普通質粒小(xiao)提試劑盒（目錄(lu)號：RTP2102）
● 試劑(ji)盒內容(rong)及保(bao)存：
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試劑(ji)盒組成
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RTP2102-02 （100次）
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RTP2102-03 （200次(ci)）
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貯存
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RNase
A
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300
μl
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600
μl
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-20℃
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Lysis
Dye
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600μl
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2×600μl
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室溫(wen)
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溶液P1
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30
ml
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60
ml
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室溫 （加入RNase A后2-8℃保(bao)存）
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溶(rong)液P2
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30
ml
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60
ml
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室溫(wen)
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溶液P3
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40
ml
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80
ml
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室溫
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漂洗(xi)液PW
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25
ml
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2×25
ml
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室溫(wen)
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洗脫緩(huan)沖(chong)液(ye)EB
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15
ml
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15
ml
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室溫
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質粒(li)吸附柱CP
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100個
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200個(ge)
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室溫
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收集管(guan)（2
ml）
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100個
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200個
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室溫
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說(shuo)明書(shu)
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1份
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1份
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● 儲存條件和效期：
本試劑盒在(zai)室溫（25℃左(zuo)右）干燥條件下，可保存(cun)1年；更長時間的保存可置(zhi)于2–8℃。2–8℃保(bao)存條件下，若溶(rong)液產生沉淀，應在使用前置于37℃下溶解沉淀(dian)至溶液澄(cheng)清后(hou)再使用。單(dan)獨包(bao)裝的RNase
A 在-20℃可(ke)穩定保存1年以上。加(jia)入(ru)RNase
A后(hou)的(de)溶液P1應置于2–8℃保存，可穩定(ding)保存半年。
● 產品簡介及使用說明：
本試(shi)劑盒采(cai)用經典(dian)的(de)堿裂解(jie)法裂解(jie)細菌，再通過離心吸附柱在高鹽狀態下特(te)異性地結合DNA的特性，可以(yi)從1–5ml大腸(chang)桿菌LB培養液(ye)中(zhong)快速提取3–20μg純凈的高拷貝(bei)質粒DNA。提取的質粒可適用于各(ge)種常規操(cao)作，包括酶切、PCR、測序(xu)、連接和轉化等實(shi)驗。然而，對質粒(li)純度要(yao)求(qiu)更高的轉染(ran)實驗（要(yao)求(qiu)無內毒素），此試(shi)劑盒(he)(he)不能達到要(yao)求(qiu)。另外，盡管該(gai)試(shi)劑盒(he)(he)可以抽提較(jiao)大的質粒(li)（>10kb），但我們不推(tui)薦使用。如果(guo)一定要使用，請參考以下方法：加大菌體(ti)(ti)使用量（使用5–10 ml過夜(ye)培養物），同時按(an)照比例(li)增(zeng)加P1、P2、P3的(de)用量；洗(xi)脫緩沖(chong)液(ye)應在70℃預熱，在吸附(fu)和(he)洗脫時可(ke)以適當的延長時間，以增(zeng)加提取(qu)效(xiao)率，其它步驟相(xiang)同。
● 產品特點：
使用了Lysis Dye，菌(jun)(jun)體(ti)裂解是否完(wan)全一目了然。由于(yu)判(pan)斷菌(jun)(jun)體(ti)裂解和中(zhong)和是否徹底更主要取決于(yu)操作者的經驗，所以我(wo)們增加了Lysis Dye（一種能(neng)使裂解/中(zhong)和體(ti)系(xi)變換顏(yan)色(se)的試劑(ji)）來幫助觀察裂解/中和的(de)程(cheng)度。加入P1后，Lysis Dye使菌液變(bian)為渾濁的紅色；加(jia)入P2后，Lysis Dye立即使溶液(ye)變為(wei)澄(cheng)清的(de)紅(hong)色，裂解是否(fou)完(wan)全(quan)只要觀察紅(hong)色溶液(ye)是否(fou)澄(cheng)清，如果紅(hong)色非常(chang)均一，表(biao)明(ming)裂解充(chong)分；在(zai)完(wan)全(quan)裂解的(de)體系中加入P3混(hun)勻(yun)后，體系立即變(bian)為黃(huang)色(se)，任(ren)何紅色(se)的殘留表明沒有完全混(hun)勻(yun)或(huo)者中和不徹底。
● 準備工作：
1 將試劑盒附帶的RNase
A全部加(jia)入到(dao)溶(rong)液P1中（如15ml P1中加入150μl
RNase A），混勻后(hou)4℃貯存(cun)。
2 按照(zhao)標簽所示在漂洗液PW中加入無水乙醇，混勻(yun)后蓋(gai)緊(jin)瓶蓋(gai)后室(shi)溫貯存(cun)備用(yong)。
3 每次使用前請檢查溶液(ye)P2、溶液P3是(shi)否有沉淀生(sheng)成，如果出現沉淀，37℃溫浴至沉淀溶(rong)解(jie)后(hou)再使用。
● 使用Lysis Dye的標準操作步驟(zou)：
如非(fei)指出，所(suo)有離(li)(li)心步驟(zou)均(jun)為使用(yong)臺式離(li)(li)心機在室溫下(xia)離(li)(li)心。
1． 取1–5 ml過夜(ye)培養的(de)菌(jun)液(ye)加入離心管中，10,000g 離心(xin)1分(fen)鐘(zhong)，盡量吸除(chu)上清。
注(zhu)：菌(jun)液較(jiao)多時可以通過幾次離(li)(li)心將菌(jun)體沉淀(dian)收集到(dao)一(yi)個(ge)離(li)(li)心管中。
2． 向菌體(ti)沉淀(dian)的離心管中(zhong)加(jia)入250 μl溶(rong)液P1（請先檢查是否(fou)已加入(ru)RNaseA）和5μl Lysis Dye，使用(yong)移(yi)液(ye)器(qi)或渦旋振蕩器(qi)徹底懸(xuan)浮細菌細胞沉淀，此時(shi)溶(rong)液(ye)為渾(hun)濁的紅色(se)。
注：如(ru)果有未徹底混勻的菌塊(kuai)，會影響(xiang)裂解，導致提(ti)取量(liang)和(he)純度偏低(di)。
3． 加入250 μl溶液P2，溫和地(di)上(shang)下翻轉6–8次(ci)使菌體充分(fen)裂解，此時溶液變為澄清的紅色。
注：溫和地混合，不要(yao)劇烈(lie)震蕩，以(yi)免污染基因(yin)組DNA；所用時間絕對不應超過5分鐘 ，以免質粒受到破壞；紅(hong)(hong)色(se)溶液應該(gai)透明均一，如有渾濁紅(hong)(hong)色(se)顆粒，表明裂解不充(chong)分，會大大降(jiang)低質粒提取效(xiao)率。
4． 加入350 μl溶液P3，立即溫(wen)和地上下翻轉，充分(fen)混(hun)勻，混(hun)勻充分(fen)的標(biao)志是溶(rong)液完全(quan)呈透明(ming)(ming)的黃色，如有可見紅色，說明(ming)(ming)混(hun)勻不徹(che)底(di)。10,000g 離(li)心(xin)10分(fen)鐘。
注：P3加入(ru)后應立即混(hun)合(he)，避免產生局(ju)部沉淀。
左側未完全混勻，有紅色；右側完全混勻，呈均勻黃色
5． 小心地將上清轉移到吸附柱CP中（吸附柱放入收集管(guan)中），10,000g離(li)心(xin)30–60秒，倒掉收集管中的廢液(ye)，將吸附(fu)柱CP重新放回收集管中。
6． 向吸附(fu)柱CP中加入(ru)700 μl漂洗液(ye)PW（請(qing)先檢查是否已加入無水(shui)乙(yi)醇），10,000g 離心30–60秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP重新放回收集(ji)管中。
7 向(xiang)吸(xi)附(fu)柱CP中(zhong)加入500
μl漂洗液PW，10,000g 離(li)心30–60秒，倒掉收集管中(zhong)的廢液(ye)。
8. 將吸附柱(zhu)CP重(zhong)新放回收集(ji)管中，10,000g 離心2分(fen)鐘。
注：此(ci)步(bu)驟目的(de)是將(jiang)吸附(fu)柱中殘余(yu)的(de)漂洗(xi)液去除，絕對不可(ke)省略，因為(wei)漂洗(xi)液中乙醇(chun)的(de)殘留會影(ying)響后續實驗（酶(mei)切，PCR等(deng)）。
9. 將吸附(fu)柱(zhu)CP置于一個(ge)干(gan)凈的1.5ml離心(xin)管中，向吸附膜(mo)的中央(yang)部位(wei)懸空滴加50–100
μl洗脫緩沖液(ye)EB，室溫放置2分鐘，10,000g離心2分(fen)鐘將質(zhi)粒溶液收集到離(li)心(xin)管(guan)中，-20℃保存。
注(zhu)：● 為了增加質(zhi)粒的回收(shou)效率，可將得到的洗(xi)脫液重新加入離(li)心吸附柱中，再(zai)次離(li)心收(shou)集。
● 洗脫緩(huan)沖液體(ti)積不應少于50
μl，體積過小影響(xiang)回收效率。
● 洗脫液的pH值對(dui)于洗(xi)脫效率有很大影響。若(ruo)用水做洗(xi)脫液應保(bao)證其pH值在7.0-8.5范圍(wei)內(nei)，pH值低于7.0會(hui)降(jiang)低洗脫效(xiao)率。
●不使用Lysis Dye的(de)標準操作步驟：
如(ru)非(fei)指出，所(suo)有離(li)心步驟(zou)均(jun)為(wei)使用臺式離(li)心機(ji)在室(shi)溫下離(li)心。
1． 取1–5 ml過夜(ye)培(pei)養的菌液加入離心管(guan)中，10,000
g離心1分鐘，盡量(liang)吸除(chu)上(shang)清。
注：菌(jun)液(ye)較多時可以通過(guo)幾(ji)次離心將菌(jun)體沉淀收集(ji)到一個(ge)離心管(guan)中。
2． 向菌體(ti)沉淀的離心管(guan)中(zhong)加入250 μl溶液P1（請先檢查是(shi)否已加入(ru)RNaseA），使用移液器(qi)(qi)或渦旋振蕩器(qi)(qi)徹底懸浮細菌細胞沉淀。
注：如果有未徹底混勻(yun)的菌塊，會(hui)影(ying)響裂解，導致提(ti)取量(liang)和純度偏低。
3． 加入250 μl溶液P2，溫和地上下(xia)翻轉(zhuan)6–8次使菌體充分裂解。
注：溫和地混合，不要劇烈震蕩(dang)，以免污(wu)染基因組DNA；所(suo)用時間(jian)絕(jue)對不應(ying)超過5分鐘，以免質粒(li)受(shou)到破(po)壞。
4． 加(jia)入350 μl溶液(ye)P3，立即溫和地上下翻轉6–8次，充分混勻，此時會出現(xian)白(bai)色絮狀沉(chen)淀。10,000g 離心10分鐘。
注(zhu)：P3加入后(hou)應立(li)即混合(he)，避免產生局部沉淀。如(ru)果上清中還有微小(xiao)白色(se)沉淀，可再次離心后(hou)取上清。
5． 小(xiao)心地將上清(qing)轉移到吸附柱CP中（吸附柱放入收集管中(zhong)），10,000g 離心30–60秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP重新(xin)放回收集管中。
6． 向吸附(fu)柱CP中加入700 μl漂洗液PW（請先檢(jian)查是(shi)否已加入無水乙醇(chun)），10,000g 離(li)心30–60秒，倒掉收(shou)集管中的廢液，將(jiang)吸附(fu)柱CP重(zhong)新放回收(shou)集管中。
7 向吸附(fu)柱CP中加入500
μl漂洗液PW，10,000g 離(li)心30–60秒，倒掉收集(ji)管中的廢液。
8. 將吸附柱CP置于收集管中，10,000g 離(li)心2分鐘。
注(zhu)：此步驟目(mu)的(de)是將吸附柱中殘余的(de)漂洗(xi)(xi)液(ye)去(qu)除，絕對不可省略(lve)，因為漂洗(xi)(xi)液(ye)中乙醇的(de)殘留會影響后(hou)續(xu)實驗（酶切，PCR等(deng)）。
9． 將吸(xi)附柱(zhu)CP置于一個干凈的1.5ml離心(xin)管中，向(xiang)吸(xi)附膜的中央部(bu)位(wei)懸空(kong)滴加50–100
μl洗脫緩(huan)沖液EB，室溫放置2分鐘(zhong)，10,000g離心2分鐘將質粒(li)溶(rong)液收集到離心(xin)管中，-20℃保存。
注：● 為了增加質粒的回收(shou)效率，可將得到的洗脫液重新加入離心吸(xi)附柱中，再次離心收(shou)集(ji)。
● 洗脫緩(huan)沖液體(ti)積不應少于50 μl，體積(ji)過(guo)小影響回收效率。
● 洗脫液的pH值對于(yu)洗脫(tuo)效率有很大影響。若(ruo)用水做洗脫(tuo)液應保證其pH值在7.0-8.5范圍內，pH值低于7.0會降低洗(xi)脫效率。
質粒提取試劑盒 RTP2101/RTP2102發表文章
1. A weird DNA band in PCR and its cause.
Author: Chang Shenghe, Sun Wei, Zhou Zhaoxi, Li Jingyang, Dai Minjie, Shu Haiyan
Product: RTP2102 普通質粒小提試劑盒
Journal: Journal of Plant Science & Molecular
Breeding Volume 5 Article 2 2016
Institution：Haikou
experimental station, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences
Paper link：
2. [2017 IF=4.076] Application of Real-Time Quantitative PCR
to Detect Mink Circovirus in Naturally and Experimentally Infected Minks.
Author: Xingyang Cui, Yunjia Shi, Lili Zhao, Shanshan Gu, Chengwei Wei, Yan
Yang,Shanshan Wen, Hongyan Chen and Junwei Ge
Product: RTP2102 普通質粒小提試劑盒
Journal: Fronties in Microbiology May 2018 | Volume 9 | Article 937
Institution：College of
Veterinary Medicine, Northeast Agricultural University
Paper link：
3. [2018 IF=8.063] ATF4 destabilizes RET through nonclassical
GRP78 inhibition to enhance chemosensitivity to bortezomib in human
osteosarcoma
Author: Jie Luo, Yuanzheng Xia, Yong Yin, Jun Luo, Mingming Liu, Hao Zhang, Chao
Zhang, Yucheng Zhao, Lei Yang, and Lingyi Kong
Product: RTP2101 高純質粒小提試劑盒
Journal: Theranostics 2019, Vol. 9, Issue 21
Institution：School of
Traditional Chinese Pharmacy, China Pharmaceutical University
Paper link：
4. [2020 IF=1.336] Isopentenyl Diphosphate Isomerase (IPI)
Gene Silencing Negatively Afects Patchouli Alcohol Biosynthesis
in Pogostemon cablin
Author: Wuping Yan,Yuzhang Yang,Yougen Wu,Jing Yu,Junfeng Zhang,
Dongmei Yang, Zeeshan Ul Haq Muhammad
Product: RTP2102 普通質粒小提試劑盒
Journal: Plant Molecular Biology Reporter Published 27 January 2021
Institution：College
of Horticulture, Hainan University
Paper link：
5. [2022 IF=2] Genomic characterization and phylogenetic
analysis of Aleutian mink disease virus identified in a sudden death mink case
Author: Xingyang Cui, Yan Yang, Fang Wang, Jilong Luo, Ping Zhang, Hongyan Chen,
Lili Zhao, Junwei Ge
Product: RTP2102 普通質粒小提試劑盒
Journal: Comparative Immunology, Microbiology
and Infectious Diseases. Vo101, October 2023, 102052
Institution：College of
Veterinary Medicine, Northeast Agricultural University
Paper link：