Western一(yi)抗二(er)抗去除液（酸(suan)性(xing)，溫和型）
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貨號(hao)
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名稱
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規(gui)格
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WS1090-100ml
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Western一(yi)抗二抗去除液(ye)（酸性，溫和型(xing)）
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100 ml
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WS1090-500ml
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Western一(yi)抗(kang)二抗(kang)去(qu)除液（酸性，溫和型(xing)）
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500 ml
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● 產品簡介：
Western一抗二(er)抗去除液（酸性(xing)，溫和型）(Western Antibody Stripping Buffer，acid，mild type)可(ke)(ke)(ke)以(yi)高(gao)效(xiao)去除印(yin)跡(ji)膜(mo)上的(de)(de)一抗和二(er)抗，而吸附在膜(mo)上的(de)(de)抗原基本不受影響，用(yong)于(yu)Western中轉(zhuan)移(yi)了蛋白(bai)膜(mo)的(de)(de)重復(fu)(fu)利用(yong)，可(ke)(ke)(ke)以(yi)轉(zhuan)一次(ci)膜(mo)，做多次(ci)Western印(yin)跡(ji)實驗，通常可(ke)(ke)(ke)以(yi)重復(fu)(fu)利用(yong)膜(mo)5-8次(ci)（PVDF膜(mo)）。使用(yong)本試劑只需大約20-30分鐘即(ji)可(ke)(ke)(ke)實現(xian)蛋白(bai)膜(mo)的(de)(de)重復(fu)(fu)使用(yong)，然(ran)后可(ke)(ke)(ke)以(yi)進行Western的(de)(de)后續操作。
該產品具有以下幾個優(you)點：
1.可用(yong)于昂貴或珍稀樣本的多次雜(za)交；
2.有利于用不(bu)(bu)同(tong)抗體分析單次印跡上的不(bu)(bu)同(tong)蛋白(bai)，比如(ru)不(bu)(bu)同(tong)亞型的抗體；
3.有利(li)于(yu)對異常(chang)結果(guo)進行重新分析或確(que)認；
4.有利(li)于糾正(zheng)孵錯(cuo)的抗體；
5.節(jie)約試劑成本，并節(jie)約時間。
各種去除液的選擇請點擊Western一抗二抗去除液選擇指南。
● 貯存：
4℃貯存，有效期一年；常溫(wen)運輸。
● 用前必(bi)讀：
1. 理想(xiang)的抗(kang)(kang)體(ti)去除(chu)液應該是(shi)洗脫(tuo)抗(kang)(kang)體(ti)的同(tong)時(shi)，不洗脫(tuo)膜(mo)上結合(he)的蛋白(bai)或者(zhe)不改變抗(kang)(kang)原(yuan)的結合(he)性(xing)質，但是(shi)目(mu)前(qian)沒有一種去除(chu)液可(ke)以做到只(zhi)洗脫(tuo)抗(kang)(kang)體(ti)，而完(wan)全(quan)不洗脫(tuo)膜(mo)上結合(he)的抗(kang)(kang)原(yuan)；也沒有一種去除(chu)液可(ke)以適用于(yu)所有不同(tong)親和度的抗(kang)(kang)原(yuan)抗(kang)(kang)體(ti)復合(he)物(wu)。去除(chu)液洗脫(tuo)能力(li)太強，抗(kang)(kang)原(yuan)也容易被(bei)洗脫(tuo)；太弱，則抗(kang)(kang)體(ti)殘(can)留太高。因此(ci)，從免疫印跡膜(mo)上去除(chu)抗(kang)(kang)體(ti)的方案僅能用于(yu)定性(xing)用途，因為在(zai)每(mei)個抗(kang)(kang)體(ti)清除(chu)循(xun)環中，或多或少都將(jiang)洗去少量膜(mo)上的蛋白(bai)。
2. PVDF膜比硝(xiao)酸(suan)纖(xian)維素膜（NC膜）更堅(jian)韌，因此優(you)先推(tui)薦使用PVDF膜用于涉(she)及抗體剝離(li)的實驗。
3. 從SDS-PAGE凝膠轉印(yin)完成后(hou)立(li)即干(gan)燥PVDF膜(mo)或NC膜(mo)，可改善(shan)蛋白質(zhi)與膜(mo)的結合，特別推薦用于涉(she)及多(duo)次抗(kang)體剝離的實驗。在第一輪抗(kang)體檢測之前，必(bi)須使(shi)用甲(jia)醇將(jiang)干(gan)燥的PVDF膜(mo)潤濕(shi)或用1×TBST將(jiang)干(gan)燥的NC膜(mo)潤濕(shi)。已經結(jie)合(he)有(you)抗(kang)體的(de)膜，決不能使得膜干燥，否則抗(kang)體分子將與膜結(jie)合(he)緊密，很難(nan)剝離。因此，在做(zuo)完一輪ECL發光(guang)檢(jian)測實驗(yan)后，需要用清除(chu)液清除(chu)掉(diao)膜(mo)上的(de)抗體，推(tui)薦將膜(mo)浸泡于1×TBS（非(fei)1×TBST）中4度保存。
4. 檢(jian)測(ce)時，優先(xian)檢(jian)測(ce)低豐度(du)抗原：先(xian)孵(fu)育(yu)(yu)條(tiao)帶(dai)(dai)較弱(ruo)（表達較低）的蛋(dan)白，再孵(fu)育(yu)(yu)條(tiao)帶(dai)(dai)明(ming)顯（表達較高(gao)）的蛋(dan)白，最后(hou)再孵(fu)育(yu)(yu)內參(can)。
5. 如條(tiao)件允許，下(xia)一(yi)輪的抗體雜交(jiao)(jiao)實(shi)驗選(xuan)擇種(zhong)屬來源不(bu)同(tong)(tong)的一(yi)抗（對應不(bu)同(tong)(tong)種(zhong)屬的二(er)抗），減少檢測(ce)的交(jiao)(jiao)叉反(fan)應。
6. 該清除(chu)液適用于ECL發光檢測的膜上抗(kang)體清除(chu)，不適合于膜上直接顯(xian)色（DAB，BCIP/NBT等），不適合熒光檢測。
● 使用說明：
1. 在完成(cheng)Western化學發光檢測后(hou)，NC膜或PVDF膜用適量蒸餾水中震蕩漂洗(xi)5分(fen)鐘；重復漂洗(xi)2次(ci)。
2. 棄(qi)蒸餾水，加(jia)入(ru)適(shi)量(liang)的Western一抗二抗去除(chu)液，常溫（25℃）在(zai)搖床(chuang)上震蕩漂洗20-30分(fen)鐘（轉速70 -80 rpm）。 孵育溫度(du)和時間(jian)會明顯影響抗體(ti)去除(chu)效果，參照(zhao)下表調整(zheng)。
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操作溫度
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震(zhen)蕩清除時間
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備(bei)注
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18℃
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30分鐘以上
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冬天實(shi)驗室氣溫(wen)低時
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25℃
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20-30 分鐘
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常規樣(yang)品(pin)操(cao)作
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37℃
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15-20分鐘
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膜上(shang)蛋白含(han)量(liang)高(gao)的樣品或清除與(yu)膜親和力高(gao)的抗體
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3. 棄去除液，加入足量蒸餾(liu)水，在搖床(chuang)上漂洗2次，每次5分鐘，把去除液徹底(di)漂洗干凈。
注：殘余的(de)(de)去除液會影響后續抗(kang)原抗(kang)體的(de)(de)的(de)(de)結合。
4. 可選步驟(zou)：漂(piao)洗后(hou)的轉印膜(mo)孵育ECL發光(guang)(guang)(guang)液，檢測二抗的清除效率。曝光(guang)(guang)(guang)5分鐘，膜(mo)上看不到發光(guang)(guang)(guang)條帶(dai)表明二抗清除得比較干凈。如(ru)果膜(mo)上能看到條帶(dai)，重復(fu)步驟(zou)2-3。
5．繼續(xu)進行(xing)Western的后(hou)續(xu)操作（封閉-抗體孵育-發光檢測）。
注：建議(yi)每次膜剝離后都(dou)要(yao)進(jin)行重新封閉，以降(jiang)低(di)背景(jing)。
● 實驗示(shi)例：
Western一抗(kang)二抗(kang)去(qu)除液（酸性(xing)，溫和(he)型）檢(jian)測效果圖
樣品(pin)：K562細胞，SDS裂(lie)解液（貨號：RL1060）提取總蛋白
電泳條(tiao)件：12% RealPAGE預制(zhi)膠（貨號:RTD6117-0012） 150 V 1×TGS 80 min
轉膜條件：PVDF膜 孔徑0.45μm，1×RealBlot快(kuai)速轉膜液（貨號：RT5020） 恒流(liu)350 mA 35 min
封(feng)(feng)閉：無蛋白快速封(feng)(feng)閉液（貨號：PF1070）常溫25℃搖床慢搖10 min
抗體去(qu)除步(bu)驟(zou)：膜蒸餾水(shui)漂(piao)洗3次(ci)，加入5 ml Western一抗二抗去(qu)除液（酸性，溫和型），常溫25℃，
搖(yao)床慢搖(yao) 20 min
圖(tu)1：一抗：PCNA鼠單抗 1:5000 ，常溫60 min孵育，羊抗鼠IgG-HRP 1:5000 RT 60min孵育，ECL曝光2秒。
圖2：膜(mo)(mo)第1次清(qing)除(chu)后抗體去除(chu)效(xiao)果檢測：膜(mo)(mo)水漂洗3次，TBST漂洗1次，ECL曝(pu)光5分鐘，膜(mo)(mo)上幾(ji)乎無可(ke)見條帶(dai)，說明二抗去除(chu)干凈。
圖3：膜第1次清除(chu)后，GAPDH檢測： GAPDH兔(tu)多抗 1:3000 RT 60 min孵育，羊抗兔(tu)IgG-HRP 1:5000 ; RT 60min，ECL曝光30秒。
圖4：膜第2次清除(chu)后(hou)，H3檢測(ce)： H3鼠單抗(kang) 1:10000 RT 60 min孵育(yu)，羊抗(kang)鼠IgG-HRP 1:5000 RT 60min孵育(yu)，ECL曝光3秒。
圖5：膜第3次清除后(hou)，β-Actin檢(jian)測：β-Actin鼠單(dan)抗(kang) 1:5000 RT 60 min孵育，羊抗(kang)鼠IgG-HRP 1:5000 RT 60min孵育，ECL曝光29秒。
圖(tu)6：膜第4次清除后(hou)，PCNA檢測：PCNA鼠單抗 1:5000 RT 60 min孵(fu)育(yu)，羊抗鼠IgG-HRP 1:5000 RT 60min孵(fu)育(yu)，ECL曝光2秒。