN/CN-PAGE蛋白上樣緩沖液
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2.5 μl
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5% G-250染(ran)料（蛋白上樣）
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1 μl
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超純水
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補(bu)至10 μl
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不要加熱
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*植物類囊體(ti)膜蛋白(bai)電泳中(zhong)，含(han)去垢(gou)劑樣(yang)品中(zhong)染料加入按照(zhao)以(yi)下(xia)原則：
植物(wu)類囊(nang)體樣品中(zhong)G250終(zhong)濃(nong)(nong)度(du)為去(qu)垢劑終(zhong)濃(nong)(nong)度(du)的1/4。例如樣品中(zhong)DDM（n-Dodecyl β-D-maltoside，β-DM， n-十二烷基-β-D-麥芽糖苷）終(zhong)濃(nong)(nong)度(du)為2%，則需要G-250終(zhong)濃(nong)(nong)度(du)為0.5%。10 μl蛋白樣品中(zhong)需要加5% G-250染料1 μl。
2.3.2.2 動(dong)物線粒體BN樣(yang)品(pin)電(dian)泳：
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總體(ti)積
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10 μl
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含(han)去垢(gou)劑樣品*
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動物(wu)線粒體BN樣(yang)品
（1%DDM增溶）
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x μl
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4×BN/CN-PAGE蛋白上樣(yang)緩沖液
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2.5 μl
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5% G-250染料（蛋白上樣(yang)）
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0.25 μl
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超純水
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補至10 μl
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不(bu)要加熱
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*動物線粒體BN樣(yang)品電泳中，含去垢劑樣(yang)品中染(ran)料加入(ru)按(an)照以下原(yuan)則：
動物線粒(li)體BN樣品(pin)中G250終(zhong)濃(nong)(nong)度(du)為(wei)去垢劑終(zhong)濃(nong)(nong)度(du)的1/8。例如(ru)樣品(pin)中DDM終(zhong)濃(nong)(nong)度(du)為(wei)1%，則(ze)需(xu)(xu)要(yao)G-250終(zhong)濃(nong)(nong)度(du)為(wei)0.125%。10 μl蛋白樣品(pin)中需(xu)(xu)要(yao)加5% G-250染(ran)料0.25 μl。
2.4電泳過程；
2.4.1 CN-PAGE電泳：
電(dian)(dian)泳(yong)(yong)(yong)內(nei)外槽(cao)均使用1×BN/CN PAGE電(dian)(dian)泳(yong)(yong)(yong)緩(huan)(huan)沖(chong)液。在電(dian)(dian)泳(yong)(yong)(yong)槽(cao)的(de)內(nei)槽(cao)內(nei)加入(ru)1×BN/CN PAGE電(dian)(dian)泳(yong)(yong)(yong)緩(huan)(huan)沖(chong)液(讓電(dian)(dian)泳(yong)(yong)(yong)緩(huan)(huan)沖(chong)液漫過加樣孔)，輕輕撥出預制膠梳(shu)子，用1ml吸頭沖(chong)洗加樣孔3次，隨后(hou)在電(dian)(dian)泳(yong)(yong)(yong)槽(cao)外槽(cao)加入(ru)適量的(de)1×BN/CN PAGE電(dian)(dian)泳(yong)(yong)(yong)緩(huan)(huan)沖(chong)液。
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CN-PAGE電泳
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恒電壓
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起始電流
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結束電流(liu)
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電泳時間
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120V
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10-15mA/板膠
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4-10mA/板(ban)膠
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50+min
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注：冰浴電泳
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2.4.2 BN-PAGE電泳：
BN-PAGE電泳外槽使用1×BN/CN電泳緩沖液；內槽開始電泳使用的是1×藍色陰(yin)極緩沖液，冰浴電泳，等待電泳指示前沿到達凝膠1/3處時，將電泳緩沖液更換為1×BN/CN電泳緩沖液，繼續后續電泳，因為過多染料會影響蛋白在凝膠中的遷移以及蛋白后續的轉膜實驗。
BN-PAGE電泳條件（一板(ban)膠）
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恒電壓(ya)
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起始電流
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電泳時間
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緩沖液
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120 V
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8-15 mA
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20-25 min
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1×藍(lan)色陰(yin)極(ji)緩(huan)沖液
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冰浴電泳
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指(zhi)示(shi)前沿至凝膠頂部三分(fen)之二處，更換內槽緩沖(chong)液(ye)為(wei)1×BN/CN 電泳緩沖液
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恒電壓(ya)
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繼(ji)續(xu)電(dian)泳時間(jian)
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結束電流
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緩沖液
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120 V
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45 min +
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3-5 mA
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1×BN/CN電泳緩沖液
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冰(bing)浴電泳
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3. 轉(zhuan)膜：
BN-PAGE轉(zhuan)膜(mo)必須用(yong)PVDF膜(mo)，不(bu)能用(yong)NC膜(mo)，因為NC膜(mo)與G-250結合非常緊密，不(bu)易去(qu)除。轉(zhuan)膜(mo)后PVDF膜(mo)上的藍色染料可以(yi)用(yong)無水甲醇漂洗去(qu)除。轉(zhuan)膜(mo)緩(huan)沖(chong)液(ye)推薦使用(yong)10×BN轉(zhuan)膜(mo)緩(huan)沖(chong)液(ye)（貨(huo)號(hao)：BC600P）。
4. 染(ran)色：
4.1 將電泳(yong)后(hou)的PAGE膠(jiao)取下放入塑(su)料容器中，加入適量(liang)FastBlue蛋白(bai)染色液或常規(gui)考馬斯(si)亮(liang)藍(lan)染色液（以剛剛覆蓋過膠(jiao)面(mian)為適），條帶1-2分(fen)鐘即可見(jian)。
4.2 搖床常溫(wen)搖動10-15分鐘至條帶清(qing)晰可見。
4.3 加入適量蒸餾水(shui)脫色，期間更換(huan)1-2次(ci)蒸餾水(shui)，搖(yao)床常(chang)溫搖(yao)動10-15分(fen)鐘至背景干凈。
4.4 觀察保(bao)存結果。
5. 實驗示例：
BN-PAGE 3-12% Precast Gel
穩壓(ya)120V 1.5 h 1×BN/CN電泳(yong)(yong)緩沖液 冰(bing)浴電泳(yong)(yong)
BN-PAGE 4-16% Precast Gel
恒壓 120V 2 h 1×BN/CN電(dian)泳(yong)緩沖液 冰浴電(dian)泳(yong)
Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒(RTD6139/RTD6138)
使用該產品發表部分文章列表：
1. [2021 IF=10.15] SlRIP1b
is a global organellar RNA editing factor, required for normal fruit
development in tomato plants
Author: Jinyan Li, Keru
Wang, Yongfang Yang, Yao Lu, Kaicheng Cui, Yajing Ji, Liqun Ma, Ke Cheng, Oren
Ostersetzer-Biran, Feng Li, Guiqin Qu, Benzhong Zhu, Daqi Fu, Yunbo Luo,
Hongliang Zhu
Journal: New
Phytologist 2023，Volume237, Issue4，February 2023，Pages 1188-1203
Institution： China Agricultural University
Paper link：
2.
[2022 IF=8.0] Tektin bundle interacting protein, TEKTIP1,
functions to stabilize the tektin bundle and axoneme in mouse sperm flagella
Author: Xinyan Geng,Huijuan Jin,
Lan Xia.Binbin Wang,Suren ;Chen
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2024)
81:118
Institution: Beijing
Normal University
Paper link：
3.
[2022 IF2.6] What are the main proteins in the hemolymph
of Haemaphysalis flava ticks?
Author: Dan Li , Lei Liu , Zi-ling Liu
, Yuan Tian , Xin Gao，Tian-yin Cheng
Journal: Frontiers in Veterinary Science Published 17
July 2024
Institution: Hunan
Agricultural University
Paper link：