海角国精产品三区二区三区,91精品国产综合久久福利,国产精品无码亚一区二区三区,国产成人精品免费视频www,偷拍视频对白不卡高清精品

Western一抗(kang)(kang)二抗(kang)(kang)去除液（強堿，劇烈型）

● 產品簡介：

Western一(yi)抗(kang)二(er)抗(kang)去除液（強堿，劇烈型）(Western Antibody Stripping Buffer，basic，harsh type)可(ke)(ke)(ke)以(yi)高效去除印跡膜(mo)(mo)(mo)上的一(yi)抗(kang)和二(er)抗(kang)，而吸(xi)附在膜(mo)(mo)(mo)上的抗(kang)原基本不受影響(xiang)，用(yong)于Western中轉(zhuan)移(yi)了蛋白(bai)膜(mo)(mo)(mo)的重(zhong)(zhong)(zhong)復利用(yong)，可(ke)(ke)(ke)以(yi)轉(zhuan)一(yi)次膜(mo)(mo)(mo)，做多次Western印跡實驗，通常可(ke)(ke)(ke)以(yi)重(zhong)(zhong)(zhong)復利用(yong)膜(mo)(mo)(mo)3-5（PVDF膜(mo)(mo)(mo)）。使用(yong)本試劑(ji)只需大約5-10分鐘（NC膜(mo)(mo)(mo)）或15-20分鐘（PVDF膜(mo)(mo)(mo)）即可(ke)(ke)(ke)實現蛋白(bai)膜(mo)(mo)(mo)的重(zhong)(zhong)(zhong)復使用(yong)，然后(hou)可(ke)(ke)(ke)以(yi)進行Western的后(hou)續操(cao)作。

該產品(pin)具有以下幾個優點(dian)：

1.可(ke)用于昂貴或(huo)珍稀樣(yang)本的多次雜交；

2.有利(li)于用不同抗體(ti)分析單(dan)次印跡上的不同蛋白，比如不同亞型的抗體(ti)；

3.有利(li)于對(dui)異(yi)常結果進行重新分析或確認；

4.有(you)利于(yu)糾(jiu)正孵(fu)錯(cuo)的抗體；

5.節約試(shi)劑成本，并節約時間。

各種去除液的選擇請點擊Western一抗二抗去除液選擇指南。

● 貯存：

   常(chang)溫貯存，有效期一年；常(chang)溫運(yun)輸。

● 用前必讀：

1. 理(li)想的(de)抗(kang)(kang)體去(qu)除(chu)(chu)(chu)液應該是洗(xi)(xi)(xi)脫抗(kang)(kang)體的(de)同時，不洗(xi)(xi)(xi)脫膜(mo)(mo)上結合(he)(he)的(de)蛋白(bai)或者不改變抗(kang)(kang)原(yuan)的(de)結合(he)(he)性質，但是目前沒(mei)有一種去(qu)除(chu)(chu)(chu)液可(ke)(ke)以做到只洗(xi)(xi)(xi)脫抗(kang)(kang)體，而完全不洗(xi)(xi)(xi)脫膜(mo)(mo)上結合(he)(he)的(de)抗(kang)(kang)原(yuan)；也沒(mei)有一種去(qu)除(chu)(chu)(chu)液可(ke)(ke)以適用(yong)于(yu)所有不同親和度的(de)抗(kang)(kang)原(yuan)抗(kang)(kang)體復合(he)(he)物。去(qu)除(chu)(chu)(chu)液洗(xi)(xi)(xi)脫能力太(tai)強(qiang)，抗(kang)(kang)原(yuan)也容易被洗(xi)(xi)(xi)脫；太(tai)弱(ruo)，則抗(kang)(kang)體殘(can)留太(tai)高。因(yin)此，從免疫(yi)印跡(ji)膜(mo)(mo)上去(qu)除(chu)(chu)(chu)抗(kang)(kang)體的(de)方案僅能用(yong)于(yu)定性用(yong)途，因(yin)為在(zai)每(mei)個抗(kang)(kang)體清除(chu)(chu)(chu)循環中，或多或少都將(jiang)洗(xi)(xi)(xi)去(qu)少量膜(mo)(mo)上的(de)蛋白(bai)。

2. PVDF膜(mo)比(bi)硝酸(suan)纖維素膜(mo)（NC膜(mo)）更堅(jian)韌，因此優先推薦使用PVDF膜(mo)用于涉及抗體(ti)剝(bo)離的實驗。

3. 從(cong)SDS-PAGE凝膠轉(zhuan)印完成后立即干(gan)燥(zao)PVDF膜(mo)或NC膜(mo)，可改(gai)善蛋白質與膜(mo)的結合，特(te)別推薦用(yong)于涉及(ji)多次(ci)抗體剝(bo)離的實驗。在第(di)一輪(lun)抗體檢(jian)測之前，必須使用(yong)甲醇將(jiang)干(gan)燥(zao)的PVDF膜(mo)潤濕或用(yong)1×TBST將(jiang)干(gan)燥(zao)的NC膜(mo)潤濕。已(yi)經結合有抗(kang)體的膜(mo)，決不能使得膜(mo)干(gan)燥，否則(ze)抗(kang)體分子將與膜(mo)結合緊密(mi)，很難(nan)剝離。因此，在做完(wan)一輪ECL發光檢測實驗后，需要用清除液清除掉膜上(shang)的抗體，推薦將膜浸泡于1×TBS（非(fei)1×TBST）中4度(du)保存。

4. 檢(jian)測時(shi)，優先(xian)檢(jian)測低豐度抗(kang)原：先(xian)孵育(yu)(yu)條(tiao)帶(dai)較弱（表(biao)達較低）的(de)蛋白(bai)，再孵育(yu)(yu)條(tiao)帶(dai)明顯(xian)（表(biao)達較高）的(de)蛋白(bai)，最后(hou)再孵育(yu)(yu)內參。

5. 如條件允許，下一(yi)輪(lun)的(de)抗體雜交(jiao)實驗(yan)選擇種(zhong)屬(shu)(shu)來(lai)源不(bu)(bu)同(tong)的(de)一(yi)抗（對應不(bu)(bu)同(tong)種(zhong)屬(shu)(shu)的(de)二抗），減(jian)少檢測的(de)交(jiao)叉反應。

6. 該清(qing)除液適(shi)(shi)用于(yu)ECL發光(guang)(guang)檢測(ce)的膜(mo)上抗體清(qing)除，不適(shi)(shi)合于(yu)膜(mo)上直接顯(xian)色（DAB，BCIP/NBT等(deng)），不適(shi)(shi)合熒光(guang)(guang)檢測(ce)。

● 使(shi)用說明(ming)：

1. 在完(wan)成Western化學發光檢測后，NC膜或PVDF膜用(yong)適(shi)量蒸餾(liu)水(shui)中震(zhen)蕩漂(piao)洗(xi)5分鐘；重復(fu)漂(piao)洗(xi)2次。

2. 棄蒸餾水(shui)，加入適量的Western一抗二抗去除(chu)液，在搖床(chuang)上(shang)震(zhen)蕩漂洗(xi)清除(chu)抗體。

孵育溫度(du)和時間會(hui)明顯影響抗體去除效果，參照下表調整。

3. 棄(qi)去除液，加入足(zu)量蒸餾水，在搖床上漂洗2次(ci)，每次(ci)5分鐘，把(ba)去除液徹底漂洗干凈。

  注：殘余(yu)的(de)(de)去除液會影響后續(xu)抗原抗體的(de)(de)的(de)(de)結合。

4. 可選步(bu)驟(zou)：漂洗后的(de)轉印膜(mo)孵育(yu)ECL發光液，檢測(ce)二抗的(de)清除效率。曝光5分鐘(zhong)，膜(mo)上(shang)看(kan)不(bu)到(dao)發光條帶表明二抗清除得(de)比較干凈。如果膜(mo)上(shang)能看(kan)到(dao)條帶，重復步(bu)驟(zou)2-3。

5．繼(ji)續(xu)進行Western的(de)后續(xu)操作（封閉-抗體(ti)孵育-發光檢測）。

   注：建議每次膜(mo)剝離后都要(yao)進(jin)行重新封(feng)(feng)閉，以降(jiang)低背景(jing)。優先選用(yong)5%脫脂奶粉（貨號(hao)：WN1070）封(feng)(feng)閉，推薦常溫(wen)封(feng)(feng)閉1小時(shi)；使用(yong)Western無蛋(dan)白快速封(feng)(feng)閉液（貨號(hao)：PF1070）時(shi)，NC膜(mo)需要(yao)封(feng)(feng)閉60分(fen)鐘(zhong)；PVDF膜(mo)可以封(feng)(feng)閉10分(fen)鐘(zhong)。

● 實驗示例：

Western一抗二抗去(qu)除液（堿性，劇烈型）檢測效果圖

Western一抗二抗清除液（堿(jian)性(xing)，劇(ju)烈型）檢測效果圖

樣(yang)品(pin)：K562細(xi)胞，SDS裂(lie)解液（貨號：RL1060）提取總(zong)蛋白(bai)；

電(dian)泳：4-20% RealPAGE預(yu)制膠（貨(huo)號:RTD6117-0420）， 200 V 1×TGS  56 min

轉膜(mo)：NC膜(mo)，1×RealBlot快速(su)轉膜(mo)液（貨號(hao)：RT5020）400 mA 40 min

圖1：5%脫脂(zhi)奶粉封閉液(ye)（貨號(hao)：WN1070）  RT  60 min；一抗(kang)：Santa β-Actin鼠(shu)單抗(kang)（SC-47778） 1:2000  RT 60min；二抗(kang)：羊抗(kang)鼠(shu)IgG-HRP 1:5000（貨號(hao)：HGM1060）  RT 60min；ECL自(zi)動曝光3秒

圖2：膜加入Western一抗(kang)二抗(kang)清除液（堿性，劇(ju)烈型），第(di)1次清除，常溫25度(du)，搖床5 min，ECL自動曝光5分鐘(zhong)，膜上二抗(kang)條帶去除干凈(jing)。

圖3：5%脫脂奶粉封閉液（貨(huo)(huo)號(hao)(hao)：WN1070），常溫搖床60分鐘，PCNA 1:5000（貨(huo)(huo)號(hao)(hao)：APM5012）  RT 60min，羊(yang)抗鼠(shu)IgG-HRP 1:5000 （貨(huo)(huo)號(hao)(hao)：HGM1060）RT 60min，自動(dong)曝(pu)光11秒，β-actin和PCNA同時有條帶，說明圖二中(zhong)actin一抗沒有完全去(qu)除干凈。

圖(tu)4：膜加入Western一(yi)抗(kang)(kang)二抗(kang)(kang)清除(chu)液（堿性，劇(ju)烈型），常溫(wen)24度 5 min第(di)2次清除(chu)抗(kang)(kang)體，

Western無蛋白快速封(feng)閉液（貨號(hao)；PF1070）RT 60分鐘，一抗：Santa β-Actin鼠單抗（SC-47778） 1:4000 RT 60min，羊抗鼠IgG-HRP 1:5000（貨號(hao)：HGM1060）  RT 60min；ECL自動曝光6秒。

圖5：膜加入Western一抗二抗清除液（堿性，劇(ju)烈型）第3次清除 26度 5min，

一抗：Santa β-Actin鼠單(dan)抗（SC-47778） 1:4000  RT 60min；

二(er)抗(kang)：羊抗(kang)鼠IgG-HRP 1:5000（貨號：HGM1060）  RT 60min；ECL自動曝光3分鐘。